林志強(qiáng), 王丹

紹興市人民醫(yī)院 1血管疝外科， 2感染外科(浙江紹興 312000)

腹主動(dòng)脈瘤主要表現(xiàn)為腹主動(dòng)脈管壁局限性，嚴(yán)重情況下破裂致大出血，對(duì)患者的生命造威脅[1]。有研究表明[2]，腹主動(dòng)脈瘤在所有動(dòng)脈瘤中的發(fā)病率位居第1位。隨著我國(guó)居民生活水平的提高，人口老齡化加劇，腹主動(dòng)脈瘤的發(fā)病率逐年上升[3]。目前臨床中缺少安全有效的腹主動(dòng)脈瘤的預(yù)測(cè)手段[4]。Fibulin-3是一種細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，廣泛表達(dá)于動(dòng)脈血管系統(tǒng)在內(nèi)的各種組織中，F(xiàn)ibulin-3參與基底膜的組織和彈性纖維的形成，參與基質(zhì)蛋白的相互作用，調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和遷移，此外，F(xiàn)ibulin-3會(huì)刺激血管生成并且參與各種細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)[5]。骨橋蛋白(osteopontin，OPN)被認(rèn)為是合成性感染誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞(infection-induced vascular smooth muscle cells，VSMC)的標(biāo)志物，在腹主動(dòng)脈瘤中的表達(dá)明顯升高，提示在腹主動(dòng)脈瘤中VSMC主要為和成型，而在正常的腹主動(dòng)脈壁中VSMC主要為收縮型VSMC的表型會(huì)在腹主動(dòng)脈瘤中發(fā)生明顯轉(zhuǎn)化[6]。ICAM-1是一種黏附分子，免疫蛋白家族的重要成員之一，在促進(jìn)炎癥粘連、腫瘤惡化轉(zhuǎn)移及機(jī)體免疫調(diào)節(jié)中有著重要作用。其通過(guò)結(jié)合特異性受體，能夠增強(qiáng)炎癥細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞等于內(nèi)細(xì)胞之間的黏附，激活內(nèi)細(xì)胞，使其更易穿透到內(nèi)皮[7-8]。本文旨在探討Fibulin-3、OPN、ICAM-1在腹主動(dòng)脈瘤中的表達(dá)及意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020年2月至2021年2月在我院就診的50例腹主動(dòng)脈瘤患者為AAA組，年齡46～70歲，病程2～7(5.23±2.34)年，體質(zhì)指數(shù)(BMI) 24～29 kg/m2，吸煙35例，飲酒26例，合并疾?。焊哐獕?例，糖尿病6例，慢性阻塞性肺疾病3例，慢性腎臟病5例。選取同時(shí)期在我院體檢的健康人群50例為對(duì)照組，年齡40～75歲，BMI 24～29 kg/m2。兩組一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 基線資料比較

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合腹主動(dòng)脈瘤診斷與治療指南[9]診斷標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)腹主動(dòng)脈瘤病史；無(wú)缺血性心臟病、腦血管疾病病史，無(wú)外周血光疾病及自身免疫性疾?。桓怪鲃?dòng)脈形態(tài)為真性動(dòng)脈瘤、梭形，其直徑為>3 cm；B性超聲檢查可見(jiàn)動(dòng)脈瘤周?chē)鼙憩F(xiàn)動(dòng)脈硬化且多發(fā)；患者入組前未經(jīng)過(guò)任何治療；患者及其家屬對(duì)本研究知情同意，簽署知情同意書(shū)，經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(ZSML-RY-2019-028-07)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：有嚴(yán)重精神疾病，存在認(rèn)知障礙患者；有嚴(yán)重感染或自身免疫疾病患者；嚴(yán)重心臟病或系統(tǒng)性炎癥性疾病或腫瘤疾病患者；周?chē)鷦?dòng)脈出現(xiàn)狹窄性病變，且表現(xiàn)嚴(yán)重患者；下肢深靜脈血栓形成患者；囊狀動(dòng)脈瘤、假性動(dòng)脈瘤或感染性動(dòng)脈瘤患者。

1.2 指標(biāo)檢測(cè)

1.2.1 Fibulin-3、OPN檢測(cè) 采集患者5 mL空腹外周靜脈血，經(jīng)枸櫞酸鈉抗凝后，以3 000 r/min離心10 min，留取血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清Fibulin-3、OPN。(1)取出凍存標(biāo)本，并設(shè)標(biāo)準(zhǔn)曲線的抗體標(biāo)準(zhǔn)濃度。(2)加入抗體標(biāo)準(zhǔn)液和標(biāo)本100 μL至相應(yīng)孔內(nèi)，用封板膠紙封住反應(yīng)孔，室溫孵育120 min。(3)除了空白孔以外，每孔按說(shuō)明書(shū)要求稀釋的生物素標(biāo)注的二抗100 μL，封住板孔。(4)除空白孔外，每孔加已按要求稀釋的酶聯(lián)物100 μL封住板孔。(5)每孔加底物A、B各50 μL避光10～30 min。(6)每孔加終止液50 μL，即刻在450 nm酶標(biāo)儀測(cè)定標(biāo)本的吸光度，畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出血清樣本的表達(dá)水平。

