王淵博，牛文琪，張珠明，汪仁莉

（寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院，寧夏 銀川 750021）

應(yīng)對(duì)體內(nèi)外環(huán)境致病因素?fù)p傷時(shí)，動(dòng)物機(jī)體依靠免疫系統(tǒng)的作用起到防御性保護(hù)。在各免疫器官中，淋巴結(jié)對(duì)淋巴竇內(nèi)的淋巴進(jìn)行過(guò)濾，脾臟則對(duì)流過(guò)血竇的血液進(jìn)行過(guò)濾。血淋巴結(jié)屬于次級(jí)淋巴器官，與淋巴結(jié)結(jié)構(gòu)相似，具有產(chǎn)生抗體和過(guò)濾血液的作用。因此，關(guān)于血淋巴結(jié)是解剖器官還是免疫器官，仍備受爭(zhēng)議。

灘羊是一種多用途的地方優(yōu)良綿羊品種，于2000年被列入國(guó)家二級(jí)保護(hù)品種。關(guān)于灘羊的解剖和組織學(xué)結(jié)構(gòu)已有較多研究報(bào)道[1-3]，但關(guān)于其免疫器官，尤其是血淋巴結(jié)的存在以及形態(tài)特征的資料較匱乏。本文選取灘羊腹主動(dòng)脈附近的血淋巴結(jié)進(jìn)行形態(tài)學(xué)方面的初步研究，以期為灘羊局部與全身免疫系統(tǒng)的進(jìn)一步研究提供新資料，豐富免疫病理學(xué)和比較解剖學(xué)的理論知識(shí)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

于鹽池寧鑫牧場(chǎng)內(nèi)選擇健康灘羊4只（2~3歲，雌、雄各半），常規(guī)屠宰，打開(kāi)腹腔，采集腹主動(dòng)脈附近的血淋巴結(jié)和淋巴結(jié)，以10%福爾馬林溶液固定。

1.2 試劑與儀器

主要試劑：無(wú)水乙醇、二甲苯、鹽酸以及H.E染色試劑套裝等均購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司。

主要儀器：生物組織烤片臺(tái)（金華市益迪醫(yī)療設(shè)備有限公司）、輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)（浙江金華科迪儀器設(shè)備有限公司）、數(shù)碼顯微鏡（廈門(mén)麥克奧迪顯微鏡公司）；組織包埋冷凍臺(tái)、包埋機(jī)（常州派斯杰醫(yī)療設(shè)備有限公司）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 血淋巴結(jié)的大體解剖學(xué)觀察

觀察并記錄分布于灘羊腹主動(dòng)脈附近血淋巴結(jié)的解剖學(xué)特征。

1.3.2 血淋巴結(jié)的組織學(xué)觀察

將上述固定好的血淋巴結(jié)，應(yīng)用常規(guī)石蠟切片的制作方法和H.E染色方法制成組織切片，在數(shù)碼顯微鏡下觀察并拍照。

2 結(jié)果與分析

2.1 灘羊血淋巴結(jié)大體解剖學(xué)觀察（見(jiàn)圖1）

由圖1可知，血淋巴結(jié)沿腹主動(dòng)脈分布較多，尤其是在腹主動(dòng)脈背側(cè)，腎動(dòng)脈與髂內(nèi)動(dòng)脈之間的區(qū)域，緊靠血管集中分布。血淋巴結(jié)呈扁圓形或橢圓形，約20~22個(gè)，大小不一，小如針尖，大如黃豆。小的血淋巴結(jié)多分布于脂肪表面，呈淺或深的暗紅色，觸之較軟，表面光滑；切面不平整、濕潤(rùn)，存在較多暗紅色血液。鄰近的淋巴結(jié)遠(yuǎn)大于血淋巴結(jié)，呈灰白色。

圖1 灘羊血淋巴結(jié)大體解剖學(xué)觀察Fig.1 Grossanatomical observation of hemolymph nodesin Tan sheep

