譚秋芬 許芳怡 溫坤
胃癌是全球最常見的惡性腫瘤之一,為了尋找胃癌的治療靶點、監(jiān)測病情及預測預后,需開展大量的胃癌基礎研究,以期找到敏感、特異的分子標志物。多配體聚糖結(jié)合蛋白(Syndecan binding protein,SDCBP)又稱黑色素瘤分化相關蛋白-9(MDA-9),近年研究表明,其參與了多種癌癥的侵襲和轉(zhuǎn)移信號傳導,除了在黑色素瘤轉(zhuǎn)移和腫瘤進展中發(fā)揮作用,還在乳腺癌、尿路上皮細胞癌、腸癌、肝癌等多個腫瘤中高度表達[1]。但其與胃癌之間的關系尚缺乏研究,為此,本研究檢測不同胃組織中SDCBP的表達情況,并分析其與胃癌臨床病理特征及預后的關系。
1.1 研究對象 隨機抽取2017年1月~2020年10月在我院行胃癌根治術患者的癌組織及對應的癌旁組織各60份,均經(jīng)手術病理證實。所有患者在手術前均未接受過放化療、中藥、免疫療法等治療,其中男31例,女29例;年齡42~77歲,平均(58.23±7.62)歲;腫瘤直徑1.3~7.6cm;浸潤深度:T0~T2 38例,T3~T4 22例;按2016年AJCC胃癌分期標準:Ⅰ~Ⅱ期23例,Ⅲ期37例;腫瘤分化程度:低分化39例,中、高分化21例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例。所有標本收集后即刻放入10%中性福爾馬林中保存。
1.2 檢測方法 采用免疫組化染色法檢測SDCBP表達水平。組織切片包埋入石蠟,4μm連續(xù)切片,脫蠟、3%H2O2孵育后用磷酸鹽緩沖液反復沖洗,之后進行EnvisionTM二步法,試劑盒為北京中衫金橋生物技術有限公司產(chǎn)品,嚴格按照試劑盒說明書進行操作。其中所用的兔抗人、鼠抗人抗體均為SantaCruz公司產(chǎn)品,DAB顯色試劑盒為南京博奧生物科技公司產(chǎn)品。
1.3 結(jié)果判定 由兩位觀察者采用雙盲法對結(jié)果進行判定,隨機觀察5個高倍視野,SDCBP為細胞漿染色,按半定量積分方法:①染色強度評分:無著色記0分,黃色記1分,棕黃色記2分,棕褐色記3分;②細胞陽性率評分:視野中陽性細胞所占的比例≤5%計0分,占6%~25%計1分,占26%~50%計2分,占51~75%計3分,>75%計4分。最后將①和②相乘,0~1分為-,2~5分為+,6~8分為++,9~12分為+++。根據(jù)Fromowitz標準:-和+為低表達,++、+++為高表達。
1.4 隨訪 本組患者隨訪最短11個月,最長50個月,平均隨訪(32.72±6.52)個月,無一例患者死于胃癌以外原因。無病生存期定義為自確診日起至疾病復發(fā)轉(zhuǎn)移之間的時間??偵嫫诙x為自確診日起至末次隨訪之間的時間。
1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 23.0統(tǒng)計軟件分析處理數(shù)據(jù),計量資料進行正態(tài)和方差齊性檢驗,符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)用±s表示,多組間比較采用多因素方差分析,計數(shù)資料以率表示,行χ2檢驗,等級資料采用秩和檢驗。采用Log-rank進行生存分析,采用Cox比例風險模型分析影響胃癌預后的相關因素。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。
2.1 不同胃組織中SDCBP的表達情況 SDCBP在胃癌組織中的高表達率為55.0%(33/60),在癌旁組織中的高表達率為3.3%(2/60),差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。
表1 不同胃組織中SDCBP的表達情況(n)
2.2 SDCBP表達與胃癌臨床特征的關系 SDCBP在胃癌組織中的表達水平與患者的性別、腫瘤直徑、TNM分期、腫瘤分化程度無關(P>0.05),與年齡、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(P<0.05)。見表2。
表2 SDCBP表達與胃癌臨床特征的關系[n(%)]
2.3 SDCBP不同表達水平患者的生存情況 SDCBP高表達組的中位無病生存時間和中位總生存時間分別為19個月、28個月,無病生存率和總生存率分別為15.15%(5/33)、36.36%(12/33);SDCBP低表達組的中位無病生存時間和中位總生存時間分別為21個月、34個月,無病生存率和總生存率分別為29.63%(8/27)、66.67%(18/27)。經(jīng)Log-rank檢驗,SDCBP高表達組與低表達組的無病生存率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),而SDCBP高表達組的總生存率明顯低于低表達組(P<0.05)。
2.4 影響胃癌預后的Cox比例風險模型分析 單因素Cox回歸分析顯示,浸潤深度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響胃癌患者無病生存期的危險因素,經(jīng)進一步多因素Cox回歸分析顯示,TNM分期是影響胃癌患者無病生存期的危險因素。見表3。
表3 胃癌患者無病生存期的單因素及多因素Cox回歸分析
