費(fèi)冰茹， 周 惠， 王蘇雨， 莊 凌

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一醫(yī)院, 江蘇 淮安 223000)

慢性腎臟病(Chronic kidney disease，CKD)在全球?qū)儆诎l(fā)病率高、死亡率高、疾病負(fù)擔(dān)高的慢性疾病，對(duì)公共衛(wèi)生系統(tǒng)產(chǎn)生較大負(fù)擔(dān)[1]。當(dāng)慢性腎臟病患者代謝產(chǎn)物和毒素?zé)o法排出時(shí)可進(jìn)展至終末期腎臟病(End-stage renal disease，ESRD)階段，雖然腹膜透析或血液透析治療在一定程度上可延長(zhǎng)患者預(yù)期壽命，但是目前仍缺乏有效的生物標(biāo)志物，用于病情及預(yù)后的評(píng)估[2,3]。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA，LncRNA)是一類長(zhǎng)度超過200bp的非編碼RNA，近年來研究[4,5]不斷闡明了LncRNA參與遺傳性疾病、腫瘤、肝、腎疾病調(diào)控過程。目前研究[6]發(fā)現(xiàn)LncRNA存在多個(gè)細(xì)胞來源，在不同疾病中發(fā)揮多樣化生物調(diào)控作用，其中LncRNA CASC15被發(fā)現(xiàn)參與腎臟足細(xì)胞損傷過程，而敲低LncRNA MALAT1 則與急性腎損傷緩解有關(guān)；對(duì)接受血液透析治療的終末期腎臟病患者而言，其血清中LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表達(dá)改變及其臨床意義尚不明確，本研究對(duì)此進(jìn)行探討，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象:選擇本院2019年1月至2020年12月開始規(guī)律透析治療終末期腎臟病患者為研究組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①以CKD-MDRD公式計(jì)算估算的腎小球?yàn)V過率(Estimated glomerular filtration rate，eGFR)，符合KDIGO標(biāo)準(zhǔn)中CKD5期診斷。②首次在本院行血液透析且入院時(shí)病情穩(wěn)定。③臨床資料完整。④>18周歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并惡性腫瘤。②合并嚴(yán)重感染性疾病。③透析治療史。④未完成隨訪。經(jīng)篩選共納入終末期腎臟病患者62例，按照1∶1比例隨機(jī)選擇本院首次開始透析治療的CKD Ⅲ～Ⅳ期患者62例為對(duì)照組，研究組和對(duì)照組性別、年齡、原發(fā)疾病比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究納入對(duì)象均簽署知情同意書且研究設(shè)計(jì)嚴(yán)格遵循《赫爾辛基宣言》。

1.2臨床資料:①通過電子病歷系統(tǒng)獲取所有患者性別、年齡和原發(fā)疾病情況。②研究組均在首次開始透析前1d抽血，采用SYSMEX五分類全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀(日本希森美康)和Cobas c800全自動(dòng)生化分析儀(美國(guó)羅氏公司)對(duì)血液標(biāo)本中血肌酐(Serum creatinine，SCr)、尿酸(uric acid，UA)、eGFR、總膽固醇(Total cholesterol，TC)、甘油三酯(Triglycerides，TG)、尿素氮(Urea Nitrogen，BUN)、血紅蛋白、C反應(yīng)蛋白(C reactive protein，CRP)、血鈣和血磷含量進(jìn)行檢測(cè)。