2.2 灘羊血淋巴結(jié)組織學(xué)觀察

2.2.1 低倍鏡下灘羊淋巴結(jié)與血淋巴結(jié)的結(jié)構(gòu)（見(jiàn)圖2）

由圖2（a）可知，與鄰近淋巴結(jié)相比，血淋巴結(jié)體積小，外觀也截然不同。

由圖2（b）可知，血淋巴結(jié)由被膜和實(shí)質(zhì)組成，且被膜厚薄不一，實(shí)質(zhì)呈紅藍(lán)相間的顏色分布，與脾臟相似。血淋巴結(jié)皮質(zhì)位于外周，髓質(zhì)位于中央。在血淋巴結(jié)一側(cè)有一個(gè)不明顯的門(mén)部，可以觀察到動(dòng)脈、靜脈以及淋巴管等結(jié)構(gòu)分布。

圖2 低倍鏡下灘羊淋巴結(jié)與血淋巴結(jié)的結(jié)構(gòu)比較（H.E染色）Fig.2 Structural comparison of Tan sheep lymph nodeand hemolymph nodeunder low magnification microscope(H.Estain)

2.2.2 高倍鏡下灘羊淋巴結(jié)與血淋巴結(jié)的結(jié)構(gòu)（見(jiàn)圖3、圖4）

由圖3（a）可知，灘羊血淋巴結(jié)被膜厚薄不一，由平滑肌和致密淋巴組織形成。被膜深入實(shí)質(zhì)較淺，實(shí)質(zhì)內(nèi)小梁不多見(jiàn)或小梁不發(fā)達(dá)，未將實(shí)質(zhì)分割成明顯的小葉。被膜下血竇充滿(mǎn)血液，沿皮質(zhì)內(nèi)血竇延伸向髓質(zhì)。

由圖3（b）可知，血淋巴結(jié)實(shí)質(zhì)由皮質(zhì)和髓質(zhì)組成，兩者之間通過(guò)副皮質(zhì)區(qū)過(guò)渡。皮質(zhì)的致密淋巴組織較多，形成大小不一、數(shù)量不等的淋巴小結(jié)，發(fā)育成熟的淋巴小結(jié)可見(jiàn)明區(qū)和暗區(qū)，淋巴小結(jié)間可見(jiàn)較多充滿(mǎn)血液的血竇。

由圖3（c）可知，血淋巴結(jié)副皮質(zhì)區(qū)內(nèi)可見(jiàn)較多細(xì)胞形態(tài)，包括淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞和紅細(xì)胞等，結(jié)構(gòu)與脾臟的邊緣區(qū)相似度很高，部分淋巴竇內(nèi)未見(jiàn)血液存在。

由圖3（d）可知，血淋巴結(jié)髓質(zhì)中血竇分布較多，竇內(nèi)充滿(mǎn)紅細(xì)胞和白細(xì)胞，血竇間有彌散的淋巴組織分布，淋巴細(xì)胞呈條索狀分布，細(xì)胞以淋巴細(xì)胞為主。

由圖4（a）可知，與血淋巴結(jié)的門(mén)部相對(duì)一側(cè)，被膜內(nèi)可見(jiàn)數(shù)量少、管徑小的淋巴管。由圖4（b）可知，靠近輸入淋巴管一側(cè)被膜附近的血管中只有毛細(xì)血管充滿(mǎn)血液。由圖4（c）可知，皮質(zhì)的淋巴小結(jié)中可見(jiàn)毛細(xì)血管，其內(nèi)部充滿(mǎn)血液或有少許血液。由圖4（d）可知，髓質(zhì)中血竇分布更多，切片中觀察到的小動(dòng)脈和小靜脈內(nèi)部無(wú)血液，大部分髓索間的淋巴竇狹窄，竇內(nèi)血量較少或無(wú)血。

圖4 灘羊血淋巴結(jié)的淋巴管和毛細(xì)血管（H.E染色）Fig.4 Lymphatic vessels and capillaries of Tan sheep hemolymph node(H.Estaining)

