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        消化性潰瘍Hp感染患者血清GAS、IL-33、miR-26a水平變化及與臨床病理特征的關(guān)系

        2022-07-29 10:36:50璽,糜
        臨床誤診誤治 2022年6期
        關(guān)鍵詞:水平研究

        王 璽,糜 玲

        消化性潰瘍?yōu)槿蛐远喟l(fā)病和常見病,歐美消化性潰瘍發(fā)病率為6%~15%,國內(nèi)發(fā)病率為10%~12%,巨大的疾病負(fù)擔(dān)已成為全球公共衛(wèi)生問題[1-2]。該病主要與幽門螺桿菌(Hp)感染有關(guān),目前臨床診斷主要依靠Hp抗體檢測、細(xì)菌培養(yǎng)等,但對病情變化、輕重?zé)o從判斷,尋找安全準(zhǔn)確、操作簡便的生化標(biāo)志物輔助診斷已成為國內(nèi)外研究熱點(diǎn)[3-4]。有研究指出,胃黏膜損傷可致胃泌素(GAS)分泌異常,故GAS表達(dá)變化差異,可能對Hp感染診斷具有指導(dǎo)意義[5]。楊儉等[6]研究顯示,miR-26a在胃癌患者中表達(dá)異常,但miR-26a在消化性潰瘍Hp感染患者中的表達(dá)及意義研究較少。白細(xì)胞介素-33(IL-33)在慢性炎癥性疾病及多種免疫性疾病中發(fā)揮重要生物學(xué)作用,IL-33與消化性潰瘍Hp感染患者之間關(guān)系鮮有報道[7]。鑒于此,本研究探討消化性潰瘍Hp感染患者血清GAS、IL-33、miR-26a水平變化及與臨床病理特征的關(guān)系,報告如下。

        1 資料與方法

        1.1一般資料 選取2018年10月—2020年10月我院收治的214例消化性潰瘍作為研究對象,Hp感染情況:陽性136例、陰性78例。①納入標(biāo)準(zhǔn):符合消化性潰瘍診斷標(biāo)準(zhǔn)[8],經(jīng)消化內(nèi)鏡檢查確診;無認(rèn)知功能障礙;患者均自愿簽署知情同意書。②排除標(biāo)準(zhǔn):合并其他類型胃部疾病者;妊娠或哺乳期女性;伴胃泌素瘤、胃食管反流者;合并免疫系統(tǒng)疾病者;伴十二指腸潰瘍出血、幽門梗阻、胃穿孔者;接受Hp根除治療者;伴心、肝、腎等器質(zhì)性病變者;有消化內(nèi)鏡檢查禁忌證者;合并其他感染性疾病者;無法配合本研究者。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。

        1.2方法

        1.2.1資料收集:收集消化性潰瘍患者性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)、吸煙(每日≥3支,持續(xù)1年及以上)、飲酒(1年內(nèi)平均每周≥1次)、家族胃腸道疾病史、暴飲暴食、辛辣飲食、既往病史、進(jìn)食習(xí)慣、潰瘍部位、潰瘍面直徑等臨床資料。

        1.2.2標(biāo)本采集及處理:研究對象均于入院時,使用2支K2 EDTA抗凝管分別采集靜脈血4 ml,以半徑8 cm,3000 r/min離心15 min,其中一管在超凈工作臺將離心后上清吸取至無菌、不含RNA酶的EP管內(nèi),用于miR-26a測定;另一管取血清用于GAS、IL-33測定,均置于-80 ℃冰箱保存。

        1.2.3GAS、IL-33檢測方法:采用放射免疫分析法檢測血清GAS水平,試劑盒購自上海西唐生物科技有限公司;采用ELISA法測定IL-33水平,試劑盒購自上海哈靈生物科技有限公司;檢測由同一位經(jīng)驗(yàn)豐富的檢驗(yàn)醫(yī)師按照說明書完成。

        1.2.4miR-26a測定方法:采用Trizol試劑提取血清中總RNA,然后置于冰上,使用紫外分光光度計測定RNA濃度與質(zhì)量,取1 μg RNA,將其反轉(zhuǎn)錄cDNA,保存于-20 ℃冰箱內(nèi),采用qRT-PCR對miR-26a進(jìn)行相對定量分析,采用TransStart Top Green qPCR SuperMi試劑盒進(jìn)行qRT-PCR擴(kuò)增,PCR反應(yīng)體系參照說明書,上下游引物各0.4 μl,模板0.5 μl,STBR Premix Ex Taq Mix 10 μl,總體系為20 μl,反應(yīng)程序:95 ℃、3 min,95 ℃、30 s,60 ℃、30 s,40個循環(huán);利用Bio-Rad CFX Manager軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,根據(jù)溶解曲線判斷qRT-PCR產(chǎn)物特異性,采用2-ΔΔCt方法進(jìn)行相對定量分析。

