李聰，鄒楠，袁今奇，姚佳，蘇林潔，韓暢，秦冬梅

(1.石河子大學(xué)藥學(xué)院/新疆植物藥資源利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，石河子 832002；2.石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院中醫(yī)科，石河子 832002)

慢性肝病是世界范圍內(nèi)的主要醫(yī)療負(fù)擔(dān)，每年約200萬(wàn)人死亡[1]。研究顯示，慢性肝病患者通常伴有腸道菌群失衡[2]。近年來(lái)，大量研究致力于分析慢性肝病的發(fā)病機(jī)制，但基于“腸道菌群-腸-肝軸”對(duì)慢性肝病的研究較少。腸道與肝臟在解剖學(xué)和生理學(xué)上是相連的[3]，當(dāng)腸道菌群紊亂時(shí)，腸黏膜受損，腸道通透性增加，有害細(xì)菌會(huì)釋放脂多糖和內(nèi)毒素，通過(guò)“腸-肝軸”進(jìn)入肝臟[4]，激活肝臟的免疫反應(yīng)，促進(jìn)其釋放炎性細(xì)胞因子，從而加速肝損傷進(jìn)程[5-6]。這種“腸-肝軸”效應(yīng)對(duì)肝臟病理學(xué)產(chǎn)生多種影響[7]，因而從 “腸道菌群-腸-肝軸”進(jìn)行干預(yù)達(dá)到治療慢性肝病的作用，具有深遠(yuǎn)意義。毛菊苣(CichoriumpumilumJacq)是維吾爾族醫(yī)學(xué)的傳統(tǒng)草藥[8]，本課題組前期對(duì)毛菊苣進(jìn)行了深入研究，發(fā)現(xiàn)毛菊苣正丁醇部位主要有效成分為倍半萜類(lèi)[9]，該部位可有效防治免疫性肝損傷、化學(xué)性肝損傷和肝纖維化[10-12]，其對(duì)金黃色葡萄球菌和糞腸球菌等有害菌具有顯著的抑制作用[13]。此外，在膳食中添加毛菊苣可增加人體腸道內(nèi)青春雙歧桿菌等益生菌的豐度[14-15]。因此筆者預(yù)測(cè)毛菊苣正丁醇部位可通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群進(jìn)而影響“腸-肝軸”從而減輕肝臟炎癥來(lái)治療慢性肝病。本研究采用5% 2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)-80%乙醇長(zhǎng)期誘導(dǎo)大鼠腸道炎癥的模型[16]，探討腸道損傷之后肝臟的病理情況，并給予毛菊苣正丁醇部位治療，觀察毛菊苣正丁醇部位的保肝作用及其與腸道菌群的關(guān)系。

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 無(wú)特定病原體(SPF)級(jí)雄性Sprague-Dawley大鼠30只，體質(zhì)量(200±20)g，購(gòu)自新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(新)2016-0001。大鼠于室溫(23±2)℃、相對(duì)濕度約50%，12/12 h光暗交替的條件下進(jìn)行飼養(yǎng)，自由攝食飲水，在實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d。

1.2藥品與試劑 毛菊苣根采集于石河子大學(xué)于新疆維吾爾自治區(qū)和田市墨玉縣，經(jīng)新疆維吾爾醫(yī)學(xué)院買(mǎi)買(mǎi)提·努爾艾合提教授鑒定為毛菊苣(CichoriumpumilumJacq)根(Maojuju-2017-0715)。2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS，成都化夏試劑有限公司，批號(hào)：B1245726)；柳氮磺吡啶腸溶片(上海信宜天平藥業(yè)有限公司，批號(hào)：09180402)；95%乙醇(天津豐川化學(xué)試劑技術(shù)有限公司，批號(hào)：20190519)，正丁醇(天津豐川化學(xué)試劑技術(shù)有限公司，批號(hào)：20190321)，水合氯醛(上海化學(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站經(jīng)銷(xiāo)，新華化工廠分裝)，0.9%氯化鈉溶液(四川科倫藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20190118)，4%多聚甲醛(北京雷根生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：0618A21)，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)試劑盒(批號(hào)：20190122)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)試劑盒(批號(hào)：201900125)、乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒(批號(hào)：20190218)、白蛋白(ALB)試劑盒(批號(hào)：20190120)和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)試劑盒(批號(hào)：20190125)均由南京建成生物工程研究所提供；大鼠白細(xì)胞介素4(IL-4)試劑盒(批號(hào)：20190221)、大鼠IL-6試劑盒(批號(hào)：20190123)、大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)試劑盒(批號(hào)：20190128)均由上海雅吉生物科技有限公司提供。

