傅小紅，姜 偉，萬 婷，張思甜

(南昌市檢驗檢測中心，江西 南昌 330000)

西咪替丁是一類強效H2-受體拮抗劑, 主要通過同時抑制胃酸、胃蛋白酶的分泌而達到治療療效[1]。目前，臨床上主要用于治療應激性胃潰瘍[2]、十二指腸潰瘍[3]、上消化道出血[4]等疾病。近年來，研究還發(fā)現，西咪替丁在治療上呼吸道感染、消化系統(tǒng)疾病、雄性激素增多、病毒感染，以及癌癥治療等方面有治療療效[5-7]。西咪替丁的制劑類型主要有片劑、注射劑、膠囊劑、口服液制劑以及口服混懸劑。其中，西咪替丁片是西咪替丁最常用的劑型，在中國西咪替丁片現有生產企業(yè)319家，涉及批準文號328個。

含量是藥品質量控制中最關鍵性的項目之一。含量的測定是生產企業(yè)把控藥品質量的重要手段，同時含量是藥物生物利用度和療效的基礎。因此建立準確、高效的含量測定方法對準確評估藥品質量具有非凡意義。藥物進入人體，從制劑內釋放出并溶解于體液是被吸收的前提，藥物會因工藝及制劑配方不同而致藥物溶出度有很大差異，從而影響藥物生物利用度和療效。溶出度測定法則是體外模擬藥物釋放過程、評價樣品質量、判斷藥物療效的有效研究手段，是對固體制劑功能性及藥效評價的重要參數。

《中華人民共和國藥典》2020版二部[8]及之前的國內藥典版本都是采用紫外-可見分光光度法(吸收系數法)來測定西咪替丁片的含量及溶出度。相對于雙波長紫外法和高效液相色譜法(HPLC)，由于紫外吸收系數法方法干擾大，準確度低，很難對溶出量進行準確控制，不利于樣品含量及溶出度的準確評價。故本研究通過對比中國藥典、美國藥典[9]、歐洲藥典[10]方法，比較原研藥含量測定方法，對西咪替丁片含量分析方法進行了比較分析，建立了科學有效的含量測定方法，并對方法進行了全面的驗證，進一步準確地反映藥品的含量。此外，本研究還將建立的HPLC法用于西咪替丁片樣品的含量及溶出度的測定，且與《中華人民共和國藥典》2020版中西咪替丁片紫外吸收系數法所測得的含量、溶出度數據進行對比分析，為西咪替丁片的質量控制提供更有效的科學依據。

1 實驗部分

1.1 藥品與試劑

己烷磺酸鈉(分析純，上海展云化工有限公司)；甲醇(色譜純，賽默飛世爾科技公司)；乙醇(色譜純，默克化工技術(上海)有限公司)；磷酸(分析純，西隴化工股份有限公司)；鹽酸(分析純，國藥集團化學試劑有限公司)；西咪替丁對照品(100158-201406，99.8%，中國食品藥品檢定研究院)。實驗用水均為純凈水。此次研究共抽取19批次西咪替丁片，來源于19個廠家。

19個廠家涉及的輔料成分總共有17種，分別為：淀粉、預膠化淀粉、玉米淀粉、蔗糖、糊精、微晶纖維素、羥甲基纖維素、羥丙甲纖維素、羧甲淀粉鈉、十二烷基硫酸鈉、硬脂酸鎂、滑石粉、聚山梨酯80、聚維酮K30、二氧化硅、乙醇、亮藍(均由研究的19個廠家提供)。

1.2 儀器

708-DS溶出試驗儀(安捷倫科技有限公司)；UltiMate 3000高效液相色譜儀(配備二極管陣列檢測器)(賽默飛世爾科技公司)；Sartorius BT 25S 電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；ME204E電子天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)；KQ-500DB型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；THZ-92A氣浴恒溫振蕩器(上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠)。

