劉丁香

(四川省遂寧市中心醫(yī)院兒科， 四川 遂寧 629000)

支氣管哮喘簡稱哮喘，是兒童期常見慢性疾病，數(shù)據(jù)表明，我國約有30%的兒童哮喘未得到明確診斷，且超過20%的哮喘患兒病情未得到有效控制[1]。早期診斷并開展規(guī)范化干預(yù)、管理，被認(rèn)為是改善哮喘患兒預(yù)后質(zhì)量的重要手段，但在臨床實踐中，不同患兒對相同治療策略的反應(yīng)存在較大差距，其原因一方面與患兒過敏史、家族史、免疫功能等因素有關(guān)，另一方面，哮喘易感基因變異也被認(rèn)為與哮喘的早期診斷及預(yù)后密切相關(guān)[2]。大量研究顯示，哮喘存在明顯家族聚集傾向，且受遺傳、基因等因素影響[3,4]。單核苷酸多態(tài)性(SNP)是人類最常見的可遺傳變異類型，DNA序列多態(tài)性約占已知多態(tài)性的90%以上。有研究發(fā)現(xiàn)，ACE I/D、ADRB2 Arg16Gly哮喘基因相關(guān)位點的SNP與兒童哮喘的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[5]?；诩韧芯拷Y(jié)論，此次研究就兒童哮喘基因表達(dá)情況與其臨床預(yù)后、藥物療效的相關(guān)性進(jìn)行了分析，望為兒童哮喘的個體化治療提供參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1研究對象：篩選我院2020年1月至2021年1月收治的140例哮喘患兒，開展病例對照研究。篩選標(biāo)準(zhǔn)：參照《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》明確哮喘診斷[6]：①反復(fù)發(fā)作的咳嗽、喘息、氣促或胸悶發(fā)作>3次；②癥狀發(fā)作時伴雙肺散在或彌漫性哮鳴音，呼氣相為主；③經(jīng)抗哮喘治療后可緩解；④存在可逆性氣流受限證據(jù)；⑤排除可能引起相關(guān)癥狀的其他疾??；年齡≤14歲；能夠順利完成肺功能檢查；接受糖皮質(zhì)激素類藥物治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①處于哮喘發(fā)作急性期；②處于其他過敏性疾病急性發(fā)作期；③合并心、骨骼、肌肉等器官、組織嚴(yán)重病變；④合并其他慢性消耗性疾病。140例患兒中，男87例，女53例，年齡1～14歲，平均(4.71±0.58)歲。本研究已征得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患兒監(jiān)護(hù)人均知情同意并簽署書面協(xié)議。

1.2檢測方法：患兒入組后，以無菌毛刷采集其口腔黏膜細(xì)胞，行DNA提取后置入固定藥液內(nèi)。將標(biāo)本送至上海解碼醫(yī)學(xué)檢驗所，以DNA測序及熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)，就患兒ACE I/D、ADRB2 Arg16Gly哮喘基因相關(guān)位點的SNP進(jìn)行檢測。首先以PCR技術(shù)對ACE I/D、ADRB2 Arg16Gly等位基因進(jìn)行DNA提取及擴增處理，而后采用比色法進(jìn)行DNA鑒定、定量及DNA工作液準(zhǔn)備：取DNA溶液1μL，加入蒸餾水至100μL，以蒸餾水為空白對照，使用紫外分光光度計檢測吸光度，吸光度×5000即為DNA濃度(μg/mL)，而后根據(jù)實際濃度稀釋為工作液。此后根據(jù)ACE I/D、ADRB2 Arg16Gly等位基因所編碼蛋白質(zhì)第二外顯子，設(shè)計特異性引物，完成位點擴增及結(jié)果鑒定。

1.3分析方法：分析哮喘患兒ACE I/D、ADRB2 Arg16Gly基因檢測結(jié)果，包括基因型及等位基因頻次。參照文獻(xiàn)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[7]，按照患兒基因檢測結(jié)果進(jìn)行分組，就不同組別患兒臨床預(yù)后、糖皮質(zhì)激素藥物治療效果進(jìn)行比較?；純壕鶇⒄諆和夤芟\斷與防治指南接受規(guī)范化治療，患兒治療方案均由同組醫(yī)師制定，維持治療方案的統(tǒng)一性。臨床預(yù)后評估使用哮喘控制測試(CAT)評分，CAT總分27分，評分<19分為未控制，19～22分為部分控制，≥23分為良好控制；控制為部分控制、良好控制之和。治療效果評價標(biāo)準(zhǔn)：顯效：臨床癥狀基本消失；有效：臨床癥狀及肺功能顯著好轉(zhuǎn)；無效：未達(dá)到顯效、有效標(biāo)準(zhǔn)；總有效為顯效、有效之和。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析：使用SPSS22.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析本研究相關(guān)數(shù)據(jù)，病情控制、治療總有效等計數(shù)資料n(%)表示，并采用χ2檢驗、校正χ2檢驗。當(dāng)P<0.05時為差異存在統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1基因檢測結(jié)果：140例患兒ACE I/D基因型以DD為主，D基因與I基因的優(yōu)勢比為1.98；ADRB2 Arg16Gly基因型以AG為主，G基因與A基因的優(yōu)勢比為1.89。見表1、2。

