劉明麗，周靜江

河北省承德市中心血站，河北承德 067000

艾滋病是由人類免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的一種傳染病，HIV主要通過性接觸、輸血等途徑傳播，可導致全身免疫系統(tǒng)破壞，降低機體免疫能力，誘發(fā)感染，也可累及消化、泌尿、呼吸及神經(jīng)系統(tǒng)，早期診斷、及時治療是防治艾滋病的重要手段[1-2]。近年來HIV檢測技術(shù)不斷發(fā)展，其準確性也不斷提升。當前臨床常用的HIV檢測試劑主要包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、蛋白印記雜交、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應等[3-4]。ELISA是用于HIV初篩最經(jīng)濟、方便的方法，在臨床應用非常廣泛，但臨床數(shù)據(jù)顯示，不同技術(shù)產(chǎn)次、不同廠家的試劑盒檢驗效果存在一定差異，尋找最有效的抗體檢驗試劑盒對于臨床診治工作的開展非常關(guān)鍵。本研究以常用的3種HIV檢測試劑盒作為研究材料，對河北省承德市中心血站收集的血液標本進行HIV試劑盒檢測，分析3種試劑盒的檢驗效能及其檢測時間差異?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年3月至2020年7月送至河北省承德市中心血站的12 856份血液標本作為研究對象，所有血液標本的分離、保存均按照實驗室規(guī)范進行操作。本研究經(jīng)河北省承德市中心血站倫理委員會批準通過。

1.2儀器與試劑 瑞士全自動加樣儀HAMILTON STAR-8CH，瑞士全自動酶免分析儀HAMILTON FAME24/30。A試劑盒為HIV抗原抗體診斷試劑盒(國藥準字S20080008)、B試劑盒為HIV抗體診斷試劑盒(國藥準字S20030026)、C試劑盒為HIV抗體診斷試劑盒(國藥準字S20020011)；BBI公司陽轉(zhuǎn)血清盤4套，每套有4～8份血清系列標本；精密度血清盤，共高、中、低3個HIV抗體滴度；核酸擴增技術(shù)(NAT)檢測試劑(上?？迫A生物工程有限公司生產(chǎn))。所有試劑盒均在有效期內(nèi)進行檢測。

1.3方法

1.3.1ELISA檢測 所用血液標本均使用2種試劑盒進行2次檢測，每批設空白對照孔、陰性對照孔、陽性對照孔、室內(nèi)質(zhì)控孔，檢驗結(jié)果若存在不同或有反應性的檢測標本進行雙孔復試，檢測有反應性的標本采用NAT對輸血相關(guān)傳染病標志物檢測確認。

1.3.2NAT檢測 ELISA檢測陰性標本采用8份份混檢，檢測有反應性的混檢標本拆分單檢。

1.4陽性判斷標準 ELISA試劑盒樣品A值(S)/CO≥1，視為HIV抗原抗體有反應性；S/CO<1，判為HIV抗原抗體無反應性；NAT測定值CT≥50或無數(shù)值，且標志物測定值CT<50視為陰性，標志物測定值CT<40視為陽性，單檢反應性即判為陽性。若標志物測定值CT為40～50，進行復試并以復試結(jié)果為準。

1.5觀察指標 BBI陽轉(zhuǎn)血清盤結(jié)果分析：比較各試劑在血清盤內(nèi)檢出首份陽性標本的采集時間與核酸檢測首份陽性時間的差值。精密度檢驗：采用精密度血清盤評價試劑板內(nèi)精密度，評價指標為變異系數(shù)，變異系數(shù)為數(shù)據(jù)標準差與均數(shù)的比值。質(zhì)量控制：本研究所有操作及結(jié)果判定均按照試劑盒說明書進行，實驗人員進行美國病理家協(xié)會能力驗證血清盤檢測，均滿足實驗需求。誤診率即非HIV患者中被診斷為陽性的概率；漏診率即HIV患者中被診斷為陰性的概率。

2 結(jié) 果

2.1不同ELISA HIV檢測試劑盒對陽轉(zhuǎn)血清盤檢驗結(jié)果分析 B試劑盒、C試劑盒檢測HIV的陽轉(zhuǎn)血清盤，檢測相比于核酸檢測的平均檢測天數(shù)相當，分別為(16.25±3.04)、(16.75±3.32)d，A試劑盒對于HIV檢出時間相比于核酸檢測天數(shù)最短，為(13.50±3.58)d。見表1。

表1 不同HIV試劑盒的檢測天數(shù)比較(d)

