李聰穎 甘嘉禾 王美君 曹倍赫 黃瑛 何曦 華梓煜 孫銘浩 李仕明

1首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京同仁醫(yī)院 北京同仁眼科中心 北京市眼科學(xué)與視覺科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100730；2首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院眼科，北京 100029

近年來，近視已成為重要的公共衛(wèi)生問題，其患病率呈“流行性”增長，尤其是在亞洲一些地區(qū)，青少年近視患病率甚至高達(dá)90%以上。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，光照不足和/或戶外活動(dòng)減少會(huì)增加近視風(fēng)險(xiǎn)，增加戶外活動(dòng)時(shí)間能夠延緩兒童近視發(fā)生，可能與戶外環(huán)境的高強(qiáng)度光照有關(guān)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)亦證實(shí)，增加光照強(qiáng)度能夠延緩樹鼩及豚鼠形覺剝奪性近視(form deprivation myopia，F(xiàn)DM)的進(jìn)展，并減輕雛雞和恒河猴FDM程度。然而，低強(qiáng)度光照對近視發(fā)生和發(fā)展影響的研究較少，研究結(jié)果也存在爭議。有研究發(fā)現(xiàn)，50 lx的低強(qiáng)度光照條件下飼養(yǎng)的雛雞會(huì)發(fā)展成近視，(15±8)lx的低強(qiáng)度光照可導(dǎo)致恒河猴屈光度發(fā)生遠(yuǎn)視性漂移,不同研究結(jié)果提示光照強(qiáng)度與近視發(fā)生和發(fā)展之間的關(guān)系較為復(fù)雜，并不是單一的線性關(guān)系，值得進(jìn)一步研究。本研究擬觀察低強(qiáng)度光照、正常強(qiáng)度光照和高強(qiáng)度光照對豚鼠正常屈光發(fā)育和FDM的影響，為近視防控相關(guān)研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1

.

1

.

1

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 選取健康無眼疾3周齡雄性三色豚鼠108只(購于北京芳元緣養(yǎng)殖場)，體質(zhì)量150.5～211.5 g，平均181.0 g。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用和喂養(yǎng)遵循中國科學(xué)技術(shù)委員會(huì)頒布的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》，本研究方案經(jīng)首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京同仁醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)(批文號(hào)：TRLAWEC2022-S109)。

1

.

1

.

2

主要試劑及儀器 復(fù)方托吡卡胺滴眼液、質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.4%鹽酸奧布卡因滴眼液(日本參天制藥株式會(huì)社)。Quantel Medical Axis Nano眼科A型超聲診斷儀(1.03，法國Quantel Medical公司)；艾沃斯V3照度計(jì)、光照箱(上海錦玟儀器設(shè)備有限公司)；點(diǎn)狀光檢影鏡及鏡片箱(丹陽市華輝光學(xué)儀器有限公司)。

1.2 方法

1

.

2

.

1

豚鼠分組及不同強(qiáng)度光照處理 將豚鼠分為正常屈光發(fā)育豚鼠群54只和FDM豚鼠群54只，采用隨機(jī)數(shù)表法分別分為低強(qiáng)度光照組、正常強(qiáng)度光照組和高強(qiáng)度光照組，每組18只，均在北京邁德康納生物技術(shù)有限公司飼養(yǎng)于20 cm×35 cm×60 cm光照箱，飼養(yǎng)溫度為20 ℃，濕度為60%。光照箱分為3層，每層天花板上安裝LED燈管，燈管位于飼養(yǎng)籠上方10 cm處，從上到下各層光照強(qiáng)度分別為20、300和5 000 lx，光照節(jié)律均為12 h光照(7：00-19：00)/12 h黑暗。

1

.

2

.

2

豚鼠FDM模型的制作 采用文獻(xiàn)[15]中的經(jīng)典FDM造模方法，選用10寸白色不透明氣球套住豚鼠頭部，剪去部分氣球以暴露右眼、鼻唇部及耳部，保持左眼遮蓋。隨著豚鼠周齡增加及時(shí)更換合適的氣球尺寸，防止過緊造成皮膚損傷或者過松導(dǎo)致眼罩滑脫及旋轉(zhuǎn)(圖1)。每天檢查眼罩2次，若發(fā)現(xiàn)脫落及時(shí)重新佩戴，以確保眼罩遮蓋左眼。

圖1 豚鼠單眼FDM模型Figure 1 Guinea pig model of monocular FDM

1

.

2

.

3

眼生物學(xué)參數(shù)的測量 采用測量醫(yī)師單盲法，分別于光照前及光照后2、4和6周摘除豚鼠眼罩進(jìn)行眼生物學(xué)參數(shù)測量。正常屈光發(fā)育豚鼠測量結(jié)果為雙眼平均值；FDM豚鼠測量結(jié)果為FDM眼測量值。(1)眼軸長度(axial length，AL)測量 采用眼科A型超聲診斷儀測量豚鼠AL，頻率設(shè)置為11 mHz，設(shè)置超聲在前房、晶狀體和玻璃體的聲速分別為1 557.5、1 723.3和1 540 m/s。測量前采用0.4%鹽酸奧布卡因滴眼液點(diǎn)眼行角膜表面麻醉，測量時(shí)探頭對準(zhǔn)角膜中心，并垂直于角膜平面，AL定義為角膜頂點(diǎn)到視網(wǎng)膜黃斑區(qū)的距離。每眼重復(fù)測量7～9次，去除最大值和最小值后取平均值。(2)眼屈光度測量 驗(yàn)光由2位熟練的專業(yè)驗(yàn)光師和助手完成。采用復(fù)方托吡卡胺滴眼液點(diǎn)眼行睫狀肌麻痹，每5 min點(diǎn)眼1次，共2次，在瞳孔充分?jǐn)U大的情況下于昏暗環(huán)境(<5 lx)中進(jìn)行檢影驗(yàn)光。檢查者的視線與豚鼠視線平行，檢影鏡光源發(fā)出的光經(jīng)過反光鏡照射在豚鼠視網(wǎng)膜上，通過視網(wǎng)膜光點(diǎn)反射在瞳孔區(qū)的映光動(dòng)向判斷屈光狀態(tài)。根據(jù)等效球鏡原則計(jì)算屈光度，屈光度=球鏡度+1/2柱鏡度。AL和屈光度變化量為各測量時(shí)間點(diǎn)與光照前的差值。