單因素Cox回歸分析顯示,浸潤深度、TNM分期、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、SDCBP表達是影響胃癌患者總生存期的危險因素,經(jīng)進一步多因素Cox回歸分析顯示,TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響胃癌患者總生存期的獨立危險因素。見表4。
表4 胃癌患者總生存期的單因素及多因素Cox回歸分析
早期胃癌經(jīng)規(guī)范治療一般預后較好,但臨床上確診時多為局部進展期胃癌,預后不佳,術后易復發(fā),5年生存率不到15%[2]。我國有超過70萬的胃癌患者在診斷時已進入進展期[3],因此患者不得不面臨腫瘤復發(fā)、轉(zhuǎn)移及死亡風險。近些年人們一直在探索新的分子標志物,以期提高胃癌早期診斷、靶向治療及預后判斷的水平。
SDCBP是一種具有多種生物活性的支架-PDZ結(jié)構域蛋白。PDZ結(jié)構域是許多支架蛋白的共同結(jié)構域,可促進蛋白質(zhì)支架和蛋白復合物組裝,不同的蛋白復合物構型可形成很多信號和調(diào)控通路,對很多細胞過程發(fā)揮重要作用。SDCBP在細胞質(zhì)中可與多種跨膜蛋白C-末端的結(jié)構域結(jié)合,從而影響細胞形狀及蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)運和轉(zhuǎn)錄因子的激活等。SDCBP的高表達與多種惡性腫瘤相關,可通過與細胞膜受體蛋白的結(jié)合和分離,參與細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的運輸、細胞骨架的構建和轉(zhuǎn)錄因子的激活,從而提高腫瘤細胞的增殖、黏附、侵襲、轉(zhuǎn)移和腫瘤血管形成能力。有研究表明SDCBP在正常人類細胞和不同來源的人類癌細胞中表達時是一個前轉(zhuǎn)移基因,具有誘導侵襲和轉(zhuǎn)移的能力[4]。癌癥基因組圖譜(The cancer genome atlas,TCGA)數(shù)據(jù)庫顯示,與SDCBP低表達的腫瘤相比,SDCBP高表達的患者預后較差,生存率較低[5]。也有研究顯示SDCBP在調(diào)節(jié)細胞與細胞、細胞與細胞外基質(zhì)的黏附過程中起核心作用,且SDCBP還參與細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導、細胞表面的靶向作用、神經(jīng)突觸傳遞和軸突生長[6]。
本研究結(jié)果顯示,SDCBP在胃癌組織與癌旁組織中的表達差異有統(tǒng)計學意義,證明SDCBP與胃癌關系密切。目前SDCBP對腫瘤影響的機制尚未完全清楚,在黑色素瘤和膠質(zhì)瘤中,SDCBP可通過原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src/p38 MAPK信號通路參與NF-κB活化,從而上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)等NF-κB靶基因的表達,這是一種參與腫瘤細胞侵襲的關鍵分泌金屬蛋白酶[7]。本研究發(fā)現(xiàn)≥60歲胃癌患者的SDCBP高表達比例明顯高于<60歲者,同時有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度為T3~T4期患者的SDCBP高表達比例明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T0~T2者,而不同性別、腫瘤直徑、TNM分期、腫瘤分化程度的胃癌患者SDCBP表達水平無顯著性差異。提示SDCBP高表達對胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)揮重要作用,胃癌導致的壽命損失隨年齡增加呈現(xiàn)先升后降的趨勢,在70~80歲達到高峰[8],而SDCBP在老年胃癌患者中的表達升高,促進腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移,可能是老年患者壽命損失的一個潛在內(nèi)因。
本研究結(jié)果顯示SDCBP的表達對胃癌患者的總生存時間產(chǎn)生影響。經(jīng)Cox比例風險模型分析,排除了SDCBP是影響胃癌患者無病生存期的獨立危險因素,而單因素分析中SDCBP是影響胃癌患者總生存期的危險因素,說明SDCBP作為促基因在腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用,它可能成為評價胃癌發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預后的一個有價值的指標,為指導臨床治療提供新的靶點。本研究局限性,任何一種基因都不可能是決定腫瘤轉(zhuǎn)移的唯一因素,且多因素分析排除了SDCBP是總生存期的獨立危險因素。因此需要進一步的研究與探索,將SDCBP與其他相關因素結(jié)合起來,以提高臨床診斷價值。
綜上,本研究初步揭示了SDCBP在胃癌組織中的表達上調(diào),且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關,由于樣本數(shù)較少,其對胃癌高危預警、早期診斷、靶向治療及預后判斷的價值尚需大樣本、高質(zhì)量研究進一步探討。