王學碧

（貴陽市第四人民醫(yī)院檢驗科 貴州 貴陽 550002）

全血細胞分析計數(shù)是臨床常用的最基礎的檢驗項目之一，它在炎癥感染疾病、血液系統(tǒng)疾病、出凝血障礙疾病的診療和預后評估方面有著不可替代的作用。全血細胞分析儀的白細胞散點圖可以為檢驗人員提供諸多有用信息。隨著各種新技術新理論在全自動血細胞計數(shù)分析儀中的廣泛使用，全自動血細胞計數(shù)分析儀的檢測能力、檢測速度及檢測水平不斷提升，測試參數(shù)不斷增多。本實驗應用的MindrayBC-6800 全血細胞計數(shù)分析儀是中國自主研發(fā)的第1 臺具有網(wǎng)織紅細胞及有核紅細胞檢測功能的全血細胞計數(shù)五分類高端分析檢測設備，具有檢測速度快、操作簡單、結(jié)果可靠準確及輸出項目參數(shù)多等特點。該儀器基于獨特的細胞三維分析技術即SF Cube 技術（Scatter Fluorescence Cube），通過對細胞粒子前向散射光信號、側(cè)向散射光信號及熒光信號進行分析，實現(xiàn)了白細胞、有核紅細胞、網(wǎng)織紅細胞的精準檢測和異常細胞的篩選。同時，此分析設備還集成了低值樣本智能倍增分析技術、排除脂質(zhì)顆粒干擾技術、系統(tǒng)化溫控技術、雙通道血小板檢測技術等一系列高端科技前沿技術，在低值樣本分析、白細胞計數(shù)及分類準確性、血小板計數(shù)準確性、抗脂質(zhì)顆粒干擾能力及異常細胞識別篩選等方面均表現(xiàn)出優(yōu)越性能，結(jié)合儀器預設的報警閾值，其能夠給出各種報警信息提示。借助儀器對檢驗結(jié)果的清晰提示，一線檢驗人員對散點圖、直方圖的分析，異常數(shù)據(jù)的識別與判斷有了更深刻全面地了解和認識。此外，儀器檢測速度的提升一定程度上緩解了日益增多的檢驗標本與檢驗人員不足的矛盾。在MindrayBC-6800使用過程中，我們發(fā)現(xiàn)，白細胞散點圖在中性粒細胞下方和/或影細胞與中性粒細胞交界處非白細胞散點區(qū)出現(xiàn)異常藍色散點，有時部分與中性粒細胞散點融合，聯(lián)合血小板聚集報警信息，明顯提高了血小板真性聚集的陽性率。現(xiàn)將實際工作中發(fā)現(xiàn)的異常白細胞散點圖，作一具體分析。

1.資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2017 年6 月—2020 年12 月貴陽市第四人民醫(yī)院609 例住院患者送檢的血常規(guī)樣本，按血小板直方圖的不同報警信息，將MindrayBC-6800 全自動血細胞計數(shù)分析儀報警信息為“血小板聚集”的420 例血常規(guī)標本分為血小板聚集組，將報警信息為“血小板聚集/血小板直方圖異?！钡?89 例血常規(guī)標本分為血小板聚集/血小板直方圖異常組。納入條件：（1）儀器報警信息為“血小板聚集”的標本；（2）儀器報警信息為“血小板聚集/血小板直方圖異常”的標本；（3）白細胞散點圖在非白細胞散點區(qū)出現(xiàn)異常的標本。排除條件：（1）肉眼可見凝固及冷凝集標本；（2）白細胞散點圖異常，非白細胞散點區(qū)正常標本；（3）血小板直方圖異常，儀器未報警血小板聚集的標本；（4）儀器報警信息為“血紅蛋白濁度干擾”“紅細胞聚集”“抗溶紅細胞”的標本。609 例患者中，男性409 例，女性200 例。血小板聚集組的血常規(guī)標本中，男性血常規(guī)標本298 例，女性血常規(guī)標本122 例；患者年齡1 ～70 歲，平均30 歲；血小板聚集/血小板直方圖異常組的血常規(guī)標本中，男性血常規(guī)標本111 例，女性血常規(guī)標本78 例；患者年齡2 ～73 歲，平均32 歲。