3 討論

關(guān)于灘羊血淋巴結(jié)的相關(guān)內(nèi)容在文獻(xiàn)中尚未見(jiàn)報(bào)道，本文旨在對(duì)灘羊血淋巴結(jié)的存在和形態(tài)結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步的研究。在前期已有的工作基礎(chǔ)上，不難發(fā)現(xiàn)腹主動(dòng)脈沿線的血淋巴結(jié)數(shù)量較多，故本試驗(yàn)選擇該區(qū)域的血淋巴結(jié)進(jìn)行初步觀察和研究。灘羊血淋巴結(jié)的組織結(jié)構(gòu)與已經(jīng)報(bào)道的其他動(dòng)物的淋巴器官相似，在本文的描述中也沿用已有的專(zhuān)業(yè)名詞。

3.1 血淋巴結(jié)的分布

并非所有動(dòng)物體內(nèi)均存在血淋巴結(jié)。已有報(bào)道指出，人類(lèi)[4-5]、牛[6]、綿羊[7]、雙峰駝[8]、山羊[9]、犬[10]、大鼠[11]等體內(nèi)有血淋巴結(jié)的存在，且腹腔中分布較多，軀干等處分布較少。本試驗(yàn)前期工作中也發(fā)現(xiàn)灘羊血淋巴結(jié)在大網(wǎng)膜、腸系膜、腹主動(dòng)脈附近、腎動(dòng)脈附近等區(qū)域均有分布，并非主要分布于皮膚下的疏松結(jié)締組織中[8]，且可能在分布區(qū)域上存在較大的種屬差異性。

3.2 血淋巴結(jié)的形態(tài)結(jié)構(gòu)

灘羊血淋巴結(jié)大小不一，小的血淋巴結(jié)分布于脂肪內(nèi)或附近，肉眼不易分辨[4]，很難取材，切片制作過(guò)程中容易丟失；大的血淋巴結(jié)則因顏色更容易分辨。灘羊血淋巴結(jié)特征為暗紅色，呈扁圓形、橢圓形，與上述文獻(xiàn)一致。與大多數(shù)動(dòng)物的血淋巴結(jié)相同，灘羊的血淋巴結(jié)被膜內(nèi)有平滑肌和致密結(jié)締組織，起到協(xié)助調(diào)節(jié)血竇血量的作用。但灘羊血淋巴結(jié)的被膜深入實(shí)質(zhì)的部分較少，實(shí)質(zhì)內(nèi)小梁比淋巴結(jié)少。被膜內(nèi)以及被膜附近可見(jiàn)淋巴管分布，但數(shù)量少、管徑小[11]；被膜外的淋巴管和附近的較大的血管均無(wú)明顯的充血表現(xiàn)。因此，血淋巴結(jié)并不等同于充血的淋巴結(jié)[12-13]，而是獨(dú)立的淋巴器官。被膜附近可見(jiàn)充滿(mǎn)血液毛細(xì)血管，與其鄰近的被膜下也充滿(mǎn)血液，推測(cè)紅細(xì)胞進(jìn)入實(shí)質(zhì)后，通過(guò)淋巴小結(jié)內(nèi)部或外部的淋巴管和毛細(xì)血管之間的吻合進(jìn)入淋巴管[9,14]。

血淋巴結(jié)實(shí)質(zhì)內(nèi)通過(guò)周?chē)蟹植嫉牧馨托〗Y(jié)和中央彌散的髓索及血竇，可以較清楚地區(qū)分外周皮質(zhì)和內(nèi)部髓質(zhì)，皮質(zhì)和髓質(zhì)內(nèi)的血竇充滿(mǎn)血液[4-7]，與其他動(dòng)物具有異質(zhì)性[8]。淋巴結(jié)的淋巴小結(jié)向髓質(zhì)過(guò)渡區(qū)域是副皮質(zhì)區(qū)，在灘羊血淋巴結(jié)中，類(lèi)似的區(qū)域反而更像脾臟的邊緣區(qū)，由紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞以及其他細(xì)胞組成，淋巴小結(jié)內(nèi)的毛細(xì)血管充滿(mǎn)血液。該部位毛細(xì)血管所起作用是否與毛細(xì)血管后微靜脈作用相同，與血液的過(guò)濾和淋巴細(xì)胞的再循環(huán)相關(guān)，仍需進(jìn)一步研究。上述兩種與淋巴結(jié)不同的結(jié)構(gòu)，可能即為一般認(rèn)為的血淋巴結(jié)的功能介于淋巴結(jié)和脾臟之間的組織學(xué)基礎(chǔ)之一。組織切片中可以觀察到，部分皮質(zhì)和髓質(zhì)血管內(nèi)沒(méi)有血液，可能是在過(guò)濾過(guò)程中，血液過(guò)濾和淋巴過(guò)濾途徑不同，只有部分血管參與輸送紅細(xì)胞至血竇或者淋巴竇。