1.3血清LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表達(dá)檢測(cè):研究組、對(duì)照組均在首次開始透析前1d抽取外周靜脈血3mL，常規(guī)分離血清后以Trizol法(日本TAKARA公司)提取外周血總RNA，以NanoDrop2000超微量分光光度計(jì)分析RNA純度及濃度，合格標(biāo)本并按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書規(guī)定步驟將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，保存于-80℃?zhèn)溆谩０凑瘴墨I(xiàn)[7,8]中所用LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1引物序列合成相關(guān)引物，并使用GAPDH作為內(nèi)參基因，引物合成由南京金斯瑞生物公司合成。以實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time Quantitive Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)基于SYBR Green法擴(kuò)增目的序列，反應(yīng)體系為25μL，反應(yīng)條件設(shè)置為：預(yù)變性95℃ 3min，95℃ 30s，60℃ 30s，72℃ 36s，35個(gè)循環(huán)結(jié)束后，以2-ΔΔct法計(jì)算LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1相對(duì)表達(dá)量，根據(jù)計(jì)算結(jié)果中位數(shù)，將研究組患者分為L(zhǎng)ncRNA CASC15高表達(dá)組、LncRNA CASC15低表達(dá)組、LncRNA MALAT1高表達(dá)組、LncRNA MALAT1低表達(dá)組。

1.4隨訪:所有患者均在首次開始進(jìn)入血液透析之日起接受隨訪，隨訪間隔為3個(gè)月，隨訪終點(diǎn)為隨訪達(dá)到1年或患者全因死亡，統(tǒng)計(jì)所有尿毒癥患者開始血液透析1年可能導(dǎo)致患者死亡的臨床終點(diǎn)事件，包括心血管事件(心力衰竭、嚴(yán)重心律失常、心肌梗死)、腦血管意外、嚴(yán)重感染、消化道出血和放棄治療情況。

2 結(jié) 果

2.1兩組一般資料比較:研究組血清LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表達(dá)顯著高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組血清LncRNA CASC15和LncRNA MALAT1表達(dá)比較

2.2研究組LncRNA CASC15高表達(dá)和低表達(dá)臨床資料比較:LncRNA CASC15高表達(dá)組和LncRNA CASC15低表達(dá)組性別、年齡、原發(fā)病、UA、TC、TG、CRP、血鈣和血磷比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，LncRNA CASC15高表達(dá)組SCr、BUN高于LncRNA CASC15低表達(dá)組，eGFR、血紅蛋白低于LncRNA CASC15低表達(dá)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 研究組LncRNA CASC15高表達(dá)和低表達(dá)臨床資料比較

2.3研究組LncRNA MALAT1高表達(dá)和低表達(dá)臨床資料比較:研究組LncRNA MALAT1高表達(dá)和LncRNA MALAT1低表達(dá)組性別、年齡、原發(fā)疾病、TC、TG、BUN、CRP、血鈣和血磷水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；LncRNA MALAT1高表達(dá)SCr、UA、BUN高于LncRNA MALAT1低表達(dá)組，eGFR、血紅蛋白低于低表達(dá)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

2.4不同LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表達(dá)水平發(fā)生終點(diǎn)事件比較:不同LncRNA CASC15表達(dá)水平尿毒癥患者發(fā)生心血管事件、全因死亡率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，不同LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表達(dá)水平放棄治療(全因死亡)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，不同LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表達(dá)水平分組腦血管意外、嚴(yán)重感染和消化道出血發(fā)生率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表4、表5。

表5 不同LncRNA MALAT1表達(dá)水平發(fā)生終點(diǎn)事件比較

3 討 論

由于地區(qū)經(jīng)濟(jì)水平差異、患者情況差異等諸多因素影響，終末期腎臟病患者進(jìn)入血液透析時(shí)機(jī)存在較大差異。糖尿病腎病已成為終末期腎臟病患者進(jìn)入血液透析的首要病因，其原因可能與合并糖尿病患者來院復(fù)查次數(shù)較多，相關(guān)檢查較多，易于發(fā)現(xiàn)腎功能改變有關(guān)。目前臨床中針對(duì)終末期腎臟病患者發(fā)生各類臨床終點(diǎn)時(shí)間的危險(xiǎn)因素已有較多報(bào)道，但尚缺乏有效的生物標(biāo)記物反映患者整體性功能狀態(tài)并對(duì)其預(yù)后進(jìn)行準(zhǔn)確預(yù)測(cè)。