1.3儀器與設(shè)備 R-100型 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(Buchi Labortechnik，瑞士步琦公司)；LGJ-18A型 真空冷凍干燥機(jī)(上海比朗儀器有限公司)；5426XG型 離心機(jī)(德國(guó)艾本德股份公司)；BP211D型 分析天平(德國(guó)賽多利斯，感量：0.01 mg)；電熱恒溫水浴鍋(北京長(zhǎng)安科學(xué)儀器廠)；Varioskan LUX型多功能酶標(biāo)儀(美國(guó)賽默飛世爾科技公司)；VORTEX0型渦旋混勻器(上海達(dá)姆實(shí)業(yè)有限公司)。

1.4毛菊苣根正丁醇部位的提取及給藥供試液的制備 將毛菊苣根清洗、晾干、粉碎，用95%乙醇回流提取5次，合并提取液，三層紗布濾過(guò)，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓濃縮除去溶劑，得到浸膏。將浸膏用水懸浮后用正丁醇萃取，將萃取液減壓蒸發(fā)，即得毛菊苣正丁醇部位。將該部位加入到適量純水中，40 kHz超聲10 min，渦旋3 min，制成供試液備用。

1.5動(dòng)物分組與處理 將大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、柳氮磺吡啶腸溶片組(100 mg·kg-1)、毛菊苣正丁醇部位小劑量組(100 mg·kg-1)、毛菊苣正丁醇部位大劑量組(150 mg·kg-1)，每組6只，給藥劑量參照文獻(xiàn)[17]。造模前禁食不禁水，12 h后，將大鼠稱(chēng)定質(zhì)量，以10%水合氯醛麻醉，除正常對(duì)照組灌腸0.9%氯化鈉溶液外，其余組均按照60 mg·kg-1劑量灌腸5%TNBS-80%乙醇溶液，每次灌腸深度約8 cm，造模藥在腸道內(nèi)至少保持1 min，每周灌腸2次，持續(xù)12周。從第13周開(kāi)始，停止造模，除模型對(duì)照組與正常對(duì)照組灌胃給予純化水外，各給藥組灌胃給予相應(yīng)劑量的治療藥物，每天1次，持續(xù)14 d，末次給藥后，禁食24 h，麻醉取材。

1.6實(shí)驗(yàn)取材 實(shí)驗(yàn)結(jié)束前1 d，收集新鮮大鼠糞便2～5 g于凍存管中，放入液氮用于16SrDNA基因序列分析[18]，大鼠麻醉后進(jìn)行腹主動(dòng)脈采血，血液室溫靜置30 min后，用4 ℃預(yù)冷的離心機(jī)以離心率3000 r·min-1，離心半徑5.2 cm，離心15 min后分離血清，儲(chǔ)存于-80 ℃冰箱備用。取大鼠肝臟，用0.9%氯化鈉溶液清洗，濾紙吸取表面水分后，用組織前，取兩小塊厚2～3 mm的肝組織，一塊置于4%多聚甲醛中固定以制備病理切片，另一塊加適量冰冷0.9%氯化鈉溶液，于組織研磨機(jī)中進(jìn)行組織勻漿，然后4 ℃離心機(jī)以離心率3000 r·min-1，離心半徑5.2 cm，離心15 min后，取肝組織勻漿上清液儲(chǔ)存于-80 ℃冰箱待測(cè)，取大鼠結(jié)腸組織，置于4%多聚甲醛中固定以制備腸組織病理切片。

1.7血清生物標(biāo)志物的測(cè)定 按照試劑盒說(shuō)明書(shū)，檢測(cè)大鼠血清ALT、AST、 LDH、ALB和γ-GT的含量及肝組織勻漿上清液IL-4、IL-6、TNF-α的含量。

1.8肝組織、結(jié)腸組織病理學(xué)評(píng)價(jià) 將固定在4%多聚甲醛的肝組織和腸組織，用75%～100%乙醇梯度脫水，石蠟包埋，以4 μm的厚度切片，肝切片蘇木精-伊紅(HE)、馬松(Masson)染色，腸切片HE染色，光學(xué)顯微鏡觀察切片并攝影。