1.2.2 ICAM-1檢測(cè) 采用酶標(biāo)儀雙抗體夾心法測(cè)定ICAM-1水平，將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體，洗滌除去為結(jié)合的抗體及雜質(zhì)，加ICAM-1血清，使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)間，讓標(biāo)本中的抗原體與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物，洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)，加酶標(biāo)抗體使固相免疫符合無(wú)上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合，徹底洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈正相關(guān)。夾心式復(fù)合物中酶催化會(huì)成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量。

2 結(jié)果

2.1 Fibulin-3、OPN、ICAM-1在腹主動(dòng)脈瘤中的表達(dá) AAA組Fibulin-3水平低于對(duì)照組，OPN、ICAM-1水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 Fibulin-3、OPN、ICAM-1在腹主動(dòng)脈瘤中的表達(dá)

2.2 Fibulin-3、OPN、ICAM-1表達(dá)水平與腹主動(dòng)脈瘤患者病理特征關(guān)系 Fibulin-3、OPN、ICAM-1表達(dá)水平在腹主動(dòng)脈瘤患者不同年齡(<60、≥60歲)、性別、高血壓部位比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Fibulin-3、OPN、ICAM-1表達(dá)水平與腹主動(dòng)脈瘤患者腫瘤最大徑(>5 cm、≤5 cm)、有無(wú)吸煙飲酒、有無(wú)心腦血管意外有關(guān)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 Fibulin-3、OPN、ICAM-1水平表達(dá)與腹主動(dòng)脈瘤患者病理特征關(guān)系

2.3 血清Fibulin-3、OPN、ICAM-1對(duì)腹主動(dòng)脈瘤的預(yù)測(cè)價(jià)值 ROC曲線分析血清Fibulin-3、OPN、ICAM-1預(yù)測(cè)腹主動(dòng)脈瘤的曲線下面積(area under the curve，AUC)依次為0.942(95%CI：0.8899～0.9945，P=0.001)、0.616(95%CI：0.470～0.762，P=0.004)、0.868(95%CI：0.768～0.967，P=0.001)、0.869(95%CI：0.779～0.960，P=0.001),見(jiàn)圖1。敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值見(jiàn)表4。

表4 血清Fibulin-3、OPN、ICAM-1診斷腹主動(dòng)脈瘤的效能分析 %

圖1 Fibulin-3、OPN、ICAM-1對(duì)腹主動(dòng)脈瘤的預(yù)測(cè)價(jià)值(ROC曲線)

3 討論

腹主動(dòng)脈瘤是一種嚴(yán)重威脅生命安全的常見(jiàn)疾病，隨著動(dòng)脈瘤的逐漸擴(kuò)張并最終破裂，導(dǎo)致患者死亡[10]。腹主動(dòng)脈瘤的發(fā)病原因尚不清楚，目前認(rèn)為是環(huán)境、遺傳、解剖學(xué)因素、免疫炎癥反應(yīng)、病原微生物、平滑肌細(xì)胞凋亡共同作用的結(jié)果，其病理學(xué)基礎(chǔ)是動(dòng)脈壁彈力纖維和膠原纖維的降解與損傷[11]。隨著腔內(nèi)技術(shù)的進(jìn)步，對(duì)于符合手術(shù)標(biāo)準(zhǔn)腹主動(dòng)脈瘤的治療不在困難，但是對(duì)于腹主動(dòng)脈瘤的早期診斷和小于手術(shù)標(biāo)準(zhǔn)的動(dòng)脈瘤的檢測(cè)仍然是臨床難點(diǎn)[12]。