1.2 方法

儀器與試劑：MindrayBC-6800 全血細胞計數(shù)分析儀，原裝配套試劑M-68DS 稀釋液、M-68DR 稀釋液、M-68FD染色液、M-68FN 染色液、M-68FR 染色液；M-68LD 溶血劑、M-68LB 溶血劑、M-68LH 溶血劑、M-68LN 溶血劑；探頭清潔液（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司，中國深圳）；Olympus 顯微鏡（奧林巴斯中國有限公司，日本）；自配瑞士染液。（1）儀器法：在MindrayBC-6800 全血細胞計數(shù)分析儀室內(nèi)質(zhì)控在控且各項性能指標均符合要求的前提下，采用EDTA-K2 抗凝的真空采血管，清晨空腹抽取肘正中靜脈血2.0 mL，對標本嚴格按儀器操作規(guī)程進行測試，2 h 內(nèi)完成。（2）人工顯微鏡法：嚴格按全國臨床檢驗操作規(guī)程第4 版進行操作，取EDTA-K2 抗凝靜脈血制成血涂片，充分干燥后使用瑞士染液進行染色，推好的血涂片1 h 內(nèi)完成染色。顯微鏡下觀察血膜體尾交界且血細胞不重疊，單個分布均勻處。

1.3 觀察指標

（1）儀器報警信息真?zhèn)闻卸ǎ阂匀斯わ@微鏡檢查結(jié)果作為金標準，顯微鏡下血小板≥3 個成簇分布或聚集成堆為血小板真性聚集。結(jié)合白細胞散點圖非白細胞散點區(qū)域的異常分布情況，分析血小板真性聚集時白細胞散點圖的特點。（2）真陽性率判斷標準：真陽性率=鏡檢陽性例數(shù)/BC-6800 陽性例數(shù)×100%（顯微鏡油鏡下觀察血小板聚集≥3 個者）。

1.4 統(tǒng)計學方法

使用SPSS 19.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理。計數(shù)資料用頻數(shù)（）和百分比（%）表示。

2.結(jié)果

2.1 BC-6800 不同報警信息結(jié)果與鏡檢結(jié)果比較

血小板聚集組420 例，人工顯微鏡檢查見血小板聚集399 例，未聚集21 例，血小板聚集真陽性率為95.00%；血小板聚集/血小板直方圖異常組189 例，人工顯微鏡檢查見血小板聚集32 例，未聚集157 例，血小板聚集真陽性率為16.93%，見表1。

表1 不同報警信息BC-6800 結(jié)果與鏡檢結(jié)果比較

2.2 白細胞散點圖

609 例樣本鏡檢血小板真性聚集時白細胞異常散點圖（圖1a、1b）與白細胞正常散點圖（圖2）比較。1a顯示異常散點與中性粒細胞散點融合，分界不清；1b 顯示異常散點部分與中性粒細胞及單核細胞散點融合，部分位于中性粒細胞散點下方。

圖1 白細胞異常散點圖

圖2 白細胞正常散點圖（深藍色區(qū)域散點較少，且與各類白細胞散點分界清楚）

3.討論

近年來，檢驗人員工作量逐漸增大，無法做到每1 份標本都鏡檢排除可能影響檢測結(jié)果的因素，但止凝血障礙疾病的治療與預后評估對血小板計數(shù)結(jié)果的依賴性并未因此減低，因此，血小板計數(shù)是否準確的重要性不言而喻。目前，多數(shù)全血細胞分析儀不僅能提供血細胞計數(shù)和分類結(jié)果，還可以給出白細胞直方圖、紅細胞直方圖、血小板直方圖、白細胞散點圖及網(wǎng)織紅細胞散點圖等諸多檢測參數(shù)，并據(jù)儀器設置的報警閾值，給出各種文字報警信息。檢驗人員只有充分了解和熟悉所用儀器的檢測原理及各項性能，才能快速準確地出具好每一份血常規(guī)檢測報告。使用的MindrayBC-6800 全血細胞計數(shù)分析儀在細胞計數(shù)及分類、異常細胞識別等方面均體現(xiàn)出了較高的準確度和敏感性，降低了漏檢率。