1.9通過(guò)16SrRNA基因測(cè)序測(cè)定糞便微生物組成[19]使用糞便基因組DNA提取試劑盒分離出大鼠糞便總細(xì)菌的DNA，并通過(guò)1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA提取的質(zhì)量。使用正向引物515F(5′-GTGCCAGCMGCCGGTAA-3′)和反向引物907R(5′-CCGTCA ATTCMTTTRAGTTT-3′)對(duì)細(xì)菌16S rDNA基因V4-V5區(qū)域PCR擴(kuò)增。使用Illumina MiSeq PE250平臺(tái)對(duì)糞便總DNA雙端測(cè)序分析，隨后，利用引物U341F和U806R對(duì)16S V3-V4區(qū)擴(kuò)增，然后用HiSeq2500P E250組裝原始對(duì)端讀取，用QIIME1.9.1分析。

1.10毛菊苣正丁醇部位在體外促進(jìn)益生菌的評(píng)價(jià) 取一定量的毛菊苣正丁醇部位分別加入到雙歧桿菌液體培養(yǎng)基和乳酸細(xì)菌液體培養(yǎng)基中，60 ℃加熱，40 kHz超聲溶解后，過(guò)無(wú)菌濾膜，制成含有50 mg·mL-1毛菊苣正丁醇部位萃取物的藥液，用適量培養(yǎng)基將其分別稀釋成含有25.00，12.50，6.250，3.156 2.000，0.780，0.390，0.195和 0.097 5 mg·mL-1的藥液。然后，將青春雙歧桿菌[ATCC15703]和嗜酸乳桿菌[ATCC4356]懸浮液 (107CFU·mL-1) 分別轉(zhuǎn)移到兩種培養(yǎng)基中，其初始細(xì)菌體積調(diào)整為106CFU·mL-1，以相同體積不含毛菊苣正丁醇部位的菌懸液為正常對(duì)照，在37 ℃厭氧條件下培養(yǎng)12 h，然后用酶標(biāo)儀測(cè)量 600 nm 處細(xì)菌懸浮液的吸光度(A值)。

2 結(jié)果

2.1動(dòng)物模型驗(yàn)證 在建模過(guò)程中，大鼠毛發(fā)粗糙、糞便稀薄、出現(xiàn)血便及四肢拖曳等現(xiàn)象。如圖1，模型對(duì)照組AST和ALT水平明顯高于正常對(duì)照組(P<0.05)，證明了肝損傷模型成功。

2.2毛菊苣正丁醇部位對(duì)大鼠肝損傷指標(biāo)的影響 與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠血清ALT、AST、γ-GT和LDH水平明顯升高(P<0.01或P<0.05)，ALB水平顯著下降(P<0.05)，證明模型對(duì)照組大鼠出現(xiàn)了嚴(yán)重的肝損傷，與模型對(duì)照組比較，毛菊苣正丁醇部位小劑量組血清ALT和γ-GT水平顯著降低(P<0.05)，LDH水平降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，大劑量組血清ALT、γ-GT、LDH水平降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，大劑量組、小劑量組AST和ALB水平均沒(méi)有得到改善，表明毛菊苣正丁醇部位對(duì)肝損傷有一定的逆轉(zhuǎn)作用，但可能由于給藥時(shí)間不足，一些指標(biāo)沒(méi)有改善或者雖然有所改善但沒(méi)有出現(xiàn)顯著性差異。見(jiàn)圖1。

A.正常對(duì)照組；B.模型對(duì)照組；C.柳氮磺吡啶腸溶片組；D.毛菊苣正丁醇部位小劑量組；E.毛菊苣正丁醇部位大劑量組。 ①與正常對(duì)照組比較，t=-2.867～2.552，P<0.05；②與正常對(duì)照組比較，t=-3.769，P<0.01；③與模型對(duì)照組比較，t=3.096，2.522，2.564，P<0.05；④與模型對(duì)照組比較，t=-3.613，P<0.01。圖1 5組大鼠肝功能指標(biāo)水平檢測(cè)A.normal control group；B.model control group；C.sulfasalazine enteric coated tablets group；D.low-dose Cichorium pumilum Jacq n-butanol parts；E.high-dose Cichorium pumilum Jacq n-butanol parts.① Compared with normal control group，t=-2.867—2.552，P<0.05；② Compared with normal control group，t=-3.769，P<0.01；③ Compared with model control group，t=3.096，2.522，2.564，P<0.05；④ Compared with model control group，t=-3.613，P< 0.01.Fig.1 Liver function index levels in five groups of

