王雯瓊，柳 海，徐勝威，葛明峰，許昊川，江維潔

（1.寧波市海洋與漁業(yè)研究院，浙江寧波 315012；2.農(nóng)銀人壽保險(xiǎn)股份有限公司寧波分公司，浙江寧波 315000）

南美白對(duì)蝦學(xué)名凡納濱對(duì)蝦（Penaeus vanname）。該蝦環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng)，屬?gòu)V溫廣鹽性熱帶蝦類，具有生長(zhǎng)速度快、抗病力強(qiáng)、肉質(zhì)鮮美等特點(diǎn)，是世界養(yǎng)殖產(chǎn)量較高的蝦種之一[1-2]。浙江省寧波市自1997 年開展南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖，經(jīng)過(guò)多年發(fā)展，目前總養(yǎng)殖面積約為6 700 hm2（約10 萬(wàn)畝），為寧波市三大優(yōu)勢(shì)水產(chǎn)養(yǎng)殖品種之一，蝦農(nóng)也從中獲得了豐厚的經(jīng)濟(jì)回報(bào)。但近年來(lái)南美白對(duì)蝦病害問(wèn)題頻發(fā)，使南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展受到了沖擊，其中蝦肝腸胞蟲（Enterocytozoom hepatopenaei，EHP）和十足目虹彩病毒1（decapod iridescent virus 1，DIV1）是檢出率較高且影響較大的兩種病原，因此開展這兩種病原檢測(cè)十分有必要。

EHP 最早于2003 年在泰國(guó)養(yǎng)殖的斑節(jié)對(duì)蝦（Penaeus monodon）中被發(fā)現(xiàn)[3]，2013 年 后，我國(guó)多個(gè)省份的蝦類養(yǎng)殖基地先后發(fā)現(xiàn)了EHP 感染，且感染率呈上漲趨勢(shì)[4]。EHP 會(huì)大幅降低對(duì)蝦活力，更嚴(yán)重的是，它會(huì)阻礙對(duì)蝦的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收，使其生長(zhǎng)緩慢甚至停滯[5]。2014 年Qiu 等[6]從凡納濱對(duì)蝦中分離出一種新型虹彩病毒，將其命名為蝦血細(xì)胞虹彩病毒（shrimp henocyteiridescent virus，SHIV）。該病毒能引發(fā)對(duì)蝦肝胰腺萎縮、褪色，以及空腸和空胃等現(xiàn)象，繼而導(dǎo)致對(duì)蝦死亡。同年，徐麗美等[7]在福建省紅螯螯蝦中發(fā)現(xiàn)一種二十面體對(duì)稱的胞漿型病毒，確定是一種虹彩病毒，暫命名為紅螯螯蝦虹彩病毒（C.quadricarinatusiridovirus，CQIV）。2019 年，SHIV 和CQIV 被確認(rèn)為同一個(gè)種病毒，被正式命名為十足目虹彩病毒1（DIV1）。該病毒對(duì)南美白對(duì)蝦的致死率可高達(dá)100%[8]。

據(jù)《2020 中國(guó)水生動(dòng)物衛(wèi)生狀況報(bào)告》[9]，2019 年我國(guó)凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖因疾病造成的經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)82.1 億元?！?020 我國(guó)重要水生動(dòng)物疫病狀況分析》[10]中的數(shù)據(jù)顯示，2019 年全國(guó)專項(xiàng)監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)的南美白對(duì)蝦EHP 平均陽(yáng)性率為17.0%，浙江省DIV1 樣品陽(yáng)性率為20.9%，在15 個(gè)監(jiān)測(cè)省份中位列第4。目前暫無(wú)控制EHP 和DIV1 感染的有效措施。本監(jiān)測(cè)旨在初步掌握寧波市南美白對(duì)蝦中EHP 和DIV1 的流行規(guī)律，為寧波市南美白對(duì)蝦病害防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)樣品