LncRNA CASC15在既往報(bào)道中主要被發(fā)現(xiàn)參與急性腎損傷、膀胱癌、肝細(xì)胞癌等惡性腫瘤病理發(fā)展過程，與LncRNA CASC15相比LncRNA MALAT1與腎相關(guān)疾病關(guān)系已有較多報(bào)道：Liu等[7]研究發(fā)現(xiàn)lncRNA MALAT1參與梗阻性腎病腎組織細(xì)胞纖維化進(jìn)程；Zhou等[8]研究結(jié)果中，LncRNA MALAT1在糖尿病腎病患者中高表達(dá)，與肌酐等傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)可提高糖尿病腎病診斷價(jià)值；本研究結(jié)果顯示研究組血清LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表達(dá)顯著高于對(duì)照組，說明與CKD3～4期患者相比，CKD5期患者LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1呈顯著上調(diào)，可能與CKD3～4進(jìn)展至CKD5期有一定關(guān)聯(lián)；本研究進(jìn)一步分析首次終末期腎臟病開始血液透析前LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1與臨床資料關(guān)系，結(jié)果顯示二者均與SCr、BUN、eGFR、血紅蛋白等終末期腎臟病患者腎功能指標(biāo)及營(yíng)養(yǎng)功能指標(biāo)相關(guān)，在UA指標(biāo)上存在一定差異。說明LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1可能參與了終末期腎臟病患者腎功能惡化進(jìn)程，但不同LncRNA 影響腎功能指標(biāo)差異可能與指標(biāo)有關(guān)或與病例數(shù)較少有關(guān)還需進(jìn)一步研究。

包括心力衰竭、嚴(yán)重心律失常、心肌梗死等在內(nèi)的心血管事件是導(dǎo)致終末期腎臟病患者血液透析期間死亡的重要原因之一，在本研究統(tǒng)計(jì)結(jié)果中心血管事件相較其他臨床終點(diǎn)事件發(fā)生率也較高。本研究比較結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表達(dá)水平發(fā)生心血管事件和放棄治療(全因死亡)存在顯著差異，說明LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1表達(dá)對(duì)終末期腎臟病血液透析患者預(yù)后有一定影響，而腦血管意外、嚴(yán)重感染和消化道出血發(fā)生率無差異，可能與本研究納入患者病例數(shù)較少有關(guān)。足細(xì)胞是腎小球上“章魚樣”高度特異性細(xì)胞，是腎小球?yàn)V過屏障的重要組成部分，足細(xì)胞損傷是導(dǎo)致CKD患者病理進(jìn)展的重要機(jī)制，Qin等[9]研究顯示LncRNA CASC15在糖尿病誘導(dǎo)的慢性腎功能衰竭中可通過下調(diào)miR-34c表達(dá)的方式促進(jìn)足細(xì)胞凋亡過程，LncRNA MALAT1則可通過調(diào)控ERK/MAPK信號(hào)通路對(duì)糖尿病大鼠微血管病變和糖尿病腎病產(chǎn)生促進(jìn)作用[10]，據(jù)此研究結(jié)果推測(cè)，LncRNA CASC15和LncRNA MALAT1可能分別通過影響足細(xì)胞凋亡和微血管病變途徑影響終末期腎臟病患者心血管并發(fā)癥和預(yù)后。

綜上所述，本研究分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)LncRNA CASC15、LncRNA MALAT1在終末期腎臟病血液透析患者血清中顯著上調(diào)，與患者臨床參數(shù)和透析臨床終點(diǎn)時(shí)間密切相關(guān)，有望成為治療靶點(diǎn)進(jìn)行深入研究，但本研究為單中心研究，隨訪過程中無法對(duì)所有變量完全控制，所得結(jié)論還需更大樣本的前瞻性研究檢驗(yàn)和完善。