秦炳偉，王瑞明，呂志遠(yuǎn)，張夢(mèng)夢(mèng)，劉玉濤，李 強(qiáng)，邱振清

（1.齊魯工業(yè)大學(xué)，山東濟(jì)南 250300；2.濟(jì)南趵突泉釀酒有限責(zé)任公司，山東濟(jì)南 250115）

芝麻香型白酒是建國(guó)后自主創(chuàng)新的兩大香型白酒之一，是濃清醬工藝巧妙結(jié)合的產(chǎn)物，是白酒香型中技術(shù)難度大、科技含量高的一個(gè)香型。白酒中含硫化合物具有易揮發(fā)、閾值低的特點(diǎn)，是芝麻香型白酒重要的風(fēng)味組成部分。芝麻香型白酒中的3-甲硫基丙醇和3-甲硫基丙酸乙酯具有抗氧化活性，是對(duì)人體健康有益的功能因子之一。目前，國(guó)外對(duì)葡萄酒中含硫化合物的研究最常采用頂空固相微萃取與氣相色譜-脈沖式火焰光度檢測(cè)器相結(jié)合的方法，國(guó)內(nèi)對(duì)白酒含硫化合物的研究最常采用液液萃取、頂空固相微萃取進(jìn)行前處理，再利用質(zhì)譜（MS）技術(shù)進(jìn)行定性檢測(cè)白酒中含硫化合物，操作復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)且大部分方法只能定性不能定量。本研究采用GC-MS 直接進(jìn)樣法，定性和定量芝麻香型白酒中8 種含硫化合物，為白酒中含硫化合物的研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

酒樣：54%vol芝麻香型白酒。

試劑及耗材：無(wú)水乙醇（色譜純）；內(nèi)標(biāo)物，異丙基二硫醚；硫化物標(biāo)品，3-甲硫基丙醛、二甲基三硫、甲硫基乙酸乙酯、3-甲硫基丙醇、3-甲硫基丙酸乙酯、二糠基二硫醚、甲基糠基二硫醚、糠硫醇（內(nèi)標(biāo)物與標(biāo)準(zhǔn)品，純度均為99.9 %，購(gòu)自百靈威科技有限公司）。

儀器設(shè)備：氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（7890 A-5975 C），安捷倫科技有限公司；電子天平（精確到0.1 g）、分析天平（型號(hào)FA 2004，精確到0.0001 g），天津天馬衡基儀器有限公司；XK96-A 快速混勻器。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)準(zhǔn)備

內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取0.01 g（精確至0.0001 g）異丙基二硫醚，用60 %乙醇水溶液稀釋并定容至100 mL，濃度為100 mg/L。

內(nèi)標(biāo)使用液：準(zhǔn)確吸取10 mL 內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用60%乙醇水溶液稀釋并定容100 mL，濃度為10 mg/L。

含硫化合物混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別稱取標(biāo)準(zhǔn)品二甲基三硫、3-甲硫基丙醇、糠硫醇0.24 g（精確至0.0001 g），3-甲硫基丙醛、甲硫基乙酸乙酯、3-甲硫基丙酸乙酯0.12 g（精確至0.0001 g）和二糠基二硫醚、甲基糠基二硫醚0.06 g，用60 %乙醇水溶液溶解后定容至100 mL，使標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液二甲基三硫、3-甲硫基丙醇、糠硫醇的濃度為2.4 g/L，3-甲硫基丙醛、甲硫基乙酸乙酯、3-甲硫基丙酸乙酯的濃度為1.2 g/L，二糠基二硫醚、甲基糠基二硫醚的濃度為0.6 g/L。

含硫化合物混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確吸取含硫化合物混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液100 μL，用60 %乙醇水溶液定容至100 mL,使二甲基三硫、3-甲硫基丙醇、糠硫醇的濃度為2.4 mg/L，3-甲硫基丙醛、甲硫基乙酸乙酯、3-甲硫基丙酸乙酯的濃度為1.2 mg/L，二糠基二硫醚、甲基糠基二硫醚的濃度為0.6 mg/L。

含硫化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線：分別吸取1 mL、5 mL、10 mL、20 mL、45 mL 含硫化合物混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，加入1 mL 內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用60%乙醇水溶液定容至100 mL，使二甲基三硫、3-甲硫基丙醇、糠硫醇的濃度為24 μg/L、120 μg/L、240 μg/L、480 μg/L、1080 μg/L，3-甲硫基丙醛、甲硫基乙酸乙酯、3-甲硫基丙酸乙酯的濃度為12 μg/L、60 μg/L、120 μg/L、240μg/L、540μg/L，二糠基二硫醚、甲基糠基二硫醚的濃度為6 μg/L、30 μg/L、60 μg/L、120 μg/L、270 μg/L。