正常健康人群的白細胞群位置是相對固定的，而血液系統(tǒng)疾病、瘧原蟲感染等患者會出現(xiàn)不同的白細胞形態(tài)及細胞群位置變化，進而出現(xiàn)不同的白細胞散點圖。當前有關白細胞?點圖與血小板聚集之間的相關性研究則較少。本實驗609 例儀器報警提示血小板聚集的標本，因觸發(fā)復檢規(guī)則，需對其進行人工顯微鏡復檢，鏡檢結(jié)果表明：儀器報警真陽性率為70.77%，低于既往文獻報道的真陽性率86%，分析原因可能與樣本量較小有關。血小板真陽性聚集標本白細胞散點圖在坐標軸零點坐標附近，深藍色影細胞?點位置及其右側(cè)非白細胞散點區(qū)出現(xiàn)異常，其特點為：（1）異常散點與中性粒細胞散點融合，分界不清；（2）異常散點部分與中性粒細胞及單核細胞散點融合，部分位于中性粒細胞散點下方，調(diào)整白細胞散點三維動態(tài)圖，從不同角度可觀察到血小板聚集區(qū)域與中性粒細胞區(qū)域分離。420 例僅報警血小板聚集的標本，真陽性率為95%，與衛(wèi)紅英研究結(jié)果基本一致。本文結(jié)果顯示，在報警聚集而鏡檢未聚集的標本中，多數(shù)為嚴重乳糜血，提示乳糜血不僅對血紅蛋白檢測有干擾，也對血小板檢測結(jié)果有影響，與蘇金花研究結(jié)果一致，當儀器報警血小板聚集而鏡檢未見血小板聚集時，檢驗人員應注意標本是否為嚴重乳糜血，并及時做血漿置換，保證檢驗結(jié)果的準確性。本文結(jié)果顯示，189 例報警血小板聚集/血小板直方圖異常的標本，真陽性率僅為16.93%，表明MindrayBC-6800 全血分析儀在測試過程中，存在錯誤識別血小板聚集的可能。本文結(jié)果顯示，經(jīng)人工顯微鏡復查可見大血小板/巨大血小板增多，其原因可能與BC-6800 DIFF 通道血小板檢測方法-電阻抗法有關。電阻抗法為最經(jīng)典的檢測血細胞的方法學之一，其主要通過脈沖的大小和脈沖數(shù)量的多少來計數(shù)血小板的大小和數(shù)量，當大血小板/巨大血小板通過計數(shù)通道時，因其體積增大而致電阻抗增加，觸發(fā)了儀器報警血小板聚集的閾值，故而儀器報警直方圖異常，此類檢測原理導致的檢測誤差可通過網(wǎng)織紅通道的熒光染色法糾正。另外，有研究表明，血常規(guī)標本放置大于2 h，易產(chǎn)生巨大血小板。對于異常白細胞散點圖（圖1a 和圖1b），盡管鏡檢都有血小板聚集，但由于聚集成堆的血小板數(shù)量多少以及聚集程度不同，異常散點區(qū)域也有所區(qū)別。與正常散點圖（圖2）對比，在影細胞散點區(qū)域，無血小板聚集的深藍色散點較少而集中，且與其他白細胞散點分界清晰，無融合現(xiàn)象；圖1a 深藍色散點較多且分散，并與中性粒細胞散點融合，分界不清；出現(xiàn)圖1 散點時，鏡檢發(fā)現(xiàn)血小板多呈輕到中度聚集。圖2 藍色較多且較分散，并分為兩群，一群與中性粒細胞及單核細胞散點輕度融合，另一群位于中性粒細胞正下方，出現(xiàn)圖2 散點時，鏡檢發(fā)現(xiàn)血小板聚集較嚴重，可有大群聚集現(xiàn)象。所以日常工作中，無論是散點圖異常還是報警信息異常，都必須鏡檢復查，以確保血小板檢驗數(shù)據(jù)的可靠性和準確性。血小板是人體血液中較為重要的血細胞，在病理、生理中發(fā)揮著很重要的止凝血功能。其檢測結(jié)果受諸多因素影響：如采血后是否立即輕輕顛倒搖勻、各種原因引起血栓前狀態(tài)引起的聚集、大量巨大血小板及小紅細胞的存在及藥物影響等。

綜上所述，在計數(shù)血小板數(shù)量的同時，結(jié)合白細胞散點圖，血小板直方圖及儀器報警信息，必要時采用顯微鏡觀察血涂片染色后的血小板形態(tài)、聚集性和分布情況，對快速篩選出血小板聚集的異常標本，對判斷、分析血小板的數(shù)量和質(zhì)量具有重要的意義，是發(fā)出一份高質(zhì)量血細胞分析檢驗報告所不可缺少的必備技能。