王 芳， 彭湘蓮， 王玲華， 楊玉香， 郭映林， 劉銀燕

(湖南省婦幼保健院新生兒一科， 湖南 長(zhǎng)沙 410008)

肺炎作為新生兒中常見(jiàn)疾病，可發(fā)生與宮內(nèi)、分娩過(guò)程中以及分娩成功后，在臨床上成為產(chǎn)前、產(chǎn)時(shí)、產(chǎn)后感染性肺炎，可由多種病原體感染導(dǎo)致，包括病毒、細(xì)菌、真菌以及支原體等，是新生兒致死的重要因素之一[1]。臨床研究發(fā)現(xiàn)[2]，新生兒肺炎發(fā)生后臨床癥狀并不明顯，且目前對(duì)于新生兒肺炎的致病機(jī)制尚不完全明確，缺乏特異性診斷指標(biāo)。且目前臨床上多采用廣譜抗生素對(duì)新生兒肺炎患兒進(jìn)行治療，較易出現(xiàn)抗菌藥物使用不規(guī)范等現(xiàn)象，因而引發(fā)菌株耐藥，因此導(dǎo)致患兒預(yù)后恢復(fù)不良[3]。因此早期診斷尤為重要，尋找有效診斷新生兒肺炎的敏感指標(biāo)對(duì)肺炎患者預(yù)后具有重要的意義。

1 材料與方法

1.1材料:研究對(duì)象：選取2020年1月至2021年1月我院收治的新生兒肺炎患兒80例作為新生兒肺炎組，男45例，女35例，平均日齡(9.53±1.52)d，平均體重(4.56±0.68)kg，根據(jù)細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)、血清學(xué)檢測(cè)分為非細(xì)菌性感染組46例、細(xì)菌性感染組34例；重癥組21例患兒：腋溫≥38.5℃，除哭鬧、發(fā)熱等因素外，呼吸頻率≥70次/分[4]；中癥組25例患兒：腋溫≥38℃，除哭鬧、發(fā)熱等因素外，呼吸頻率≥60次/分；輕癥組34例患兒：腋溫≥37.5℃，除哭鬧、發(fā)熱等因素外，呼吸頻率≥50次/分[5]；三組患兒均存在不同程度的拒食、呼吸呻吟、間歇性呼吸暫停、發(fā)紺、鼻扇、胸壁吸氣性凹陷等癥狀。根據(jù)患兒疾病恢復(fù)情況分為恢復(fù)期組30例、急性期組50例。另外同期選取我院新生兒科足月新生兒80例作為健康對(duì)照組，男42例，女38例，平均日齡(9.56±1.60)d，平均體重(5.12±0.72)kg。所有患兒一般資料比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：新生兒肺炎患兒符合《實(shí)用新生兒學(xué)》[4]中新生兒肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。健康對(duì)照組新生兒無(wú)肺部疾病，身體健康。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他肺部疾病者；合并呼吸道疾病者；合并先天肺功能障礙者；合并消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)疾病者；糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥物濫用史者；心、肝、腎功能不全者。

1.2方 法

1.2.1HMGB1、TGF-β1表達(dá)水平檢測(cè):采集所有患兒空腹外周靜脈血5mL，常溫靜置，高速離心(轉(zhuǎn)速：3000r/min，半徑：12cm)10min，分離上清，采用雙抗體夾心ELISA法測(cè)定HMGB1、TGF-β1水平，設(shè)置酶標(biāo)板為空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔，每孔內(nèi)均加入50μL稀釋液，空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔內(nèi)依次加入樣品稀釋液、標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣片各50μL，輕晃均勻，酶標(biāo)板覆膜，室溫孵育2h。棄孔內(nèi)液體，甩干，清洗反應(yīng)板。加入HMGB1、TGF-β1檢測(cè)液100μL/孔，覆膜，常溫孵育60min，棄液體，甩干、洗滌反應(yīng)板，加入100μL/孔底物溶液，遮光顯色0.5h，加入終止液，輕彈酶標(biāo)板終止反應(yīng)。根據(jù)酶標(biāo)儀(型號(hào)iMark，Bio-RAD公司)450nm處標(biāo)準(zhǔn)品和樣品于吸光值，計(jì)算樣品含量，嚴(yán)格按照儀器說(shuō)明進(jìn)行操作。

