譚秋芬 許芳怡 溫坤

胃癌是全球最常見的惡性腫瘤之一，為了尋找胃癌的治療靶點、監(jiān)測病情及預測預后，需開展大量的胃癌基礎研究，以期找到敏感、特異的分子標志物。多配體聚糖結(jié)合蛋白（Syndecan binding protein，SDCBP）又稱黑色素瘤分化相關蛋白-9（MDA-9），近年研究表明，其參與了多種癌癥的侵襲和轉(zhuǎn)移信號傳導，除了在黑色素瘤轉(zhuǎn)移和腫瘤進展中發(fā)揮作用，還在乳腺癌、尿路上皮細胞癌、腸癌、肝癌等多個腫瘤中高度表達[1]。但其與胃癌之間的關系尚缺乏研究，為此，本研究檢測不同胃組織中SDCBP的表達情況，并分析其與胃癌臨床病理特征及預后的關系。

1 材料與方法

1.1 研究對象 隨機抽取2017年1月～2020年10月在我院行胃癌根治術患者的癌組織及對應的癌旁組織各60份，均經(jīng)手術病理證實。所有患者在手術前均未接受過放化療、中藥、免疫療法等治療，其中男31例，女29例；年齡42～77歲，平均（58.23±7.62）歲；腫瘤直徑1.3～7.6cm；浸潤深度：T0～T2 38例，T3～T4 22例；按2016年AJCC胃癌分期標準：Ⅰ～Ⅱ期23例，Ⅲ期37例；腫瘤分化程度：低分化39例，中、高分化21例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例。所有標本收集后即刻放入10%中性福爾馬林中保存。

1.2 檢測方法 采用免疫組化染色法檢測SDCBP表達水平。組織切片包埋入石蠟，4μm連續(xù)切片，脫蠟、3%H2O2孵育后用磷酸鹽緩沖液反復沖洗，之后進行EnvisionTM二步法，試劑盒為北京中衫金橋生物技術有限公司產(chǎn)品，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。其中所用的兔抗人、鼠抗人抗體均為SantaCruz公司產(chǎn)品，DAB顯色試劑盒為南京博奧生物科技公司產(chǎn)品。

1.3 結(jié)果判定 由兩位觀察者采用雙盲法對結(jié)果進行判定，隨機觀察5個高倍視野，SDCBP為細胞漿染色，按半定量積分方法：①染色強度評分：無著色記0分，黃色記1分，棕黃色記2分，棕褐色記3分；②細胞陽性率評分：視野中陽性細胞所占的比例≤5%計0分，占6%～25%計1分，占26%～50%計2分，占51～75%計3分，＞75%計4分。最后將①和②相乘，0～1分為-，2～5分為+，6～8分為++，9～12分為+++。根據(jù)Fromowitz標準：-和+為低表達，++、+++為高表達。

1.4 隨訪 本組患者隨訪最短11個月，最長50個月，平均隨訪（32.72±6.52）個月，無一例患者死于胃癌以外原因。無病生存期定義為自確診日起至疾病復發(fā)轉(zhuǎn)移之間的時間?？偵嫫诙x為自確診日起至末次隨訪之間的時間。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 23.0統(tǒng)計軟件分析處理數(shù)據(jù)，計量資料進行正態(tài)和方差齊性檢驗，符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)用±s表示，多組間比較采用多因素方差分析，計數(shù)資料以率表示，行χ2檢驗，等級資料采用秩和檢驗。采用Log-rank進行生存分析，采用Cox比例風險模型分析影響胃癌預后的相關因素。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同胃組織中SDCBP的表達情況 SDCBP在胃癌組織中的高表達率為55.0%（33/60），在癌旁組織中的高表達率為3.3%（2/60），差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同胃組織中SDCBP的表達情況（n）

2.2 SDCBP表達與胃癌臨床特征的關系 SDCBP在胃癌組織中的表達水平與患者的性別、腫瘤直徑、TNM分期、腫瘤分化程度無關（P＞0.05），與年齡、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關（P＜0.05）。見表2。

表2 SDCBP表達與胃癌臨床特征的關系[n（%）]

2.3 SDCBP不同表達水平患者的生存情況 SDCBP高表達組的中位無病生存時間和中位總生存時間分別為19個月、28個月，無病生存率和總生存率分別為15.15%（5/33）、36.36%（12/33）；SDCBP低表達組的中位無病生存時間和中位總生存時間分別為21個月、34個月，無病生存率和總生存率分別為29.63%（8/27）、66.67%（18/27）。經(jīng)Log-rank檢驗，SDCBP高表達組與低表達組的無病生存率比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），而SDCBP高表達組的總生存率明顯低于低表達組（P＜0.05）。

2.4 影響胃癌預后的Cox比例風險模型分析 單因素Cox回歸分析顯示，浸潤深度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響胃癌患者無病生存期的危險因素，經(jīng)進一步多因素Cox回歸分析顯示，TNM分期是影響胃癌患者無病生存期的危險因素。見表3。