3.3 與血淋巴結(jié)的功能和存在相關(guān)的疑問(wèn)

淋巴結(jié)并非一成不變，會(huì)隨著機(jī)體免疫狀態(tài)改變，出現(xiàn)、增大、縮小，甚至萎縮消失[15]。與淋巴結(jié)具有諸多相似之處的血淋巴結(jié)也存在個(gè)體大小差異明顯，可能也是因所處免疫狀態(tài)不同，出現(xiàn)新生和消亡的變化。靜脈接種病原菌、腫瘤等異物，大鼠的胸腺旁等區(qū)域可見(jiàn)血淋巴結(jié)出現(xiàn)[16]。一些應(yīng)激反應(yīng)過(guò)程中，也會(huì)在腎上腺、胰腺和胸腺處出現(xiàn)血淋巴結(jié)，但這種血淋巴結(jié)被認(rèn)為是淋巴結(jié)內(nèi)含有較多的含鐵血黃素細(xì)胞。因此，部分血淋巴結(jié)有可能是免疫反應(yīng)的產(chǎn)物[17]，或是過(guò)濾紅細(xì)胞的淋巴結(jié)[9]。

腹腔淋巴結(jié)多與黏膜免疫和局部免疫有關(guān)，但血淋巴結(jié)的作用并未得到明確肯定。炎癥的擴(kuò)散和腫瘤的轉(zhuǎn)移會(huì)通過(guò)淋巴管蔓延。在腹腔器官發(fā)生惡性腫瘤后的治療中，淋巴結(jié)清掃程度與治療效果以及惡性腫瘤的復(fù)發(fā)密切相關(guān)[18]，但血淋巴結(jié)在腫瘤發(fā)生或轉(zhuǎn)移過(guò)程中的角色和作用未見(jiàn)研究報(bào)道。血淋巴結(jié)過(guò)濾血液還是過(guò)濾淋巴，血淋巴結(jié)、淋巴結(jié)和血結(jié)是同一結(jié)構(gòu)還是獨(dú)立存在，自發(fā)現(xiàn)起便爭(zhēng)議不斷，有學(xué)者質(zhì)疑是否因研究者的組織學(xué)觀察結(jié)果較片面，因而產(chǎn)生了混淆[19]。因此，若能夠應(yīng)用標(biāo)記技術(shù)或者示蹤定位技術(shù)[20-21]對(duì)血淋巴結(jié)的歸屬進(jìn)行研究，或許可以解答世紀(jì)疑問(wèn)。

4 結(jié)論

綜上所述，結(jié)合大體解剖學(xué)和組織學(xué)的觀察，可以證實(shí)灘羊體內(nèi)存在獨(dú)立的淋巴器官——血淋巴結(jié)，其形態(tài)結(jié)構(gòu)與其他動(dòng)物既有相似，又有差異。灘羊腹主動(dòng)脈附近的血淋巴結(jié)由被膜和實(shí)質(zhì)構(gòu)成，血液廣泛地分布于被膜下與實(shí)質(zhì)間的血竇內(nèi)。灘羊血淋巴結(jié)實(shí)質(zhì)由皮質(zhì)和髓質(zhì)組成，皮質(zhì)內(nèi)有較多的淋巴小結(jié)組成，髓質(zhì)由較多的血竇和彌散淋巴組織組成。