2.3毛菊苣正丁醇部位改善結(jié)腸組織的病理異常 與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠腸道明顯潰爛和不完整，其病理切片表現(xiàn)出腺體破碎和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，而給藥組腸道輪廓較清晰，形態(tài)和顏色與正常對(duì)照組相似，病理切片狀態(tài)趨于正常水平。說(shuō)明毛菊苣正丁醇部位可以改善結(jié)腸組織損傷，保護(hù)腸道。見(jiàn)圖2。

A.正常對(duì)照組；B.模型對(duì)照組；C.柳氮磺吡啶腸溶片組；D.毛菊苣正丁醇部位小劑量組；E.毛菊苣正丁醇部位大劑量組。圖2 大鼠結(jié)腸圖片及HE染色 A.normal control group；B.model control group；C.sulfasalazine enteric coated tablets group；D.low-dose Cichorium pumilum Jacq n-butanol parts；E.high-dose Cichorium pumilum Jacq n-butanol parts.Fig.2 Pictures and HE staining of rats' colons

2.4毛菊苣正丁醇部位改善肝組織的病理異常 正常對(duì)照組肝臟呈健康紅色，組織表面光滑，模型對(duì)照組肝臟呈黃褐色，表面粗糙，給藥組大鼠肝臟雖然仍有部分損傷，但其表面光滑，形態(tài)更接近正常肝組織； HE染色可見(jiàn)，正常對(duì)照組肝組織結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞索以中央靜脈為核心呈放射狀排列，肝細(xì)胞狀態(tài)良好，肝小葉結(jié)構(gòu)完整，模型對(duì)照組肝組織結(jié)構(gòu)受損，中心靜脈明顯擴(kuò)張，肝細(xì)胞索紊亂，肝細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的壞死和脂肪變性，大量的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)在肝小葉中，肝小葉結(jié)構(gòu)被破壞，給藥組肝臟形態(tài)與正常對(duì)照組相似，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)基本消失；馬松染色顯示，與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組中發(fā)現(xiàn)了大量的膠原纖維，說(shuō)明模型對(duì)照組膠原蛋白大量沉積并明顯向外延伸，出現(xiàn)較嚴(yán)重的肝損傷，與模型對(duì)照組相比，各給藥組的膠原纖維明顯減少，表明毛菊苣正丁醇部位可顯著減少肝纖維化，保護(hù)肝臟。說(shuō)明毛菊苣正丁醇部位可以明顯緩解TNBS引起的肝組織形態(tài)學(xué)和病理學(xué)變化。見(jiàn)圖3。

A.正常對(duì)照組；B.模型對(duì)照組；C.柳氮磺吡啶腸溶片組；D.毛菊苣正丁醇部位小劑量組；E.毛菊苣正丁醇部位大劑量組。圖3 大鼠肝臟圖片、HE染色及Masson染色 A.normal control group；B.model control group；C.sulfasalazine enteric coated tablets group；D.low-dose Cichorium pumilum Jacq n-butanol parts；E.high-dose Cichorium pumilum Jacq n-butanol parts.Fig.3 Pictures，HE staining and Masson staining of rats' livers

2.5毛菊苣正丁醇部位對(duì)肝組織勻漿上清中TNF-α、IL-4、IL-6的影響 結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組的TNF-α和IL-6含量顯著增加(P<0.01)，表明肝臟中存在炎癥浸潤(rùn)。與模型對(duì)照組相比，毛菊苣正丁醇部位大劑量組肝組織勻漿IL-6、TNF-α含量顯著降低(P<0.01)，小劑量組可略微升高IL-4水平，但是差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)圖4。

A.正常對(duì)照組；B.模型對(duì)照組；C.柳氮磺吡啶腸溶片組；D.毛菊苣正丁醇部位小劑量組；E.毛菊苣正丁醇部位大劑量組。 ①與正常對(duì)照組比較，t=-8.220，-5.034，P<0.01；②與模型對(duì)照組比較，t=4.140，10.952，5.594，P<0.01。圖4 5組大鼠的炎癥水平檢測(cè)A.normal control group；B.model control group；C.sulfasalazine enteric coated tablets group；D.low-dose Cichorium pumilum Jacq n-butanol parts；E.high-dose Cichorium pumilum Jacq n-butanol parts.①Compared with normal control group,t=-8.220，-5.034，P<0.01；②compared with model group，t=4.140，10.952，5.594，P<0.01.Fig.4 Detection of inflammation level in five groups of