2.2不同ELISA HIV檢測試劑盒對研究份群檢測結(jié)果分析 12 856份血液標本中共初篩陽性32份，檢出率為0.25%，A試劑盒、B試劑盒、C試劑盒初篩總份數(shù)分別為7 256份、9 152份、9 304份，有反應性份數(shù)分別為18份、22份、24份；3種試劑盒的檢測誤診率及漏診率比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2、3。

表2 3種試劑盒檢測陽性結(jié)果比較

表3 3種試劑盒的檢測誤診率及漏診率比較(%)

2.3板內(nèi)精密度檢驗 與不同抗體滴度質(zhì)控品進行參比，3種試劑盒平行檢測結(jié)果見表4。A試劑盒變異系數(shù)S/CO為(6.55±1.88)，CV(%)為(5.18±0.40)%；B試劑盒變異系數(shù)S/CO為(4.94±1.60)，CV(%)為(7.28±1.66)%；C試劑盒變異系數(shù)S/CO為(6.03±1.39)，CV(%)為(6.33±0.50)%。

表4 各試劑盒變異系數(shù)比較

3 討 論

ELISA原理是將待測抗原、抗體固定在固相載體表面，用酶標抗原或抗體與固定抗體或抗原進行特異性反應，加入酶底物進行顯色，再用分光光度計進行顯色情況的觀察，是一種半定量檢測技術(shù)[5]。ELISA是當前應用最為廣泛的HIV初篩方法，具有操作簡單、檢測時間短、成本低等優(yōu)點，對實驗人員的技術(shù)要求較低，適用于基層實驗室檢測，對于ELISA有反應性的標本再進行重組免疫印跡、核酸檢測進行驗證[6-7]。

當前HIV檢測時間長是HIV早期診斷的難題，陽轉(zhuǎn)血清盤是評價HIV早期檢測有效率的重要工具，本研究對商業(yè)血清陽轉(zhuǎn)盤進行檢測發(fā)現(xiàn)，A試劑盒檢測平均檢測天數(shù)短于C試劑盒、B試劑盒。分析3種試劑盒的特點，B、C試劑盒均由HIV1/HIV2型抗原包被的微孔板及酶標抗體組成。有研究證實，第四代抗原HIV檢測試劑盒固相包被P24抗原可將檢測窗口期提前至2周[8-9]；既往開展的針對獻血者的臨床研究也顯示，血清學檢驗中應用HIV第四代試劑盒可縮短HIV感染檢測的窗口期[10]。

盡管ELISA試劑盒為初篩工具，但其準確度及靈敏度仍關(guān)系到HIV患者的有效診治。本研究以血清標本作為對象分析3種試劑盒的診斷效能，結(jié)果顯示，3種試劑盒仍存在一定誤診。目前對于第三代及第四代試劑盒對HIV感染檢測效果的評估已有一定報道，沈蕊等[11]開展的一項研究證實，第三代及第四代抗原HIV檢測試劑盒均具有較高的靈敏度及特異度，兩者能較為準確地進行HIV初篩；本研究3種檢測試劑盒診斷效能無差異，提示3種檢測試劑盒均可進行較好的評估[12]；陳明軍等[13]近期針對無償獻血份群血液標本的研究結(jié)果顯示，第三代及第四代HIV檢測試劑盒均有較好的檢測性能，第四代HIV檢測檢出率較高，但存在較高的假陽性率；黃秋芳等[14]也證實四代抗原抗體試劑較三代更為靈敏，但特異度較差。分析其原因可能為第四代試劑盒將兩種檢測放在一個實驗內(nèi)進行檢測，比單純進行抗原或抗體檢測增加了非特異性風險，影響了檢測準確性。另外，不同公司對抗原、抗體兩種成分結(jié)合可能存在一定差異，這些均可能造成檢測結(jié)果的差異。

本研究的創(chuàng)新點在于使用當前血站系統(tǒng)常用的3種試劑盒(2種是檢測抗體，1種是檢測抗原)，對檢測HIV的診斷效果進行了比較，3種試劑盒診斷效能相當，對在實際工作中早期診斷HIV具有一定價值。當前臨床實際應用中多選用2種試劑盒進行檢測，對于有反應性的標本再進行驗證檢驗，結(jié)合本研究，在臨床中將三代及四代檢測試劑聯(lián)合進行檢測可能為HIV檢測的最佳組合，既能保證較好的檢測效能，也能縮短窗口期[15-16]。

開展本研究時受科研條件所限，分析指標較少，研究內(nèi)容不夠深入，目前無法補充數(shù)據(jù)并增加分析指標，這是本研究的不足之處，在今后的研究中一定增加分析指標，更深入地開展相關(guān)研究。