趙麗霞，任成波，翟明慧，鮑 昕，劉 博，趙峻峰

(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院，河北 張家口 075000)

肺癌起源于支氣管黏膜及腺體[1]，早期表現(xiàn)不明顯，臨床診斷多以中晚期為主，生存率較低[2]。有學(xué)者認(rèn)為，腫瘤發(fā)展的生理過(guò)程與其外周血管的生成有著極大的聯(lián)系，抑制腫瘤血管的生長(zhǎng)有利于控制腫瘤的生理活動(dòng)，以延緩患者疾病發(fā)展[3]。血管生長(zhǎng)因子C(vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C)在新生淋巴管的形成中具有重要推動(dòng)作用，而淋巴轉(zhuǎn)移是腫瘤患者惡化的標(biāo)志之一[4]。腫瘤轉(zhuǎn)移的生理過(guò)程有多種基因參與，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1(tumor metastasis-associated gene 1，MTA1)與腫瘤的發(fā)展有關(guān)[5]，但與肺癌關(guān)系尚不明確。本研究檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌(non-small cell carcinoma, NSCLC)患者癌組織/癌旁組織VEGF-C、MTA1表達(dá)水平，分析與NSCLC患者腫瘤分期及預(yù)后的關(guān)系，為臨床診治提供新方向。

1 資料與方法

1.1 一般資料2017年8月至2020年11月我院108例NSCLC患者癌組織及癌旁組織標(biāo)本，納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床已確診為NSCLC；我院病理科留存標(biāo)本。排除標(biāo)準(zhǔn)：病理及臨床資料不全者；存在多種腫瘤者；患有全身感染性或免疫性障礙者。男81例，女27例，年齡(65.97±7.86)歲。

1.2 方法

1.2.1資料收集 通過(guò)查閱病歷整理患者臨床資料，包括性別、年齡、病理類(lèi)型、腫瘤分期、分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及生存隨訪資料等。

1.2.2病理組織處理 手術(shù)中采集的癌組織樣本及距離癌組織2 cm的癌旁組織，依次經(jīng)過(guò)石蠟包埋、組織切片(5 μm)，常規(guī)脫蠟處理(二甲苯溶液，5 min)后在常溫下脫苯和水化，蘇木素染色2 min，采用1%鹽酸酒精浸泡(1 min)，清洗后使用伊紅染色處理(3～5 min)，清洗后再次脫水，待染色成功后行蓋玻片封層固定，光鏡下觀察。

1.2.3VEGF-C與MTA1表達(dá)水平檢測(cè) VEGF-C與MTA1多克隆抗體均購(gòu)自艾美捷科技有限公司。取制備的石蠟切片經(jīng)抗原修復(fù)后滴入一抗，4 ℃條件過(guò)夜培育，清洗后慢滴二抗，37 ℃條件培育30 min，二次復(fù)染脫水后行蓋玻片封層固定，在光鏡下觀察。陰性對(duì)照一抗試劑采用磷酸鹽緩沖液。

1.3 結(jié)果判定VEGF-C、MTA1表達(dá)參照Axiotis病理評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[6]，以染色強(qiáng)度和對(duì)應(yīng)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行評(píng)估。染色強(qiáng)度(無(wú)染色～黃褐色)計(jì)為0～3分。陽(yáng)性率=陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)/視野總細(xì)胞數(shù)×100%，0分為無(wú)表達(dá)；1分為<25%；2分為25%～50%；3分為>50%。評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)為染色強(qiáng)度評(píng)分與陽(yáng)性率評(píng)分的乘積，0分為陰性，反之均為陽(yáng)性。最終結(jié)果由我院2名資深檢驗(yàn)技師同時(shí)進(jìn)行判讀，在有歧義時(shí)邀請(qǐng)另一名資深技師參與結(jié)果的判斷。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 21.0軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析；預(yù)后生存分析采用Kaplan-Meier分析法，行Log-rankχ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 VEGF-C與MTA1陽(yáng)性表達(dá)情況比較NSCLC患者癌組織中VEGF-C及MTA1陽(yáng)性表達(dá)率均高于癌旁組織(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 VEGF-C與MTA1陽(yáng)性表達(dá)情況 [n(%)]

2.2 不同臨床特征NSCLC患者癌組織中VEGF-C與MTA1陽(yáng)性表達(dá)情況比較MTA1與VEGF-C在腫瘤III～I(xiàn)V期、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中陽(yáng)性表達(dá)率較高(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同臨床特征NSCLC癌組織中VEGF-C與MTA1蛋白陽(yáng)性表達(dá)情況 [n(%)]

2.3 NSCLC患者癌組織中VEGF-C與MTA1表達(dá)相關(guān)性癌組織VEGF-C表達(dá)量為(1.14±0.13)，MTA1表達(dá)量為(0.67±0.12)，二者呈正相關(guān)(r=0.472，P<0.05)。

2.4 不同VEGF-C與MTA1表達(dá)水平患者生存分析108例NSCLC患者按VEGF-C及MTA1表達(dá)情況分為陽(yáng)性組和陰性組。VEGF-C陽(yáng)性組1年總生存率為46.88%，低于陰性組的68.18%(HR=1.895，95%CI：1.049～3.423，P<0.05)，無(wú)進(jìn)展生存率為35.94%，低于陰性組的56.82%(HR=1.834，95%CI：1.076～3.127，P<0.05)；MTA1陽(yáng)性組1年總生存率為48.21%，低于陰性組的62.00%(HR=1.830，95%CI：1.013～3.307，P<0.05)，無(wú)進(jìn)展生存率為32.14%，低于陰性組的52.00%(HR=1.971，95%CI：1.161～3.346，P<0.05)。見(jiàn)圖1～4。