1.3 色譜條件

色譜柱：Agilent TC-C18(φ4.6 mm×250 mm， 5 μm，安捷倫科技有限公司)；流動相：甲醇-水(體積比300∶700)(每 1000 mL 中含 0.3 mL 磷酸和 0.94 g 己烷磺酸鈉)；流速：1.0 mL/min；檢測波長：220 nm；柱溫：25 ℃；進樣量：10 μL。

1.4 溶液的制備

精密稱取西咪替丁對照品約 10 mg，置于 100 mL 量瓶中，加30%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成 0.1 mg/mL 的溶液，即為含量對照品溶液。取含輔料種類較多的企業(yè)⑤所生產的西咪替丁片50片，研細，精密稱取約相當于 0.1 g 西咪替丁的樣品細粉，置于 100 mL 容量瓶中；加30%甲醇超聲 15 min 使溶解，用30%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過；精密量取續(xù)濾液 5 mL，置于 50 mL 容量瓶中，加30%甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成 0.1 mg/mL 的溶液，即得含量供試品溶液。

精密稱取西咪替丁對照品約 11 mg，置于 100 mL 量瓶中，加鹽酸溶液(0.9→1000)溶解并稀釋至刻度，再取 3 mL 置 100 mL 容量瓶中，用鹽酸溶液(0.9→1000)稀釋至刻度，作為溶出度對照品溶液。參照《中華人民共和國藥典》2020版西咪替丁片溶出度測定法進行測定，取本品6片，以鹽酸溶液(0.9→1000)900 mL 為溶出介質，轉速為 100 r/min，依法操作。經 15 min，取溶液約 10 mL，濾過，精密量取續(xù)濾液 3 mL，置于 100 mL 容量瓶中，用同一溶出介質稀釋至刻度，作為溶出度供試品溶液。

取17種輔料，均稱取 10 mg，置于同一100 mL 的量瓶中；加30%甲醇 10 mL 超聲使溶解，再加流動相定容至刻度，搖勻，即為輔料空白溶液。

2 結果與討論

2.1 波長的選擇

取西咪替丁含量對照品溶液，用二極管陣列檢測器對西咪替丁在200～400 nm 波長處進行波長掃描，測得西咪替丁在 220 nm 波長處有最大吸收，如圖1。因此含量測定方法選擇 220 nm 為檢測波長。

圖1 西咪替丁紫外光譜圖

2.2 專屬性試驗

精密量取輔料空白溶液、含量供試品溶液，按1.3的色譜條件進樣分析，所得色譜圖如圖2、圖3所示。結果顯示，輔料峰均在保留時間 5 min 之前，且峰面積很小，與西咪替丁色譜圖對比分析表明輔料組成對供試品溶含量的測定不產生干擾，符合專屬性的要求。

圖2 輔料空白色譜圖

2.3 流動相的選擇

本次試驗比較了4種不同的流動相：甲醇-水(體積比20∶80) (每 1000 mL 中含 0.3 mL 磷酸)、甲醇-水(體積比25∶75) (每 1000 mL 中含 0.3 mL 磷酸和 0.94 g 己烷磺酸鈉)、甲醇-水(體積比30∶70) (每 1000 mL 中含 0.3 mL 磷酸和 0.94 g 己烷磺酸鈉) 、甲醇-水(體積比35∶65) (每 1000 mL 中含 0.3 mL 磷酸和 0.94 g 己烷磺酸鈉)。結果顯示，流動相以甲醇-水(體積比30∶70) (每 1000 mL 中含 0.3 mL 磷酸和 0.94 g 己烷磺酸鈉)所得色譜峰的保留時間適宜，所得色譜峰峰形對稱尖銳、理論塔板高且達到基線分離。故被選為本方法的流動相，所得色譜圖如圖3所示。

圖3 西咪替丁片供試品溶液色譜圖

2.4 不同提取溶劑的比較

在供試品的提取試驗中，我們進行了以下3種溶劑的比較：甲醇、乙醇、30%甲醇，結果表明3種溶劑中甲醇、乙醇提取的色譜峰分裂，溶劑30%甲醇提取所得色譜峰峰形尖銳、對稱，達到基線分離。因此選擇30%甲醇作為供試品提取溶劑，所得色譜圖如圖3所示。