2.6毛菊苣正丁醇部位對(duì)TNBS所致大鼠腸道菌群變化的影響 模型對(duì)照組和各給藥組均引起了細(xì)菌群落在門(mén)和屬的分類(lèi)學(xué)水平上的變化，在門(mén)的分類(lèi)水平上，變形菌門(mén)、擬桿菌門(mén)、厚壁菌門(mén)代表細(xì)菌總序列的大部分，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠腸道中厚壁菌門(mén)豐度明顯降低，變形菌門(mén)和擬桿菌門(mén)豐度明顯增加，給藥組則通過(guò)增加厚壁菌門(mén)的豐度，降低變形菌門(mén)和擬桿菌門(mén)的豐度，使其菌群豐度趨近于正常大鼠。在屬的分類(lèi)水平上，顫螺菌屬、瘤胃球菌屬、普氏菌代表細(xì)菌總序列的大部分，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠腸道中顫螺菌屬、瘤胃球菌屬的豐度均明顯降低，而給藥組則可以增加顫螺菌屬、瘤胃球菌屬豐度，使腸道菌群更加接近正常水平。然而，給藥組沒(méi)有改善普氏菌的豐度，使其趨于正常水平，說(shuō)明給藥組只能調(diào)節(jié)一部分菌群。見(jiàn)圖5。

A.正常對(duì)照組；B.模型對(duì)照組；C.柳氮磺吡啶腸溶片組；D.毛菊苣正丁醇部位大劑量組。圖5 毛菊苣正丁醇部位對(duì)大鼠腸道菌群門(mén)和屬水平變化的影響 A.normal control group；B.model control group；C.sulfasalazine enteric coated tablets group；D.high-dose Cichorium pumilum Jacq n-butanol parts.Fig.5 Effect of Cichorium pumilum Jacq n-butanol parts on the levels of rats' intestinal flora phylum and genus

2.7毛菊苣正丁醇部位對(duì)益生菌生長(zhǎng)的影響 與正常對(duì)照組相比，當(dāng)毛菊苣正丁醇部位濃度在0～0.097 5 mg·mL-1時(shí)，毛菊苣正丁醇部位可促進(jìn)青春雙歧桿菌生長(zhǎng)，基本不影響嗜酸乳桿菌生長(zhǎng)，當(dāng)濃度在0.097 5～12.5 mg·mL-1時(shí)，可促進(jìn)青春雙歧桿菌生長(zhǎng)，抑制嗜酸乳桿菌生長(zhǎng)，當(dāng)毛菊苣正丁醇部位濃度在12.5～50 mg·mL-1時(shí)，可抑制青春雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌生長(zhǎng)。見(jiàn)圖6。

A.0 mg·mL-1；B.0.0975 mg·mL-1；C.0.195 mg·mL-1；D.0.39 mg·mL-1；E.0.78 mg·mL-1；F.1.56 mg·mL-1；G.3.125 mg·mL-1；H.6.25 mg·mL-1；I.12.5 mg·mL-1；J.25 mg·mL-1；K.50 mg·mL-1。圖6 毛菊苣正丁醇部位對(duì)青春雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌的影響 A.0 mg·mL-1；B.0.097 5 mg·mL-1；C.0.195 mg·mL-1；D.0.39 mg·mL-1；E.0.78 mg·mL-1；F.1.56 mg·mL-1；G.3.125 mg·mL-1；H.6.25 mg·mL-1；I.12.5 mg·mL-1；J.25 mg·mL-1；K.50 mg·mL-1.Fig.6 Effect of Cichorium pumilum Jacq n-butanol parts on Bifidobacteria youth and Lactobacillus acid ophilus

3 討論

毛菊苣通過(guò)抗菌及炎癥抑制作用，對(duì)慢性肝病發(fā)揮了良好的治療效果[20]。然而大部分研究是基于“一藥一靶”的傳統(tǒng)研究模式，忽略了器官間的相互作用，關(guān)注肝損傷的平行過(guò)程有助于開(kāi)發(fā)新的治療手段[21-22]。近年來(lái)，腸道微生物與肝臟的關(guān)系也越來(lái)越受到關(guān)注[23]。本研究發(fā)現(xiàn)，毛菊苣正丁醇部位通過(guò)調(diào)整腸道菌群，改善“腸-肝軸”，進(jìn)而抑制肝臟炎癥，治療慢性肝損傷，且具有一定的劑量依賴(lài)性。