圖1 VEGF-C表達(dá)相關(guān)生存曲線 圖2 MTA1表達(dá)相關(guān)生存曲線

圖3 VEGF-C表達(dá)相關(guān)無(wú)進(jìn)展生存曲線 圖4 MTA1表達(dá)相關(guān)無(wú)進(jìn)展生存曲線

3 討論

肺癌早期無(wú)明顯特征，因而臨床診療多見(jiàn)中晚期，早期確診率較低，而肺癌與其他腫瘤治療原則一致，早期干預(yù)是改善其預(yù)后的最佳手段。中晚期患者因其身體機(jī)能的影響不能適應(yīng)根治手術(shù)，多以維持性放化療為主，預(yù)后較差。腫瘤發(fā)展與其細(xì)胞轉(zhuǎn)移、侵襲有關(guān)[7]。如何控制腫瘤的轉(zhuǎn)移和侵襲，以改善患者預(yù)后是臨床?？紤]的重點(diǎn)課題。臨床常以患者的腫瘤分期進(jìn)行治療，但傳統(tǒng)的組織學(xué)病理檢測(cè)在預(yù)測(cè)患者的發(fā)展和惡化中仍存在缺陷。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，在腫瘤的發(fā)展生理過(guò)程中發(fā)現(xiàn)了一些具有標(biāo)志性的蛋白因子，如癌胚抗原、纖維蛋白原等，對(duì)癌組織的檢測(cè)具有較高的敏感性，對(duì)預(yù)判腫瘤的惡性發(fā)展具有一定的價(jià)值，但其特異性較低，仍有誤診現(xiàn)象出現(xiàn)[8]。因而尋找其他具有高敏感度及特異度的標(biāo)志物對(duì)NSCLC患者臨床診療具有重要意義。

VEGF在腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和發(fā)展中具有重要的地位，VEGF-C是其家族一員，被稱(chēng)為淋巴管生長(zhǎng)因子，有推動(dòng)癌組織新生淋巴管的形成、促進(jìn)癌細(xì)胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的作用[9]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(VEGFR)-2和VEGFR-3與VEGF-C同屬一個(gè)家族，有著促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增生和遷移的作用，VEGF-C以細(xì)胞旁腺分泌的方式形成生成可激活VEGFR-2、VEGFR-3，為淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)提供能量支持，新生淋巴管可為腫瘤生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)，增強(qiáng)其生物性質(zhì)，促進(jìn)及其惡性發(fā)展，既往研究顯示[10，11]，VEGF-C在腫瘤細(xì)胞中均勻分布，在多種腫瘤組織中呈高陽(yáng)性表達(dá)，參與癌細(xì)胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。本研究顯示，VEGF-C在NSCLC腫瘤組織中呈陽(yáng)性表達(dá)，說(shuō)明VEGF-C可能參與NSCLC惡性發(fā)展。

MTA1是腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因位點(diǎn)，在腫瘤細(xì)胞中呈陽(yáng)性表達(dá)[12]。MTA1是Mi-2-核小體重構(gòu)脫乙酰復(fù)合物的重要組成部分，既往研究顯示[13]，MTA1對(duì)微小RNA-125a-3p(miR-125)具有調(diào)控作用。而miR-125a-3p與NSCLS的發(fā)展有著密切關(guān)系，在NSCLS中表達(dá)水平下調(diào)[14]，MTA1可能對(duì)miR-125表達(dá)有調(diào)控作用，對(duì)腫瘤細(xì)胞的生理過(guò)程產(chǎn)生影響。本研究顯示，MTA1在NSCLC癌組織中均具有陽(yáng)性表達(dá)，提示MTA1可能在NSCLS癌組織中具有特異性表達(dá)，其水平變化可用于NSCLC的診斷。

對(duì)其不同病理特征進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)MTA1與VEGF-C在腫瘤III～I(xiàn)V分期、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中陽(yáng)性表達(dá)率較高，與顧磊等[15，16]研究部分相似，可能與腫瘤進(jìn)展有關(guān)。研究顯示，VEGF-C與MTA1陽(yáng)性表達(dá)水平呈正相關(guān)，提示VEGF-C與MTA1在腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的生理過(guò)程中可能存在協(xié)同關(guān)系，MTA1可能對(duì)腫瘤細(xì)胞血管及淋巴結(jié)的形成有影響，劉建平等[17]研究提出MTA1可能通過(guò)黏附缺氧誘導(dǎo)因子影響VEGF-C分泌，但影響VEGF-C分泌的機(jī)制過(guò)于復(fù)雜，后期仍需行動(dòng)物試驗(yàn)或體外細(xì)胞試驗(yàn)進(jìn)一步探討。研究顯示，存在VEGF-C與MTA1陽(yáng)性組NSCLC患者的預(yù)后較差，可能與腫瘤惡性發(fā)展有關(guān)，VEGF-C與MTA1對(duì)腫瘤的發(fā)展可能具有推動(dòng)作用，楊昕等[18]研究指出，MTA1對(duì)NSCLC患者預(yù)后有不良影響。李璟波等[19]研究中也提到VEGF-C與肺癌患者的預(yù)后存在密切聯(lián)系。結(jié)合本研究結(jié)論，提示臨床可能可通過(guò)抑制VEGF-C與MTA1來(lái)延緩NSCLC患者的惡性發(fā)展，以改善患者預(yù)后，延長(zhǎng)其生命周期。

綜上所述，VEGF-C與MTA1在NSCLC癌組織中呈陽(yáng)性表達(dá)，兩者在腫瘤血管和淋巴結(jié)生成中可能存在協(xié)同作用，共同促進(jìn)著腫瘤細(xì)胞的惡性發(fā)展，其陽(yáng)性水平表達(dá)與患者預(yù)后有關(guān)。