試驗(yàn)樣品采樣點(diǎn)涵蓋了寧波市鄞州（4 個(gè)）、象山（4 個(gè)）、寧海（2 個(gè)）、奉化（5 個(gè)）的15個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)，其中固定采樣點(diǎn)10 個(gè)，其余為臨時(shí)采樣點(diǎn)（根據(jù)對(duì)蝦發(fā)病情況而定）。2021 年3—9 月，在南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖場(chǎng)隨機(jī)采集一定數(shù)量的南美白對(duì)蝦樣品（如未發(fā)病則隨機(jī)抽樣，如有發(fā)病則采集有臨床癥狀的蝦樣），共采集南美白對(duì)蝦養(yǎng)成期樣本119 批次。樣本均為活蝦，每批次不少于150 尾。將采集到的樣本置于充氧袋中或經(jīng)無(wú)水乙醇固定后，送至實(shí)驗(yàn)室24 h 內(nèi)檢測(cè)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 DNA 提取 將同一批次抽取的對(duì)蝦不同組織（包括鰓、肝胰腺、腸管、肌肉等）混合后充分研磨，平均分成10 份，利用 OMEGA 的“E.Z.N.A.Tissue DNA Kit”DNA 提取試劑盒提取每份樣品總DNA，于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 體長(zhǎng)測(cè)量 在每批次抽取的對(duì)蝦中，隨機(jī)抽檢30 尾，測(cè)量對(duì)蝦眼柄基部至尾節(jié)末端的長(zhǎng)度，取平均值，測(cè)量時(shí)盡量保持對(duì)蝦呈伸直狀態(tài)。

1.2.3 病原檢測(cè) 采用套式PCR 法檢測(cè)，EHP檢測(cè)參考標(biāo)準(zhǔn)《蝦肝腸胞蟲病診斷規(guī)程》（SC/T 7232—2020），DIV1 檢測(cè)參考標(biāo)準(zhǔn)《蝦虹彩病毒病診斷規(guī)程》（SC/T 7237—2020）。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理分析 每批次樣品中只要檢出1份陽(yáng)性，則判定該批次為陽(yáng)性。批次陽(yáng)性率=陽(yáng)性批次數(shù)/檢測(cè)批次數(shù)×100%。采用SPSS 21.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，差異性采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同病原檢測(cè)

2021 年在寧波市鄞州、象山、奉化、寧海4個(gè)監(jiān)測(cè)區(qū)15 個(gè)南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖場(chǎng)，共采集南美白對(duì)蝦成蝦樣本119 批次，對(duì)采集的所有成蝦樣本進(jìn)行EHP 和DIV1 檢測(cè)，得到的結(jié)果見表1。119 批次中，共檢出陽(yáng)性42 批次。其中：EHP 陽(yáng)性32 批次，批次陽(yáng)性率為26.9%；DIV1 陽(yáng)性13 批次，批次陽(yáng)性率為10.9%；3 批次為EHP+DIV1 混合感染，混合感染批次陽(yáng)性率為2.5%。

2.2 不同養(yǎng)殖地區(qū)檢測(cè)

不同養(yǎng)殖地區(qū)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表2）顯示：EHP和DIV1 在4 個(gè)監(jiān)測(cè)區(qū)都有不同程度的檢出，其中奉化的EHP 批次陽(yáng)性率最高（31.5%），象山次之（26.1%），寧海和鄞州較低（分別為22.2%和21.2%），但區(qū)域差異不顯著（P＞0.05）；象山的DIV1 批次陽(yáng)性率最高，為30.4%，顯著高于奉化地區(qū)（P＜0.05），與鄞州和寧海兩地?zé)o顯著差異（P＞0.05）。

2.3 不同體長(zhǎng)對(duì)蝦檢測(cè)

不同體長(zhǎng)對(duì)蝦的檢測(cè)統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表3）顯示：在體長(zhǎng)小于3 cm 的對(duì)蝦樣本中，均未檢出EHP 和DIV1；EHP 和DIV1 陽(yáng)性樣本集中在體長(zhǎng)3～9 cm的對(duì)蝦，其中EHP 批次陽(yáng)性率在體長(zhǎng)3～9 cm 的蝦樣中顯著高于小于3 cm 的蝦樣（P＜0.05），在體長(zhǎng)3～6 cm 和6～9 cm 對(duì)蝦間無(wú)顯著差異（P＞0.05），而DIV1 批次陽(yáng)性率在不同體長(zhǎng)對(duì)蝦中均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表3 不同體長(zhǎng)南美白對(duì)蝦EHP、DIV1 檢測(cè)結(jié)果

2.4 不同月份檢測(cè)

寧波市對(duì)蝦放養(yǎng)時(shí)間主要集中在3 月（大棚養(yǎng)殖）和5 月（土塘養(yǎng)殖）。不同月份檢測(cè)統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表4）顯示：4 月份僅檢測(cè)3 批次樣本，來(lái)源于3 個(gè)有發(fā)病史的養(yǎng)殖場(chǎng)，未檢出相關(guān)病原。EHP陽(yáng)性率在不同月份間差異顯著（P＜0.05），各月份間兩兩比較發(fā)現(xiàn)，EHP 陽(yáng)性率4—5 月顯著低于6—9 月（P＜0.05），6—9 月各月份間無(wú)顯著差異（P＞0.05）；DIV1 僅在7 月和8 月被檢出，批次陽(yáng)性率分別為28.6%和29.2%，與其他月份差異顯著（P＜0.05）。