        1.2.5Hp感染檢測及分型標(biāo)準(zhǔn):所有研究對象均于治療前,采用快速尿素酶試驗(yàn)及W-S銀染色法進(jìn)行Hp感染檢測,二者均為陽性即Hp感染陽性,反之為陰性。取Hp感染陽性患者血清標(biāo)本,于恒溫箱內(nèi)復(fù)溫至37 ℃,采用蛋白免疫印跡法對血清Hp抗體(UreA、UreB、CagA、VacA)進(jìn)行定性檢測。Hp感染Ⅰ型是產(chǎn)細(xì)胞毒素菌株,即CagA(+)和(或)VacA(+),Ure(+);Hp感染Ⅱ型僅產(chǎn)生Ure而不產(chǎn)生毒素。

        1.3觀察指標(biāo) ①比較Hp感染陽性或陰性患者GAS、IL-33、miR-26a水平。②分析影響消化性潰瘍患者Hp感染的相關(guān)因素。③分析GAS、IL-33、miR-26a水平與Hp感染患者臨床病理特征的關(guān)系。④比較不同分型Hp感染患者GAS、IL-33、miR-26a水平。⑤分析GAS、IL-33、miR-26a對Hp感染分型的鑒別診斷價值。

        2 結(jié)果

        2.1臨床資料比較 消化性潰瘍Hp感染陽性與陰性患者的臨床資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

        表1 消化性潰瘍Hp感染陽性、陰性患者臨床資料比較(例)

        2.2GAS、IL-33、miR-26a水平比較 消化性潰瘍Hp感染陽性患者GAS、IL-33、miR-26a水平均高于陰性患者(P<0.01)。見表2。

        表2 消化性潰瘍Hp感染陽性、陰性患者GAS、IL-33、miR-26a水平比較

        2.3消化性潰瘍患者Hp感染影響因素 將上述比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義的因素納入多因素Logistic回歸分析,變量賦值:GAS、IL-33、miR-26a以平均值為界,≤平均值=0、>平均值=1。結(jié)果顯示,GAS、IL-33、miR-26a均為消化性潰瘍患者Hp感染的影響因素(P<0.01)。見表3。

        表3 影響消化性潰瘍患者Hp感染的多因素Logistic回歸分析

        2.4GAS、IL-33、miR-26a水平與臨床病理特征的關(guān)系 GAS、IL-33、miR-26a水平與消化性潰瘍Hp感染患者潰瘍面直徑有相關(guān)性(r=0.569、0.571、0.594,P均<0.01),而與潰瘍部位無相關(guān)性(r=0.114、0.137、0.152,P=0.125、0.109、0.133)。

        2.5不同分型Hp感染患者GAS、IL-33、miR-26a水平 Ⅰ型Hp感染患者GAS、IL-33、miR-26a水平高于Ⅱ型患者(P<0.01)。見表4。

        表4 不同分型消化性潰瘍Hp感染患者GAS、IL-33、miR-26a水平

        2.6GAS、IL-33、miR-26a對Hp感染分型的鑒別診斷價值 GAS、IL-33、miR-26a聯(lián)合診斷Hp感染分型的曲線下面積(AUC)最大,為0.832,敏感度為73.75%,特異度為82.14%。見表5,圖1。

        表5 GAS、IL-33、miR-26a對消化性潰瘍Hp感染分型的鑒別診斷價值

        圖1 GAS、IL-33、miR-26a鑒別診斷消化性潰瘍Hp感染分型的ROC曲線GAS為胃泌素,IL-33為白細(xì)胞介素-33,Hp為幽門螺桿菌,ROC為受試者工作特征

        3 討論

        國內(nèi)外研究指出,消化性潰瘍患者病灶部位病原菌抵抗能力較弱,更易發(fā)生Hp感染,且Hp感染者產(chǎn)生的毒素可引發(fā)宿主免疫反應(yīng)介導(dǎo)的胃黏膜損傷,進(jìn)一步加重病情[9-10]。故早期明確消化性潰瘍患者Hp感染發(fā)生情況,對臨床合理制定治療方案,及時控制病情尤為重要[11]。