表3 胃癌患者無病生存期的單因素及多因素Cox回歸分析

單因素Cox回歸分析顯示，浸潤深度、TNM分期、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、SDCBP表達是影響胃癌患者總生存期的危險因素，經(jīng)進一步多因素Cox回歸分析顯示，TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響胃癌患者總生存期的獨立危險因素。見表4。

表4 胃癌患者總生存期的單因素及多因素Cox回歸分析

3 討論

早期胃癌經(jīng)規(guī)范治療一般預后較好，但臨床上確診時多為局部進展期胃癌，預后不佳，術后易復發(fā)，5年生存率不到15%[2]。我國有超過70萬的胃癌患者在診斷時已進入進展期[3]，因此患者不得不面臨腫瘤復發(fā)、轉(zhuǎn)移及死亡風險。近些年人們一直在探索新的分子標志物，以期提高胃癌早期診斷、靶向治療及預后判斷的水平。

SDCBP是一種具有多種生物活性的支架-PDZ結(jié)構域蛋白。PDZ結(jié)構域是許多支架蛋白的共同結(jié)構域，可促進蛋白質(zhì)支架和蛋白復合物組裝，不同的蛋白復合物構型可形成很多信號和調(diào)控通路，對很多細胞過程發(fā)揮重要作用。SDCBP在細胞質(zhì)中可與多種跨膜蛋白C-末端的結(jié)構域結(jié)合，從而影響細胞形狀及蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)運和轉(zhuǎn)錄因子的激活等。SDCBP的高表達與多種惡性腫瘤相關，可通過與細胞膜受體蛋白的結(jié)合和分離，參與細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的運輸、細胞骨架的構建和轉(zhuǎn)錄因子的激活，從而提高腫瘤細胞的增殖、黏附、侵襲、轉(zhuǎn)移和腫瘤血管形成能力。有研究表明SDCBP在正常人類細胞和不同來源的人類癌細胞中表達時是一個前轉(zhuǎn)移基因，具有誘導侵襲和轉(zhuǎn)移的能力[4]。癌癥基因組圖譜（The cancer genome atlas，TCGA）數(shù)據(jù)庫顯示，與SDCBP低表達的腫瘤相比，SDCBP高表達的患者預后較差，生存率較低[5]。也有研究顯示SDCBP在調(diào)節(jié)細胞與細胞、細胞與細胞外基質(zhì)的黏附過程中起核心作用，且SDCBP還參與細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導、細胞表面的靶向作用、神經(jīng)突觸傳遞和軸突生長[6]。

本研究結(jié)果顯示，SDCBP在胃癌組織與癌旁組織中的表達差異有統(tǒng)計學意義，證明SDCBP與胃癌關系密切。目前SDCBP對腫瘤影響的機制尚未完全清楚，在黑色素瘤和膠質(zhì)瘤中，SDCBP可通過原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src/p38 MAPK信號通路參與NF-κB活化，從而上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）等NF-κB靶基因的表達，這是一種參與腫瘤細胞侵襲的關鍵分泌金屬蛋白酶[7]。本研究發(fā)現(xiàn)≥60歲胃癌患者的SDCBP高表達比例明顯高于＜60歲者，同時有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度為T3～T4期患者的SDCBP高表達比例明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T0～T2者，而不同性別、腫瘤直徑、TNM分期、腫瘤分化程度的胃癌患者SDCBP表達水平無顯著性差異。提示SDCBP高表達對胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)揮重要作用，胃癌導致的壽命損失隨年齡增加呈現(xiàn)先升后降的趨勢，在70～80歲達到高峰[8]，而SDCBP在老年胃癌患者中的表達升高，促進腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移，可能是老年患者壽命損失的一個潛在內(nèi)因。

本研究結(jié)果顯示SDCBP的表達對胃癌患者的總生存時間產(chǎn)生影響。經(jīng)Cox比例風險模型分析，排除了SDCBP是影響胃癌患者無病生存期的獨立危險因素，而單因素分析中SDCBP是影響胃癌患者總生存期的危險因素，說明SDCBP作為促基因在腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用，它可能成為評價胃癌發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預后的一個有價值的指標，為指導臨床治療提供新的靶點。本研究局限性，任何一種基因都不可能是決定腫瘤轉(zhuǎn)移的唯一因素，且多因素分析排除了SDCBP是總生存期的獨立危險因素。因此需要進一步的研究與探索，將SDCBP與其他相關因素結(jié)合起來，以提高臨床診斷價值。

綜上，本研究初步揭示了SDCBP在胃癌組織中的表達上調(diào)，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關，由于樣本數(shù)較少，其對胃癌高危預警、早期診斷、靶向治療及預后判斷的價值尚需大樣本、高質(zhì)量研究進一步探討。