本研究結(jié)果顯示，毛菊苣正丁醇部位小劑量組及大劑量組均能降低ALT、γ-GT和LDH水平，其中小劑量組降低ALT、γ-GT水平具有顯著性差異，略好于大劑量組，可能是由于動(dòng)物個(gè)體差異，具體原因有待進(jìn)一步研究。當(dāng)腸道菌群紊亂、有害菌增多時(shí)，腸絨毛變得稀疏受損，腸壁被破壞，有害菌及其代謝產(chǎn)物(脂多糖和內(nèi)毒素)由破損的腸道轉(zhuǎn)移到門(mén)靜脈，從而激活肝臟的免疫反應(yīng)，釋放炎癥因子如IL-6和TNF-α等，加速肝臟損傷[24-26]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，毛菊苣正丁醇部位在200 mg·mL-1時(shí)可顯著抑制糞腸球菌和金黃色葡萄球菌等有害菌生長(zhǎng)[13]，本研究的病理切片和ELISA結(jié)果表明，毛菊苣正丁醇部位可減輕腸、肝組織的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，改善腸、肝損傷，降低肝組織勻漿中IL-6和TNF-α水平，且大劑量組效果更明顯。因此，本實(shí)驗(yàn)采用16sRNA技術(shù)檢測(cè)大劑量組大鼠腸道菌群的變化。厚壁菌門(mén)、擬桿菌門(mén)和變形菌門(mén)是人體腸道中常見(jiàn)的三大優(yōu)勢(shì)菌群，在生理?xiàng)l件下處于平衡狀態(tài)，瘤胃球菌屬和顫螺菌屬于厚壁菌門(mén)，兩者都可增強(qiáng)腸道屏障的保護(hù)作用[27-28]。研究發(fā)現(xiàn)，腸炎患者的微生物群中，厚壁菌門(mén)降低，擬桿菌門(mén)和變形菌門(mén)升高[29]，本研究表明，毛菊苣正丁醇部位大劑量組可升高厚壁菌門(mén)、瘤胃球菌屬和顫螺菌屬的豐度，降低擬桿菌門(mén)和變形菌門(mén)的豐度，維持菌落平衡。

青春雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌是腸道中常見(jiàn)的益生菌，兩者均可通過(guò)抑制炎癥恢復(fù)腸道穩(wěn)態(tài)[30]，體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)毛菊苣正丁醇部位濃度在0～12.5 mg·mL-1時(shí)，可以促進(jìn)青春雙歧桿菌生長(zhǎng)，而當(dāng)濃度>12.5 mg·mL-1時(shí)，對(duì)青春雙歧桿菌的生長(zhǎng)已產(chǎn)生抑制作用。當(dāng)毛菊苣正丁醇部位濃度在0～0.097 5 mg·mL-1時(shí)，基本不影響嗜酸乳桿菌生長(zhǎng)，而當(dāng)濃度>0.0 97 5 mg·mL-1時(shí)抑制嗜酸乳桿菌生長(zhǎng)。這可能是因?yàn)槊哲恼〈疾课恢饕行С煞譃楸栋胼祁?lèi)化合物。另外還有少量黃酮，有機(jī)酸，苯丙素[31-32]，其中苯丙素具有抑菌作用，可能嗜酸乳桿菌對(duì)其更敏感，毛菊苣正丁醇部位濃度稍高時(shí)，嗜酸乳桿菌的生長(zhǎng)即受到抑制。

綜上所述，毛菊苣正丁醇部位的肝臟保護(hù)作用可能是通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群，改善“腸-肝軸”從而抑制肝臟炎癥，緩解肝臟損傷。本研究發(fā)現(xiàn)了腸道菌群調(diào)節(jié)慢性肝損傷易感性的內(nèi)在機(jī)制，可為毛菊苣預(yù)防和治療肝損傷提供新的見(jiàn)解。但由于給藥時(shí)間較短，一些指標(biāo)沒(méi)有明顯改善趨勢(shì)，未來(lái)可適當(dāng)延長(zhǎng)給藥時(shí)間進(jìn)一步研究腸道菌群與肝臟之間的關(guān)系?？傊?，這些新發(fā)現(xiàn)為肝損傷治療提供了參考，并擴(kuò)大了對(duì)慢性肝病發(fā)展過(guò)程中“腸道菌群-腸-肝軸”的認(rèn)識(shí)。