        有研究指出,胃腸激素可能參與消化性潰瘍患者Hp感染發(fā)生、發(fā)展過程,其中GAS在胃腸道運(yùn)動、胃腸分泌功能及消化道黏膜細(xì)胞增殖中具有較強(qiáng)作用[12-13]。本研究結(jié)果顯示,Hp感染陽性患者GAS水平較陰性患者高,與辛銘等[14]研究結(jié)果一致。這可能與Hp感染引起消化道黏膜受損有關(guān),導(dǎo)致GAS釋放入血,同時因損傷應(yīng)激反應(yīng)引起GAS的營養(yǎng)作用,增加胃黏膜血流,以促進(jìn)受損的胃黏膜組織增生、修復(fù)。進(jìn)一步探究表明,GAS水平與消化性潰瘍Hp感染患者潰瘍面直徑有相關(guān)性,且Ⅰ型Hp感染患者GAS水平較Ⅱ型患者高,進(jìn)而較為全面且細(xì)致明確Hp感染對GAS的不良影響,Ⅰ型Hp感染細(xì)胞毒性及侵襲性較強(qiáng),引起胃黏膜細(xì)胞損傷嚴(yán)重,由此導(dǎo)致應(yīng)激性修復(fù)作用提升,故GAS表達(dá)水平進(jìn)一步升高[15]。后續(xù)ROC曲線分析表明,當(dāng)GAS>119.40 pg/ml時,應(yīng)警惕Ⅰ型Hp感染發(fā)生,并根據(jù)病情及時給予相關(guān)防治措施,以改善疾病預(yù)后。

        已有研究證實(shí),IL-33在自身免疫性疾病、心血管疾病、感染等多種疾病發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[16-17]。但目前關(guān)于IL-33在消化性潰瘍Hp感染患者中表達(dá)情況的研究鮮見,本研究發(fā)現(xiàn),Hp感染陽性患者IL-33水平較陰性患者高,且與Hp感染患者潰瘍面直徑有相關(guān)性,免疫炎癥反應(yīng)為Hp感染黏膜損傷的重要病理生理機(jī)制,Hp感染可誘導(dǎo)宿主細(xì)胞及體液免疫應(yīng)答激活,引起局部及全身炎癥反應(yīng),故IL-33水平呈高表達(dá)。機(jī)體感染Hp后,可迅速發(fā)生免疫反應(yīng),在多種細(xì)胞及生物因子作用下,致使?jié)冞M(jìn)一步加重。國內(nèi)外研究證實(shí),CagA可激活核因子-κB和MAPK信號傳導(dǎo)途徑,進(jìn)而促進(jìn)IL-32合成、分泌[18-19]。本研究中,Ⅰ型Hp感染患者IL-33水平較Ⅱ型高,可能與Ⅰ型Hp感染患者CagA(+)有關(guān),但也可能存在其他途徑引起的IL-33活化,還需進(jìn)一步研究證實(shí)。ROC曲線分析顯示,IL-33鑒別診斷Hp感染分型的AUC為0.760,提示監(jiān)測消化性潰瘍患者IL-33水平可為臨床診療提供重要參考信息。

        張峰等[20]研究發(fā)現(xiàn),Hp感染相關(guān)胃疾病患者miR-26a表達(dá)異常,通過調(diào)節(jié)miR-26a表達(dá)可影響相關(guān)胃炎及胃癌進(jìn)展,提示miR-26a與Hp感染相關(guān)胃疾病有關(guān),本研究觀點(diǎn)與上述結(jié)果存在相似之處,microRNA是靶向信使RNA非翻譯區(qū)的非編碼短RNA,Hp感染后引起相關(guān)炎癥及黏膜損傷,可誘導(dǎo)胃部miR-26a表達(dá)增加。本研究僅以消化性潰瘍Hp感染患者為研究對象,從基因水平檢測miR-26a表達(dá),發(fā)現(xiàn)Ⅰ型Hp感染患者miR-26a水平較Ⅱ型患者高,分析原因可能為,Ⅰ型Hp感染更易引起胃黏膜組織炎癥反應(yīng),誘導(dǎo)宿主細(xì)胞及體液免疫應(yīng)答激活,miR-26a通過調(diào)節(jié)氧化酶-2表達(dá)影響胃黏膜上皮細(xì)胞增殖,抑制疾病進(jìn)展,但具體作用機(jī)制仍需進(jìn)一步探究。本研究通過ROC曲線分析發(fā)現(xiàn),miR-26a鑒別診斷Hp感染分型AUC為0.747,具有較高應(yīng)用價值。

        消化性潰瘍Hp感染患者發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,需多個指標(biāo)進(jìn)行綜合診斷及病情評估。本研究發(fā)現(xiàn),GAS、IL-33、miR-26a聯(lián)合鑒別診斷Hp感染分型的AUC高達(dá)0.832,可在一定程度上提高診斷效能,為臨床提供更全面的疾病診療信息。此外,對于吸煙、飲酒、家族胃腸道疾病史、暴飲暴食、辛辣飲食、有既往史、共餐、潰瘍面直徑>2 cm者,Hp感染發(fā)生風(fēng)險較高,應(yīng)作為重點(diǎn)觀察對象,并制定相應(yīng)預(yù)防措施,以控制疾病發(fā)生發(fā)展。

        綜上,GAS、IL-33、miR-26a與消化性潰瘍患者Hp感染存在一定相關(guān)性,三者聯(lián)合鑒別診斷Hp感染分型的敏感度、特異度較高,可輔助評估Hp感染的發(fā)生及病情嚴(yán)重程度。

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