1.2.2PCT測(cè)定:采用飛測(cè)免疫熒光檢測(cè)儀(廣州萬(wàn)孚生物技術(shù)股份有限公司)及配套試劑盒測(cè)定PCT水平，嚴(yán)格按照儀器說(shuō)明進(jìn)行操作。

2 結(jié) 果

2.1健康對(duì)照組、新生兒肺炎組血清HMGB1、PCT、TGF-β1的表達(dá)水平比較:新生兒肺炎組血清HMGB1、PCT、TGF-β1表達(dá)水平均高于健康對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 健康對(duì)照組新生兒肺炎組血清HMGB1 PCT TGF-β1的表達(dá)水平比較

2.2非細(xì)菌性感染組、細(xì)菌性感染組患兒血清HMGB1、PCT、TGF-β1表達(dá)水平比較:細(xì)菌性感染組患兒血清HMGB1、PCT、TGF-β1表達(dá)水平均高于非細(xì)菌性感染組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 非細(xì)菌性感染組細(xì)菌性感染組患兒血清HMGB1 PCT TGF-β1表達(dá)水平比較

2.3輕癥組、重癥組患兒血清HMGB1、PCT、TGF-β1表達(dá)水平比較:重癥組患兒血清HMGB1、PCT、TGF-β1表達(dá)水平均高于輕癥組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 輕癥組重癥組患兒血清HMGB1 PCT TGF-β1表達(dá)水平比較

2.4急性期組、恢復(fù)期組患兒血清HMGB1、PCT、TGF-β1表達(dá)水平比較:急性期組患兒血清HMGB1、PCT、TGF-β1表達(dá)水平均高于恢復(fù)期組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，見(jiàn)表4。

表4 急性期組恢復(fù)期組患兒血清HMGB1 PCT TGF-β1表達(dá)水平比較

2.5HMGB1、PCT、TGF-β1之間相關(guān)性分析:HMGB1、PCT、TGF-β1之間Pearson相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，HMGB1與PCT正相關(guān)(r=0.261，P=0.019)；HMGB1與TGF-β1正相關(guān)(r=0.245，P=0.027)；PCT與TGF-β1正相關(guān)(r=0.479，P=0.001)，見(jiàn)圖1。

圖1 HMGB1、PCT、TGF-β1之間相關(guān)性分析

3 討 論

新生兒肺炎在新生兒呼吸道系統(tǒng)疾病中較為常見(jiàn)，以吐沫、呼吸困難、咳嗽、發(fā)熱等為臨床表現(xiàn)。臨床中新生兒肺炎被分為感染性肺炎、吸入性肺炎，此病的發(fā)生與患兒呼吸道功能發(fā)育不完善、機(jī)體免疫功能障礙相關(guān)，若不對(duì)新生兒肺炎患兒進(jìn)行及時(shí)有效的治療，嚴(yán)重者可導(dǎo)致新生兒死亡，因此早期診斷對(duì)新生兒肺炎患兒預(yù)后恢復(fù)具有重要的意義[5]。

HMGB1作為晚期炎性介質(zhì)之一，當(dāng)細(xì)胞發(fā)生壞死后被釋放入血呈異常高表達(dá)，在炎癥反應(yīng)進(jìn)展、機(jī)體組織損傷中具有重要的意義[6]。臨床有研究發(fā)現(xiàn)[7]，HMGB1可有活化的巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞所分泌并釋放，在細(xì)胞外炎性疾病過(guò)程中發(fā)揮促炎癥反應(yīng)作用，為肺炎晚期的炎性反應(yīng)介質(zhì)，與致死性炎性反應(yīng)相關(guān)。李佳等[8]在其研究中發(fā)現(xiàn)，重癥肺炎患兒支氣管肺泡灌洗液中HMGB1呈異常高表達(dá)。本文研究結(jié)果顯示，新生兒肺炎患兒血清HMGB1水平高于健康新生兒，在細(xì)菌性感染、重癥、急性期患兒血清中表達(dá)水平升高，此結(jié)果說(shuō)明，HMGB1在新生兒肺炎中高表達(dá)，且與新生兒肺炎患兒是否為細(xì)菌性感染、疾病嚴(yán)重程度、疾病轉(zhuǎn)歸情況相關(guān)。

