劉國(guó)路 李強(qiáng) 李乾 王蘇貴

前列腺癌位列男性惡性腫瘤第6位，死亡因素的第9位，多見于中老年人群[1]。我國(guó)2020年前列腺癌發(fā)生率在15.6例/10萬(wàn)人，死亡例數(shù)超5萬(wàn)人[2]。手術(shù)切除仍是目前根治前列腺癌的首選方法，術(shù)后高復(fù)發(fā)率是困擾臨床醫(yī)師的棘手問(wèn)題。前列腺特異性抗原(prostate specific antigen，PSA)是癌常用的篩查指標(biāo)之一，但前列腺炎癥、藥物使用情況等可影響PSA測(cè)定結(jié)果，其預(yù)測(cè)腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的敏感度、特異度有限[3]。微小核糖核酸(microRNA，miR)是一種單鏈RNA小分子物質(zhì)，在人體細(xì)胞分化、增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、新陳代謝等基因調(diào)控過(guò)程中具有重要作用，與腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、遷移、浸潤(rùn)關(guān)系密切[4]。有研究表明，miR-485-5p參與大腸癌[5]、肝癌[6]等多種癌癥的發(fā)生、發(fā)展，與腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、遷移、浸潤(rùn)關(guān)系密切。有研究顯示，通過(guò)上調(diào)miR-485-5p表達(dá)水平可抑制前列腺癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲[7]。我們對(duì)103例前列腺癌病人循環(huán)miR-485-5p水平進(jìn)行檢測(cè)并探討其與前列腺癌病人預(yù)后的關(guān)系。

對(duì)象與方法

一、對(duì)象

2016年10月～2018年11月我院收治的前列腺癌病人103例，年齡32～75歲，平均年齡(60.47±6.85)歲。本研究為前瞻性研究，經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過(guò)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合《前列腺癌篩查中國(guó)專家共識(shí)(2021年版)》中前列腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]；(2)首次行前列腺癌根治性手術(shù)；(3)既往未接受任何形式治療；(4)簽署知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他部位惡性腫瘤；重要臟器嚴(yán)重功能障礙；伴有免疫缺陷性疾病、血液系統(tǒng)疾病、全身系統(tǒng)性疾??；伴有精神性疾病、認(rèn)知功能障礙；根治性手術(shù)前發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者、轉(zhuǎn)移性前列腺癌；既往有藥物濫用史、吸毒史及前列腺癌放化療、手術(shù)治療史；伴有代謝性腦病、顱內(nèi)器質(zhì)性病變、嚴(yán)重心腦血管疾病。剔除標(biāo)準(zhǔn)：(1)手術(shù)過(guò)程中死亡；(2)自行終止治療；(3)依從性差；(4)自然失訪。

二、方法

1.手術(shù)治療：參照《中國(guó)前列腺癌外科治療專家共識(shí)》進(jìn)行根治性前列腺癌手術(shù)[9]，完整切除前列腺、雙側(cè)精囊及足夠的外周組織，獲得滿意陰性切緣，去除癌灶并保留尿控功能(盡可能保留勃起功能)，若切緣陽(yáng)性則根據(jù)個(gè)體情況行內(nèi)分泌治療及放化療。

2.前列腺癌腫瘤直接的測(cè)定：病人取左側(cè)臥位，臀部朝向檢查者，經(jīng)直腸超聲觀察腺體形態(tài)，腺體內(nèi)腫瘤大小，以最大腫瘤直徑記錄多灶性前列腺癌大小。

3.外周血循環(huán)miR-485-5p相對(duì)表達(dá)量測(cè)定：術(shù)前抽取空腹靜脈血液3 ml，離心，收集血清，提取總RNA，采用mirPremie micro RNA Isolation Kit試劑盒分離RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定。內(nèi)參選用GAPDH，以CT值為基礎(chǔ)，2-△△CT法計(jì)算外周血循環(huán)miR-485-5p相對(duì)表達(dá)量。引物序列見表1。

表1 PCR引物序列表

4.隨訪：所有病人術(shù)后以門診復(fù)查、電話等方式隨訪3年，術(shù)后第1年，每2個(gè)月復(fù)查1次；自第2年起，每6個(gè)月復(fù)查1次，行MRI等影像學(xué)檢查及PSA測(cè)定。統(tǒng)計(jì)隨訪期間復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移狀況，出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移者則終止隨訪。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié)果

1.不同病理參數(shù)前列腺癌病人血清miR-485-5p相對(duì)表達(dá)量比較見表2。不同年齡、PSA、腫瘤直徑分組病人的miR-485-5p相對(duì)表達(dá)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；Gleason評(píng)分>7分、有微血管侵犯、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Ⅲ期病人的miR-485-5p相對(duì)表達(dá)量分別低于Gleason評(píng)分≤7分、無(wú)微血管侵犯、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Ⅰ-Ⅱ期病人，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表2 不同病理參數(shù)前列腺癌病人血清miR-485-5p相對(duì)表達(dá)量比較

2.影響前列腺癌病人術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的因素:截止隨訪結(jié)束，103例前列腺癌病人共有10例失訪。剩余93例前列腺癌病人中35例(37.63%)出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，58例(62.37%)未出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。Cox回歸分析顯示,Gleason評(píng)分、分期、miR-485-5p相對(duì)表達(dá)量是影響前列腺癌病人術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立因素(P<0.05)，見表3。