2.5 不同提取方法和時間的比較

取50片樣品(廠家⑤)研細的細粉適量(約相當于西咪替丁 0.1 g)，精密稱定，分別置于24個 100 mL 容量瓶中。均加30%甲醇，分別取3份樣品超聲10、15、20、30 min、振搖10、15、20、30 min，按含量供試品溶液制備方法制成樣品溶液，按照含量方法測定，以峰面積除以稱樣量的比值(A/m)計算，結果詳見表1。由表1可知，各超聲、振搖時間所得A/m比值相近?？紤]到提取時間及溶出率，選擇超聲 15 min 作為提取時間。

表1 超聲、振搖處理試驗結果

2.6 重復性與穩(wěn)定性試驗

按照含量供試品溶液制備方法制成6份樣品溶液，按含量方法分別測定含量，所得相對偏差為0.4%，結果表明該方法重復性良好。取含量供試品溶液，按含量測定方法，分別于制備后0、2、4、6、8、10、12、24 h 測定，所得相對偏差為0.1%，結果表明西咪替丁樣品溶液在 24 h 內穩(wěn)定。

2.7 方法的線性范圍

精密稱定西咪替丁對照品，分別制成含西咪替丁22.73、56.84、113.67、170.51、227.34、284.18、341.01 μg/mL 的對照品溶液，按照方法測定，以西咪替丁對照質量濃度(μg/mL)為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。y=0.7884x+0.0303，R=1.0000，結果表明西咪替丁在22.73～341.01 μg/mL 范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.8 與紫外吸收系數法的比較

按所建立的HPLC實驗方法，對抽取的19個廠家的樣品分別按1.4溶液的制備制備出含量及溶出度的對照品溶液及供試品溶液進行測定分析，測定結果與《中華人民共和國藥典》2020版西咪替丁片含量、溶出度測定所得的實驗數據進行比較，結果如表2所示。

表2 HPLC法與UV法測定含量、溶出度的比較

從表2中可知，HPLC法測定的含量與中國藥典中紫外吸收系數法所得數據相比，HPLC法所得的19個廠家的含量均值為97.6%，而UV法所得的均值為99.2%；HPLC法測定的溶出度與中國藥典中紫外吸收系數法所得數據相比，HPLC法所得的19個廠家的含量均值為91.2%，而UV法所得的均值為94.5%；HPLC法測定的樣品含量、溶出度普遍比中國藥典中紫外吸收系數法所得的值低1%～4%。由此可知，HPLC法測定所得的含量與溶出度均要比紫外吸收系數法測得的偏低，提示輔料在《中華人民共和國藥典》2020版中西咪替丁片所采用的 218 nm 波長下可能有干擾吸收，導致不同生產企業(yè)因輔料成份差異，使得廠家紫外吸收系數法測定數據偏高。特別是，樣品②中的HPLC法測出的溶出量只有66%，遠低于國內藥典所規(guī)定的溶出度限度，而紫外吸收系數法測定數據則高達86%，對樣品檢驗結果判斷產生影響。

3 結語

本研究建立了測定西咪替丁片的含量及溶出度的高效液相色譜法。研究表明，所建立的方法重復性好，穩(wěn)定性高，且具有專屬性強、準確度高、簡單高效等優(yōu)點。研究將所建立的實驗方法用于19個廠家樣品含量及溶出度的測定，并與實驗結果相比較。結果表明，由于輔料干擾，按照《中華人民共和國藥典》2020版中西咪替丁片紫外吸收系數法所測得含量及溶出度值整體偏高，方法專屬性差、準確度低，不利于含量及溶出度的控制，增加了企業(yè)質量風險。本研究所建立的HPLC方法更適用于西咪替丁片含量及溶出度的測定，為西咪替丁片檢驗標準的提高提供了一定的數據支撐，對提升我國用藥的安全監(jiān)管具有重要意義。