表1 140例患兒ACE I/D基因型及等位基因頻次檢測結(jié)果(n=140)

表2 140例患兒ADRB2 Arg16Gly基因型及等位基因頻次檢測結(jié)果(n=140)

2.2不同ACE I/D基因型患兒臨床預(yù)后及用藥效果：ACE I/D基因型為DD型患兒病情控制率、治療總有效率低于Ⅱ型、ID型患兒。見表3、4。

表3 不同ACE I/D基因型患兒臨床預(yù)后比較n(%)

表4 不同ACE I/D基因型患兒治療效果比較n(%)

2.3不同ADRB2 Arg16Gly基因型患兒臨床預(yù)后及用藥效果：ADRB2 Arg16Gly基因型為GG型患兒病情控制率、治療總有效率低于AA型、AG型患兒。見表5、6。

表5 不同ADRB2 Arg16Gly基因型患兒臨床預(yù)后比較n(%)

表6 不同ADRB2 Arg16Gly基因型患兒治療效果比較n(%)

3 討 論

哮喘的發(fā)生發(fā)展不僅與環(huán)境因素有關(guān)，也受遺傳因素影響，故其發(fā)病機制復(fù)雜，且呈多因性、異質(zhì)性，并呈明顯家族聚集傾向[8]。SNP是人類常見可遺傳變異，具有分布廣泛、數(shù)量龐大、易于基因分型等優(yōu)勢，已廣泛應(yīng)用于高危人群的規(guī)范化篩查。目前，關(guān)于哮喘易感基因及SNP的研究已發(fā)現(xiàn)超過200種基因與哮喘的密切關(guān)聯(lián)，且國內(nèi)研究已證實兒童哮喘發(fā)生與ACE I/D、ADRB2 Arg16Gly位點多態(tài)性有關(guān)[9]。

此次研究就140例哮喘患兒ACE I/D、ADRB2 Arg16Gly基因型進(jìn)行了無創(chuàng)檢測，結(jié)果顯示，患兒ACE I/D基因型以DD為主，D基因與I基因的優(yōu)勢比為1.98；ADRB2 Arg16Gly基因型以AG為主，G基因與A基因的優(yōu)勢比為1.89。該結(jié)果與Saik等[10]報道結(jié)果接近，印證了ACE I/D、ADRB2 Arg16Gly基因與哮喘的關(guān)聯(lián)。ACE基因位于染色體17q23，包含25個內(nèi)含子、26個外顯子，其中，第16內(nèi)含子存在I/D(插入/缺失)多態(tài)性，故使ACE基因出現(xiàn)II、ID、DD三種基因型。不同基因型與機體ACE調(diào)控，以及機體血漿、細(xì)胞內(nèi)ACE表達(dá)密切相關(guān)，例如，DD型表達(dá)者ACE活性高達(dá)Ⅱ型的2倍，而作為腎素-血管緊張素系統(tǒng)關(guān)鍵酶，ACE可將血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)變?yōu)檠芫o張素Ⅱ，提高血管收縮活性；同時，ACE還可影響P物質(zhì)、緩激肽活性，與機體尤其是氣道內(nèi)炎癥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，ACE基因型為DD型哮喘患兒臨床預(yù)后較差、糖皮質(zhì)激素治療反應(yīng)性較弱，即考慮與DD基因?qū)CE表達(dá)的激活作用有關(guān)。

與ACE基因相仿，ADRB2基因編碼區(qū)的突變，可引發(fā)編碼第16位氨基酸發(fā)生Arg向Gly改變，進(jìn)而影響氨基酸序列。一項研究顯示，Gly16不僅與夜間哮喘有關(guān)，也可能對β2激動劑的反應(yīng)性造成影響[11]。在本研究中，患兒ADRB2 Arg16Gly基因型以AG為主，表明AG型Arg16Gly基因型可能與更高的哮喘易感性有關(guān)。同時，GG型Arg16Gly基因型患兒病情控制率、治療總有效率均更低，與Qiu等[12]研究結(jié)果相仿，意味著不同Arg16Gly基因型哮喘患兒對糖皮質(zhì)激素的治療反應(yīng)存在明顯差別，而GG型Arg16Gly基因患兒對糖皮質(zhì)激素類藥物治療的反應(yīng)性較差。因此，針對DD型ACE基因、GG型Arg16Gly基因哮喘患兒而言，應(yīng)重視常規(guī)治療方案的局限性，盡可能探索更為有效、更具備針對性的治療策略。

綜上所述，哮喘患兒哮喘基因相關(guān)位點SNP表達(dá)存在明顯差異且與患兒臨床預(yù)后、藥物治療反應(yīng)密切相關(guān)，ACE I/D基因型DD型、ADRB2 Arg16Gly基因型GG型患兒臨床預(yù)后普遍較差且對糖皮質(zhì)激素治療反應(yīng)有限。建議根據(jù)患兒基因型表達(dá)特點預(yù)測其臨床預(yù)后，并設(shè)定具備針對性的個體化治療策略。