表3 影響前列腺癌病人術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的單因素與多因素分析

3.血清miR-485-5p水平預(yù)測(cè)前列腺癌病人術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的價(jià)值:ROC曲線結(jié)果顯示，血清miR-485-5p水平預(yù)測(cè)前列腺癌病人術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的最佳截?cái)帱c(diǎn)為1.02，靈敏度為74.29%，特異度為75.86%，AUC為0.795。見圖1。

圖1 血清miR-485-5p相對(duì)表達(dá)量預(yù)測(cè)前列腺癌病人術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的ROC曲線

4.不同血清miR-485-5p水平的前列腺癌病人生存情況:以術(shù)前血清miR-485-5p相對(duì)表達(dá)量預(yù)測(cè)前列腺癌病人術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的最佳截?cái)帱c(diǎn)(1.02)為分界線，將miR-485-5p相對(duì)表達(dá)量>1.02記為miR-485-5p高表達(dá)，miR-485-5p相對(duì)表達(dá)量≤1.02記為miR-485-5p低表達(dá)。41例miR-485-5p低表達(dá)病人無(wú)病生存21例，52例miR-485-5p高表達(dá)病人無(wú)病生存37例；miR-485-5p高表達(dá)病人的無(wú)病生存曲線優(yōu)于miR-485-5p低表達(dá)病人，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖2。

圖2 不同血清miR-485-5p相對(duì)表達(dá)量的前列腺癌病人的Kaplan-Meier無(wú)病生存曲線

討論

目前，臨床針對(duì)前列腺癌主要采用手術(shù)、放化療及內(nèi)分泌治療的綜合治療措施，但仍存在較高的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)。miR是一類非編碼單鏈RNA，在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定存在，可通過(guò)完全和不完全堿基配對(duì)與靶基因結(jié)合，轉(zhuǎn)錄后可調(diào)節(jié)多個(gè)基因的表達(dá)使靶基因降解或抑制靶基因翻譯發(fā)揮調(diào)控功能，參與上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的生理、病理過(guò)程，在前列腺癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中具有重要調(diào)控作用[10]。miR-485-5p是抑癌基因之一，有研究證實(shí)，上調(diào)miR-485-5p表達(dá)可抑制前列腺癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲[7]。

本研究發(fā)現(xiàn)，Gleason評(píng)分>7分、有微血管侵犯、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Ⅲ期病人的miR-485-5p相對(duì)表達(dá)量分別低于Gleason評(píng)分≤7分、無(wú)微血管侵犯、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Ⅰ-Ⅱ期病人，提示miR-485-5p相對(duì)表達(dá)量與前列腺癌病人病情關(guān)聯(lián)的病理參數(shù)有關(guān)，可能與以下機(jī)制有關(guān)：(1)miR-485-5p相對(duì)表達(dá)量降低可增強(qiáng)細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶活性，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)降解，增強(qiáng)癌細(xì)胞侵襲、遷移風(fēng)險(xiǎn)；(2)miR-485-5p相對(duì)表達(dá)量降低可負(fù)性調(diào)控腫瘤有關(guān)蛋白，提高周期蛋白依賴性激酶1、細(xì)胞周期素B1活性，進(jìn)而縮短細(xì)胞周期，促進(jìn)癌細(xì)胞增殖、分化。miR-485-5p在多種惡性腫瘤中起到抑癌基因作用，可與對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)相互作用形成雙閉環(huán)負(fù)反饋系統(tǒng)，Wang 等[11]研究顯示，miR-485-5p可使順鉑耐藥細(xì)胞中的部分耐藥基因失活，抑制抗癌藥物轉(zhuǎn)移至細(xì)胞外，進(jìn)而提升癌細(xì)胞對(duì)抗癌藥物的敏感性。鄭瑞等[12]研究指出，胃癌病人存在miR-485-5p低表達(dá)現(xiàn)象，miR-485-5p可通過(guò)調(diào)控Wnt/β-catenin通路抑制胃癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移。

miR-485-5p可通過(guò)抑制線粒體呼吸及癌細(xì)胞膜表面信號(hào)傳遞，以降低癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)[13]；miR-485-5p也可通過(guò)阻斷上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化來(lái)抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移[14]。本研究Cox回歸分析顯示Gleason評(píng)分、分期、miR-485-5p相對(duì)表達(dá)量是影響前列腺癌病人術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立因素，提示miR-485-5p相對(duì)表達(dá)量是影響前列腺癌病人預(yù)后的因素。miR-485-5p高表達(dá)病人的無(wú)病生存曲線優(yōu)于miR-485-5p低表達(dá)病人，提示miR-485-5p相對(duì)表達(dá)量與前列腺癌病人預(yù)后有關(guān)，miR-485-5p低表達(dá)病人術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)更高。

miR-485-5p表達(dá)情況與前列腺癌病人病理參數(shù)及預(yù)后有關(guān)，miR-485-5p低表達(dá)病人預(yù)后不良風(fēng)險(xiǎn)高。受時(shí)間、精力、經(jīng)濟(jì)等多方面限制，本研究仍存在不足之處，為單中心研究，樣本量較小，隨訪時(shí)間短，miR-485-5p在前列腺癌中的分子機(jī)制也值得進(jìn)一步的探討，后期將針對(duì)不足之處進(jìn)一步完善研究。