表4 不同月份南美白對(duì)蝦EHP、DIV1 檢測(cè)結(jié)果

2.5 不同臨床癥狀對(duì)蝦檢測(cè)

不同癥狀對(duì)蝦的檢測(cè)統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表5）顯示：除了在體表發(fā)紅癥狀的批次中未檢出EHP 外，其余癥狀的批次中均有EHP 檢出，但在無(wú)臨床癥狀批次的樣品中，EHP 陽(yáng)性檢出率反而較高；DIV1 在有體表發(fā)紅癥狀的批次中陽(yáng)性率較高，為91.0%，而在其他癥狀的批次中陽(yáng)性率均較低。

表5 不同臨床癥狀下南美白對(duì)蝦EHP、DIV1 檢測(cè)結(jié)果

3 討論

3.1 總體流行情況

從2013 年開始，我國(guó)多個(gè)省份的蝦類養(yǎng)殖基地先后發(fā)現(xiàn)了EHP 感染，且感染率居高不下。2015 年8 月遼寧省EHP 檢出率為34.6%[11]，2016年粵西地區(qū)成蝦的 EHP 檢出率最高達(dá)93.75%[12]，2017—2018 年廣東省茂名和汕尾地區(qū)凡納濱對(duì)蝦幼蝦的EHP 檢出率分別為20.24%和26.98%[13]，2020 年寧波市EHP 檢出率為31%[14]。本次檢測(cè)的寧波市EHP 批次陽(yáng)性率為26.9%。由此可見，EHP 目前對(duì)我國(guó)南美白對(duì)蝦健康養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重威脅，寧波市EHP 流行較嚴(yán)重，需引起高度重視。

DIV1 最早在浙江省發(fā)病的南美白對(duì)蝦中被發(fā)現(xiàn)，近幾年在多個(gè)沿海南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖區(qū)流行，且檢出率較高，如2017—2018 年廣東省汕尾地區(qū)凡納濱對(duì)蝦幼蝦的DIV1 檢出率高達(dá)42.86%[13]。2020 年寧波市DIV1 檢出率為20%[14]，2021 年（本次檢測(cè)）為10.9%，與去年同期以及往年其他地區(qū)相比，DIV1 攜帶率有下降趨勢(shì)，說(shuō)明寧波市DIV1流行得到一定控制，這可能與本市針對(duì)對(duì)蝦疫病的及時(shí)檢測(cè)和加強(qiáng)病原檢疫密切相關(guān)。

3.2 流行特點(diǎn)

通過(guò)對(duì)2021 年寧波市4 個(gè)南美白對(duì)蝦監(jiān)測(cè)區(qū)采集的119批次養(yǎng)殖期樣本進(jìn)行EHP和DIV1檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)EHP 和DIV1 在不同養(yǎng)殖區(qū)域、對(duì)蝦體長(zhǎng)、養(yǎng)殖月份的病原流行情況存在差異。

3.2.1 養(yǎng)殖區(qū)域 鄞州、象山、寧海、奉化4 個(gè)養(yǎng)殖地區(qū)均有EHP 和DIV1 被檢出，其中奉化地區(qū)的EHP 和象山地區(qū)的DIV1 感染率最高，這可能與對(duì)蝦苗種來(lái)源有關(guān)。從奉化感染EHP 和象山感染DIV1 的對(duì)蝦苗種來(lái)源來(lái)看，大部分來(lái)源于海南省和山東省。鄭曉葉等[15]研究表明，EHP 和DIV1 在來(lái)自海南省蝦苗中的檢出率分別約為23%和32%；陳曉玲等[5]調(diào)查發(fā)現(xiàn)，山東省日照市養(yǎng)殖的南美白對(duì)蝦EHP 陽(yáng)性檢出率約為10%，而來(lái)源于廣東和福建的苗種病原檢出率較低；許昊川等[16]調(diào)查發(fā)現(xiàn)DIV1 在產(chǎn)地福建和廣東苗種中的檢出率分別為1.59%和1.08%，EHP 在產(chǎn)地福建的苗種中檢出率為4.76%，病原檢出率與苗種來(lái)源之間存在顯著差異[16]。因此，各養(yǎng)殖區(qū)要對(duì)苗種來(lái)源和質(zhì)量進(jìn)行有效掌控，在放養(yǎng)前重視對(duì)苗種的病原檢測(cè)工作，選擇健康不攜帶病毒的優(yōu)質(zhì)SPF好苗放養(yǎng)。