1.2.2 GC條件

色譜柱為HP-5 MS（5 %-苯基）-甲基聚硅氧烷毛細(xì)管柱氣相色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度為250 ℃；載氣為氦氣，流速1 mL/min。

表1 GC升溫程序

分流進(jìn)樣，分流比10∶1，分流流量10 mL/min，進(jìn)樣量1 μL。

1.2.3 MS條件

電子轟擊離子源（EI）；電子能量70 eV；傳輸線溫度280 ℃；離子源溫度230 ℃。

1.2.4 檢測(cè)步驟

準(zhǔn)確吸取0.9 mL 芝麻香型白酒酒樣，加入100 μL 內(nèi)標(biāo)使用液，放入樣品瓶中，供氣相-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)。

1.2.5 方法可行性

方法檢出限：3倍信噪比S/N為方法檢出限。

方法回收率：吸取25 mL 內(nèi)標(biāo)使用液，用芝麻香型白酒酒樣定容至250 mL，分別吸取10 mL 定容后液體，添加不同濃度的含硫化合物標(biāo)準(zhǔn)品，其中二甲基三硫、3-甲硫基丙醇、糠硫醇的添加水平均為240 μg/L、480 μg/L、1080 μg/L，3-甲硫基丙醛、甲硫基乙酸乙酯、3-甲硫基丙酸乙酯的添加水平均為120 μg/L、240 μg/L、540 μg/L，二糠基二硫醚、甲基糠基二硫醚的添加水平均為6 μg/L、30 μg/L、60 μg/L。

方法精密度：回收率實(shí)驗(yàn)中，每個(gè)添加水平分別做6 個(gè)平行，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

2 結(jié)果與分析

2.1 定性分析

利用NIST 08 對(duì)樣品圖譜進(jìn)行檢索含硫化合物，得出每個(gè)含硫化合物的保留時(shí)間與定性離子，利用濃度為1080 μg/L二甲基三硫、3-甲硫基丙醇、糠硫醇，濃度為540 μg/L 3-甲硫基丙醛、甲硫基乙酸乙酯、3-甲硫基丙酸乙酯和濃度為270 μg/L二糠基二硫醚、甲基糠基二硫醚的標(biāo)準(zhǔn)品，驗(yàn)證保留時(shí)間和定性離子，最后確定芝麻香型白酒中8 種含硫化合物，保留時(shí)間和定性離子見(jiàn)表2。

表2 8種吡嗪類化合物監(jiān)測(cè)離子參數(shù)

2.2 方法學(xué)分析

標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測(cè)分析，系列標(biāo)準(zhǔn)溶液中各組分含量（μg/L）與內(nèi)標(biāo)含量（μg/L）的比值為x 橫坐標(biāo)，含硫化合物各組分與其內(nèi)標(biāo)的峰面積的比值為Y縱坐標(biāo)，得到8種含硫化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性方程、線性范圍和相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表3。

由表3和表4可得，8種含硫化合物線性相關(guān)系數(shù)均大于0.999，方法檢出限在2～6 μg/L 之間，加標(biāo)回收率為84 %～113 %，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.87%～5.58%，說(shuō)明該方法適用于芝麻香型白酒中硫化物的檢測(cè)。

表3 8種含硫化合物線性方程、線性范圍和相關(guān)系數(shù)

表4 方法檢出限、回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

2.3 樣品檢測(cè)分析驗(yàn)證

在市場(chǎng)上采購(gòu)54 %vol 芝麻香白酒、52 %vol濃香型白酒、53 %vol 醬香型白酒、53 %清香型白酒，每種香型各6 種，均來(lái)自不同廠家進(jìn)行樣品檢測(cè)分析，數(shù)據(jù)平均結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 不同香型白酒含硫化合物含量平均值(μg/L)

3 小結(jié)

本研究方法檢測(cè)的四大香型白酒中含硫化合物種類數(shù)對(duì)比，芝麻香型白酒＞醬香型白酒＞濃香型白酒和清香型白酒；總含量對(duì)比，芝麻香型白酒＞醬香型白酒＞濃香型白酒＞清香型白酒。芝麻香型含硫化合物平均總含量達(dá)2903 μg/L，符合相關(guān)研究對(duì)白酒中揮發(fā)性含硫化合物及其風(fēng)味貢獻(xiàn)度研究結(jié)果：芝麻香型白酒中含硫化合物的種類和含量最為豐富，其次為醬香型白酒，濃香型和清香型白酒中含硫化合物種類含量較低。