Fibulin-3也叫EFEMP1，是一種細(xì)胞外機(jī)制糖蛋白，上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等各種細(xì)胞都能分泌和表達(dá)Fibulin-3，F(xiàn)ibulin-3定位在細(xì)胞外基質(zhì)中具有構(gòu)架作用，能夠活化下游信號(hào)通路，比如表皮生長(zhǎng)因子受體。有學(xué)者研究顯示，F(xiàn)ibulin-1和Fibulin-2相比，F(xiàn)ibulin-3的功能知之甚少[13]。有研究中發(fā)現(xiàn)[14]Fibulin-3能修復(fù)高血壓損傷的內(nèi)皮結(jié)構(gòu)，降低Fibulin-3蛋白表達(dá)，可出現(xiàn)明顯的血壓降低，使腹主動(dòng)脈管壁厚度增加，彈力纖維橫徑增大。Fibulin-3會(huì)在多種腫瘤中異常表達(dá)，F(xiàn)ibulin-3是腫瘤促進(jìn)因子，也是腫瘤抑制因子，但是在腹主動(dòng)脈瘤中相關(guān)研究較少[15]。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)[16]，F(xiàn)ibulin-3在結(jié)腸癌和前列腺癌的組織中表達(dá)下降，與患者的診斷標(biāo)志物和預(yù)測(cè)患者的生物標(biāo)記物相關(guān)。但是，關(guān)于Fibulin-3是否參與腹主動(dòng)脈瘤發(fā)展尚未得到論證，需要進(jìn)一步研究[17]。本研究中AAA組患者血清Fibulin-3水平低于對(duì)照組，ROC分析顯示Fibulin-3預(yù)測(cè)腹主動(dòng)脈瘤的AUC達(dá)0.616，敏感度和特異度分別為74.32%、72.41%提示Fibulin-3表達(dá)可用于評(píng)估AAA患者風(fēng)險(xiǎn)。

OPN是一種富含唾液酸的分泌型磷酸化糖蛋白，依分子中的磷酸化及糖基化程度而定[18]。OPN最早是從骨基質(zhì)中分離出來(lái)而得名，隨后發(fā)現(xiàn)許多組織如腎、內(nèi)耳等以及許多病理性組織如炎癥、腫瘤活化的免疫細(xì)胞等均有不同程度的OPN表達(dá)[19]。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)[20]，OPN通過(guò)抵消凋亡及促血管生成的方式發(fā)揮促腫瘤生長(zhǎng)作用，大多數(shù)的實(shí)驗(yàn)證明OPN參與惡性腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移，把OPN基因稱(chēng)為轉(zhuǎn)移基因。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)[21]，惡性腫瘤細(xì)胞的侵襲遷移與淋巴細(xì)胞的歸巢機(jī)制相似，介導(dǎo)機(jī)體應(yīng)激、炎癥、創(chuàng)傷口愈合及心血管分布的調(diào)控，而非機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程所必需的基因所調(diào)控。本研究顯示OPN在預(yù)測(cè)腹主動(dòng)脈瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)方面表現(xiàn)出較高的效能，說(shuō)明OPN表達(dá)升高是腹主動(dòng)脈瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)因子。

ICAM-1是由人的第19對(duì)染色體編碼的單鏈糖蛋白。由于在特定組織中糖計(jì)劃程度不同，分子量介于70～120 kD之間，有5個(gè)結(jié)構(gòu)[22]。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)[23]，它在腫瘤細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞中主要表達(dá)是纖維細(xì)胞，可以彌散在細(xì)胞漿中或集中分布的變化改變其亞細(xì)胞的分布。有學(xué)者研究中發(fā)現(xiàn)[24]，ICAM-1黏附途徑是細(xì)胞間相互作用和傳達(dá)信息的一個(gè)關(guān)鍵途徑，共同參與免疫、炎癥及腫瘤轉(zhuǎn)移一系列重要生理和病理過(guò)程。但是，關(guān)于ICAM-1是否參與腹主動(dòng)脈瘤發(fā)展尚未得到論證，需要進(jìn)一步研究[25]。本研究顯示血清ICAM-1在預(yù)測(cè)腹主動(dòng)脈瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)方面表現(xiàn)出較高的效能，說(shuō)明ICAM-1水平表達(dá)升高是腹主動(dòng)脈瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)因子。ROC分析顯示ICAM-1預(yù)測(cè)腹主動(dòng)脈瘤的AUC達(dá)0.868，敏感度和特異度分別為80.11%、66.23%提示ICAM-1是腹主動(dòng)脈瘤病變的警示指標(biāo)。

綜上所述，腹主動(dòng)脈瘤患者Fibulin-3水平降低OPN、ICAM-1水平升高，低水平Fibulin-3與高水平OPN、ICAM-1與腹主動(dòng)脈瘤高度相關(guān)，是預(yù)測(cè)發(fā)生腹主動(dòng)脈瘤的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)因子。

利益相關(guān)聲明：所有作者均聲明不存在任何利益沖突。

作者貢獻(xiàn)說(shuō)明：林志強(qiáng)、王丹：設(shè)計(jì)研究方案，實(shí)施研究過(guò)程，論文撰寫(xiě)，提出研究思路，分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)，論文審核；林志強(qiáng)：資料搜集整理，論文修改，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。