3.2.2 蝦樣體長(zhǎng) EHP 陽(yáng)性率與蝦體長(zhǎng)有相關(guān)性。本次監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，體長(zhǎng)小于3 cm 的蝦樣中未檢測(cè)到EHP，EHP 主要在體長(zhǎng)3～9 cm 的蝦樣中被檢出。王博雅等[11]研究表明，EHP 的檢出率與對(duì)蝦體形大小密切相關(guān)，在體長(zhǎng)3～8 cm 蝦樣本中陽(yáng)性率高達(dá)100%。本次檢測(cè)結(jié)果顯示，DIV1 在體長(zhǎng)3～6 cm 的蝦樣中陽(yáng)性率較高。2017—2019 年的DIV1 專項(xiàng)監(jiān)測(cè)記錄[10]顯示，體長(zhǎng)4～7 cm 蝦的DIV1 陽(yáng)性率最高，與本監(jiān)測(cè)結(jié)果基本一致。對(duì)蝦在養(yǎng)殖前期的病原感染率相對(duì)較低，推測(cè)病原可能為養(yǎng)殖過(guò)程中由外界水源帶入，且在中后期由于池底殘餌、對(duì)蝦排泄物多，導(dǎo)致病原生長(zhǎng)繁殖，從而增加了感染風(fēng)險(xiǎn)[17]。養(yǎng)殖戶需從水質(zhì)環(huán)境等方面采取防控措施，對(duì)池塘進(jìn)行嚴(yán)格消毒、清塘，及時(shí)集污排污，以保持水體清潔[18]。

3.2.3 養(yǎng)殖月份 EHP 在3 月、6—9 月均有分布，其中6—7 月感染率較高。2019 年的EHP 專項(xiàng)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)[10]顯示，水溫在25～31 ℃ 時(shí)，EHP 陽(yáng)性率較高，為11.1%～20.7%；同時(shí)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，DIV1 陽(yáng)性率在7—8 月達(dá)到峰值。這些數(shù)據(jù)表明，EHP 和DIV1 在水溫較高的夏季都有流行較強(qiáng)的特征，猜測(cè)原因可能是7—8 月是寧波市臺(tái)風(fēng)頻發(fā)的時(shí)期，臺(tái)風(fēng)引起的對(duì)蝦應(yīng)激反應(yīng)導(dǎo)致病原感染率高。張水波[19]認(rèn)為臺(tái)風(fēng)、連續(xù)降雨、下暴雨、陰天或冷熱溫差大等惡劣天氣，易誘發(fā)南美白對(duì)蝦的應(yīng)激反應(yīng)和病害發(fā)生，本身潛伏感染病毒的蝦，由于體質(zhì)弱會(huì)發(fā)生大規(guī)模發(fā)病死亡。因此，在夏季需積極開展EHP 和DIV1 病原檢測(cè)，以便做好精準(zhǔn)防控。

3.2.4 臨床癥狀 對(duì)蝦感染EHP 后沒(méi)有明顯的臨床癥狀，攝食正常，腸道飽滿，沒(méi)有大批量死亡[4]。這也是本調(diào)查中無(wú)癥狀批次的樣品中，EHP 檢出率反而比較高的原因。對(duì)蝦嚴(yán)重感染EHP 會(huì)出現(xiàn)腸炎和肝胰腺萎縮等癥狀，有些染病個(gè)體雖食欲正常，但是體瘦、殼薄、身體柔軟[20]。本次調(diào)查在檢出EHP 的樣本中，樣本來(lái)源對(duì)蝦表現(xiàn)的癥狀有生長(zhǎng)緩慢、脫殼軟殼、“偷死”、空腸空胃，與陳佳棟等[20]的研究結(jié)論基本相符。感染DIV1 后，部分個(gè)體的表皮上伴有輕微的紅斑[21]，體色明顯偏紅[22]。在本調(diào)查中，體色發(fā)紅對(duì)蝦中的DIV1 檢出率高達(dá)91%，可見體色發(fā)紅是DIV1 感染的重要病癥。對(duì)蝦感染DIV1 后，癥狀較明顯，一旦發(fā)現(xiàn)對(duì)蝦出現(xiàn)該病癥，應(yīng)及時(shí)做好隔離和消毒工作，有效阻斷病原的傳播和擴(kuò)散。

4 結(jié)論

綜上所述，EHP 在寧波市對(duì)蝦中流行嚴(yán)重，主要危害體長(zhǎng)大于3 cm 的養(yǎng)殖中后期對(duì)蝦，前期感染癥狀不明顯；DIV1 流行總體上得到一定控制，主要流行于體長(zhǎng)3～6 cm 的對(duì)蝦，體色發(fā)紅是其感染的重要病癥。兩種病原都有夏季流行較強(qiáng)的趨勢(shì)，需針對(duì)性加強(qiáng)防控。