PCT作為無(wú)激素活性降鈣素前肽物質(zhì)，其穩(wěn)定性較好，在機(jī)體處于正常生理狀態(tài)下，甲狀腺素細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生PCT，可在細(xì)胞中經(jīng)特異性蛋白水解過(guò)程中生成降鈣素[9]。臨床研究發(fā)現(xiàn)[10]，在機(jī)體處于感染性病理狀態(tài)下，PCT會(huì)由肝臟巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、內(nèi)分泌細(xì)胞、肺、腸道組織的淋巴細(xì)胞等除甲狀腺器官、組織所分泌，表現(xiàn)為異常高表達(dá)。在細(xì)菌感染時(shí)血漿PCT含量顯著上升，在局部炎癥反應(yīng)、病毒感染等疾病發(fā)生時(shí)，保持于低水平狀態(tài)，PCT含量變化穩(wěn)定且迅速，可用于細(xì)菌感染、病毒感染類(lèi)疾病[11]。本文研究結(jié)果顯示，與健康新生兒相比，新生兒肺炎患兒血清PCT水平顯著升高，在細(xì)菌性感染、重癥、急性期患兒血清中表達(dá)水平升高，此結(jié)果說(shuō)明，PCT在新生兒肺炎中高表達(dá)，且與新生兒肺炎患兒是否為細(xì)菌性感染、疾病嚴(yán)重程度、疾病轉(zhuǎn)歸情況相關(guān)。

TGF-β1功能較多，屬于一種細(xì)胞因子，具有較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)功能和復(fù)雜的生物學(xué)功能，目前有研究顯示[12]，局部TGF-β1可激活炎癥反應(yīng)，具有激活和招募白細(xì)胞，促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展，而初始T細(xì)胞可分化全身系統(tǒng)TGF-β1為T(mén)h1/Th2，抑制其作用過(guò)程，維持機(jī)體免疫功能。另外有研究發(fā)現(xiàn)[13]，TGF-β1作為促纖維化細(xì)胞因子，可經(jīng)自身或者自身外所分泌的方式對(duì)成纖維細(xì)胞進(jìn)行刺激，促進(jìn)纖維細(xì)胞生成細(xì)胞基質(zhì)蛋白，作用于膠原翻譯、轉(zhuǎn)錄過(guò)程，最終促進(jìn)肺纖維化。彭敏等[14]在其研究中發(fā)現(xiàn)，肺炎支原體肺炎患兒血清TGF-β1表現(xiàn)為異常高表達(dá)，另外Muhammet Furkan Korkmaz等[15]同樣證實(shí)，肺炎的發(fā)生與TGF-β1高表達(dá)相關(guān)。本文研究結(jié)果顯示，TGF-β1在新生兒肺炎患兒外周血中呈異常高表達(dá)，在細(xì)菌性感染、重癥、急性期患兒血清中表達(dá)水平升高，此結(jié)果說(shuō)明，TGF-β1在新生兒肺炎中高表達(dá)，且與新生兒肺炎患兒是否為細(xì)菌性感染、疾病嚴(yán)重程度、疾病轉(zhuǎn)歸情況相關(guān)。

另外在本文研究中分析HMGB1、PCT、TGF-β1三者之間相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，三者之間呈現(xiàn)為正相關(guān)，此結(jié)果說(shuō)明三者可能共同參與新生兒肺炎的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，HMGB1、PCT、TGF-β1在新生兒肺炎中高表達(dá)，與患兒細(xì)菌性感染、嚴(yán)重程度、疾病轉(zhuǎn)歸相關(guān)，且三者呈現(xiàn)為正相關(guān)，共同參與此病的發(fā)生發(fā)展。