馬 濤，劉 哲

(1.山西省檢驗(yàn)檢測(cè)中心(山西省標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量技術(shù)研究院)，山西 太原 030025；2.吉林省農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣總站，吉林 長(zhǎng)春 130033)

1 前言

唑蟲(chóng)酰胺(Tolfenpyrad)最早由日本農(nóng)藥株式會(huì)社于2009年在我國(guó)登記，分子式為C21H22ClN3O2，CAS登錄號(hào)129558-76-5。易溶于丙酮和甲醇，難溶于水，水中較穩(wěn)定。是一種新型吡唑酰胺類(lèi)殺蟲(chóng)殺螨劑，它的主要作用機(jī)制是阻止昆蟲(chóng)的氧化磷酸化作用，還具有殺卵、抑食、抑制產(chǎn)卵及殺菌作用，殺蟲(chóng)譜很廣，對(duì)各種嶙翅目、半翅目、甲蟲(chóng)目、膜翅目、雙翅目害蟲(chóng)及螨類(lèi)具有較高的防治效果，觸殺為主，無(wú)內(nèi)吸性[1-2]。氰氟蟲(chóng)腙(Metaflumizone)，最早由巴斯夫歐洲公司于2008年在我國(guó)取得登記，分子式為C24H16F6N4O2，CAS登錄號(hào)139968-49-3。水中溶解度低，可溶于乙腈，易溶于丙酮、乙酸乙酯，在水和光中迅速分解。氰氟蟲(chóng)腙是一種縮氨基脲類(lèi)殺蟲(chóng)劑，作用機(jī)制獨(dú)特，本身具有殺蟲(chóng)活性，不需要生物激活，對(duì)鱗翅目和鞘翅目幼蟲(chóng)具有明顯的防治效果，如常見(jiàn)的稻縱卷葉螟、甜菜夜蛾、棉鈴蟲(chóng)、甘藍(lán)夜蛾、小菜蛾、小地老虎、水稻二化螟等，另外，該藥用于防治螞蟻、白蟻、紅火蟻、蠅及蟑螂等非作物害蟲(chóng)方面也很有潛力[3]。這兩種有效成分殺蟲(chóng)譜可以很好地互補(bǔ)，有廣泛的應(yīng)用前景。

截止2022年初，國(guó)內(nèi)尚無(wú)唑蟲(chóng)酰胺和氰氟蟲(chóng)腙混配制劑取得農(nóng)藥登記證，據(jù)了解，有若干農(nóng)藥生產(chǎn)企業(yè)正在辦理相關(guān)產(chǎn)品登記事宜。國(guó)內(nèi)該混劑的分析方法尚未見(jiàn)報(bào)道，本文介紹了一種用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定唑蟲(chóng)酰胺和氰氟蟲(chóng)腙，該方法操作比較簡(jiǎn)單、快速，分離效果好，準(zhǔn)確度、精密度和線性關(guān)系均能滿足定量分析要求，是一種比較實(shí)用的方法。

2 試驗(yàn)部分

2.1 試劑和溶液 超純水(電阻率：18.2 MΩ.cm，25℃)；乙腈(色譜純)；氰氟蟲(chóng)腙標(biāo)樣98.7%；唑蟲(chóng)酰胺標(biāo)樣97.4%；30%唑蟲(chóng)酰胺·氰氟蟲(chóng)腙懸浮劑(氰氟蟲(chóng)腙20%、唑蟲(chóng)酰胺10%)。

2.2 儀器 Agilent 1200 液相色譜儀(配原廠色譜工作站、在線脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、DAD檢測(cè)器)；梅特勒 AG 285 十萬(wàn)分之一電子天平；過(guò)濾器(0.45μm)；Millipore QG超純水機(jī)；超聲波清洗機(jī)；常用玻璃器皿。

2.3 液相色譜條件 色譜柱：Agilent TC-C18，250mm×4.6mm，粒徑5μm不銹鋼柱；柱溫：30℃；流動(dòng)相：乙腈：水(0.1%磷酸)=80：20(V/V)[1-4]；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm；進(jìn)樣量：5.0μL。在上述條件下，唑蟲(chóng)酰胺和氰氟蟲(chóng)腙的保留時(shí)間分別約為6.1min和5.6min(圖1、圖2)。

圖1 氰氟蟲(chóng)腙和唑蟲(chóng)酰胺混標(biāo)液相色譜圖

圖2 試樣液相色譜圖

2.4 測(cè)定步驟

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 稱(chēng)取氰氟蟲(chóng)腙標(biāo)準(zhǔn)品0.1g(精確至0.000 02g)、唑蟲(chóng)酰胺標(biāo)準(zhǔn)品0.05g(精確至0.000 02g)于同一100mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，超聲振蕩10min，靜置到室溫，搖勻，用 0.45μm 孔徑過(guò)濾器過(guò)濾入進(jìn)樣小瓶中，待用。

2.4.2 試樣溶液的配制 準(zhǔn)確稱(chēng)取0.5g(準(zhǔn)確至0.000 2g)的試樣，置于100mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，超聲振蕩10min，靜置到室溫，搖勻，用 0.45μm 孔徑過(guò)濾器過(guò)濾入進(jìn)樣小瓶中，待用。

2.4.3 測(cè)定 在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針標(biāo)樣溶液的響應(yīng)值相對(duì)變化≤1.5%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

2.4.4 計(jì)算 采用外標(biāo)法計(jì)算。將測(cè)得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣中的氰氟蟲(chóng)腙(或唑蟲(chóng)酰胺)峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中氰氟蟲(chóng)腙(或唑蟲(chóng)酰胺)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X(%)按下式計(jì)算：

式中：

A1—標(biāo)樣溶液中氰氟蟲(chóng)腙(唑蟲(chóng)酰胺)峰面積的平均值；

A2—試樣溶液中氰氟蟲(chóng)腙(唑蟲(chóng)酰胺)峰面積的平均值；

m1—標(biāo)樣氰氟蟲(chóng)腙(唑蟲(chóng)酰胺)的質(zhì)量，g；

m2—試樣的質(zhì)量，g；

p—標(biāo)樣氰氟蟲(chóng)腙(唑蟲(chóng)酰胺)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

3 結(jié)果與討論

3.1 流動(dòng)相的選擇 為確保待測(cè)組分與雜質(zhì)完全分離，分別用乙腈/0.1%磷酸溶液不同比例進(jìn)行了試驗(yàn)。結(jié)果表明，在乙腈：水=80：20(V/V)時(shí)，各待測(cè)組分與雜質(zhì)能得到理想的分離，且基線平穩(wěn)、峰形對(duì)稱(chēng)，分析時(shí)間也較短。

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 分別對(duì)某一濃度氰氟蟲(chóng)腙和唑蟲(chóng)酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析，利DAD檢測(cè)器進(jìn)行光譜掃描，得到二者的紫外吸收光譜圖(圖3、圖4)，可看出二者的最大吸收波長(zhǎng)約為230nm，可選擇波長(zhǎng)范圍較寬。經(jīng)過(guò)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，選擇波長(zhǎng)在280nm處時(shí)，各雜質(zhì)不影響測(cè)定，2個(gè)待測(cè)組分分離度和響應(yīng)滿足要求，且遠(yuǎn)離低波長(zhǎng)紫外區(qū)。

圖3 唑蟲(chóng)酰胺紫外吸收譜圖

圖4 氰氟蟲(chóng)腙紫外吸收譜圖

3.3 精密度測(cè)定 將同一樣品分別稱(chēng)取6份，分別測(cè)定，結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，唑蟲(chóng)酰胺和氰氟蟲(chóng)腙的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.064 807和0.044 907，變異系數(shù)分別為0.65%和0.23%，(表1)。

表1 分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

3.4 準(zhǔn)確度測(cè)定 采取添加回收率測(cè)定方法來(lái)計(jì)算本方法的準(zhǔn)確度，稱(chēng)取5份已知含量的試樣，分別加入一定量的氰氟蟲(chóng)腙和唑蟲(chóng)酰胺標(biāo)樣，在上述2.3色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得唑蟲(chóng)酰胺的平均回收率為99.16%，氰氟蟲(chóng)腙的平均回收率為98.76%，(表2)。

表2 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

3.5 線性關(guān)系的測(cè)定 將已知含量的標(biāo)樣分別配制成一系列已知濃度的梯度溶液(包含分析方法中的檢測(cè)濃度)，以濃度(mg/L)為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制相關(guān)曲線。唑蟲(chóng)酰胺線性方程為：y =1.704 3x+19.141，線性范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)R2為：0.999 9，r=0.999 5；氰氟蟲(chóng)腙線性方程為：y =10.799x+653.13，線性范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)R2為：0.999 8，r=0.999 0，(表3)。

表3 分析方法的線性相關(guān)性試驗(yàn)結(jié)果

3.6 方法特異性測(cè)定 方法特異性是指分析方法中特定組分產(chǎn)生的特定信號(hào)，即在其他成分(如雜質(zhì)、添加劑等)可能存在時(shí)，采用的分析方法能夠準(zhǔn)確測(cè)定目標(biāo)組分(有效成分、雜質(zhì)等)特性的能力[5]。為確證本方法分析2種組分的特異性，用二極管陣列檢測(cè)器分別對(duì)唑蟲(chóng)酰胺和氰氟蟲(chóng)腙標(biāo)準(zhǔn)品及試樣峰的純度進(jìn)行檢測(cè)。經(jīng)檢測(cè)，2種有效成分標(biāo)樣和樣品的純度因子均>999.0，符合要求，結(jié)果(圖5、圖6)。

圖5 唑蟲(chóng)酰胺標(biāo)樣(左)和試樣(右)峰純度光譜圖

圖6 氰氟蟲(chóng)腙標(biāo)樣(左)和試樣(右)峰純度光譜圖

3.7 方法各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果判定 按照NY/T 2887-2016《農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量分析方法確認(rèn)指南》[5]要求，判定上述所得線性關(guān)系、精密度、準(zhǔn)確度是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求。對(duì)于30%唑蟲(chóng)酰胺·氰氟蟲(chóng)腙懸浮劑產(chǎn)品，線性系數(shù)要求均>0.99；根據(jù)Horwitz方程(2(1-0.5logC)×0.67，此處，氰氟蟲(chóng)腙C=0.20，唑蟲(chóng)酰胺C=0.10)分別計(jì)算得到，氰氟蟲(chóng)腙和唑蟲(chóng)酰胺分析方法精密度要求變異系數(shù)分別<1.71%和1.90%；添加回收率要求在98%～102%之間才合乎要求。與上述3.3、3.4、3.5結(jié)果值相比較可知，該方法線性相關(guān)系數(shù)、精密度和準(zhǔn)確度數(shù)值均符合要求。感興趣組分峰純度指數(shù)均>999.0，滿足方法特異性要求，也不存在其他非分析物的干擾。

4 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，本方法的準(zhǔn)確度、精密度較高，特異性和一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好，具有操作簡(jiǎn)便、快速、結(jié)果準(zhǔn)確，分離效果好等特點(diǎn)，是一種比較實(shí)用的方法。