表1 正常屈光發(fā)育豚鼠不同強(qiáng)度光照組不同光照時(shí)間AL比較(x±s,mm)Table 1 Comparison of AL of normal refractive development guinea pigs after different lighting duration among three groups (x±s,mm)組別眼數(shù)不同光照時(shí)間AL光照前光照2周光照4周光照6周正常強(qiáng)度光照組367.97±0.218.21±0.06a8.36±0.11ab8.57±0.08abc低強(qiáng)度光照組367.90±0.168.24±0.14a8.42±0.10ab8.61±0.14abc高強(qiáng)度光照組367.95±0.148.22±0.09a8.35±0.10ab8.53±0.10abc 注:F組別=0.365,P=0.697;F時(shí)間=353.750,P<0.001.與各自組內(nèi)光照前比較,aP<0.001;與各自組內(nèi)光照2周比較,bP<0.001;與各自組內(nèi)光照4周比較,cP<0.001(重復(fù)測量兩因素方差分析,Bonferroni檢驗(yàn)) AL:眼軸長度 Note:Fgroup=0.365,P=0.697;Ftime=353.750,P<0.001.Compared with respective baseline,aP<0.001;compared with respective 2-week lighting,bP<0.001;compared with respective 4-week lighting,cP<0.001 (Repeated measures two-way ANOVA,Bonferroni test) AL:axial length

表2 正常屈光發(fā)育豚鼠不同強(qiáng)度光照組不同光照時(shí)間屈光度比較(x±s,D)Table 2 Comparison of diopter of normal refractive development guinea pigs after different lighting duration among three groups (x±s,D)組別眼數(shù)不同光照時(shí)間屈光度光照前光照2周光照4周光照6周正常強(qiáng)度光照組36+1.62±1.46+2.00±1.56+1.13±2.21+0.85±2.24低強(qiáng)度光照組36+1.70±1.24+1.27±2.21+0.41±3.07+0.27±2.66高強(qiáng)度光照組36+1.92±1.36+2.08±1.53+2.75±2.15a+2.03±2.45 注:F組別=3.576,P=0.034;F時(shí)間=2.739,P=0.058.與各自時(shí)間低強(qiáng)度光照組比較,aP<0.01(重復(fù)測量兩因素方差分析,Bonferroni檢驗(yàn)) Note:Fgroup=3.576,P=0.034;Ftime=2.739,P=0.058.Compared with respective low intensity-lighting group,aP<0.01(Repeated measures two-way ANOVA,Bonferroni test)

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料經(jīng)Shapiro-Wilk檢驗(yàn)并結(jié)合直方圖及QQ圖證實(shí)服從或接近正態(tài)分布，以表示，低強(qiáng)度光照組、正常強(qiáng)度光照組和高強(qiáng)度光照組在光照不同時(shí)間豚鼠AL和屈光度及其變化量總體比較均采用重復(fù)測量兩因素方差分析，若球形檢驗(yàn)結(jié)果

P

<0.05，以“Greenhouse-Geisser”矯正結(jié)果為準(zhǔn)，

P

<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多重比較采用Bonferroni法，并依據(jù)比較次數(shù)校正檢驗(yàn)水準(zhǔn)，α'=α/κ。

2 結(jié)果

2.1 正常屈光發(fā)育豚鼠不同強(qiáng)度光照組不同光照時(shí)間AL和屈光度比較

正常屈光發(fā)育豚鼠不同強(qiáng)度光照組AL值組間總體比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

F

=0.365，

P

=0.697)，光照不同時(shí)間各組豚鼠AL值總體比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

F

=353.750，

P

<0.001)(表1)。不同強(qiáng)度光照組豚鼠屈光度總體比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

F

=3.576，

P

=0.034)，其中高強(qiáng)度光照組光照4周豚鼠屈光度值明顯大于低強(qiáng)度光照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

P

<0.01)(表2)。

2.2 FDM豚鼠不同強(qiáng)度光照組不同光照時(shí)間AL和屈光度比較

低強(qiáng)度光照組、正常強(qiáng)度光照組和高強(qiáng)度光照組光照不同時(shí)間FDM豚鼠AL值和屈光度值總體比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

F

=408.302、27.407，均

P

<0.001)。低強(qiáng)度光照組光照2周FDM眼屈光度值大于光照前屈光度，產(chǎn)生短暫性遠(yuǎn)視漂移，但差異尚無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

P

>0.05)(表3,4)。

表3 FDM豚鼠不同強(qiáng)度光照組不同光照時(shí)間AL比較(x±s,mm)Table 3 Comparison of AL of FDM guinea pigs after different lighting duration among three groups (x±s,mm)組別眼數(shù)不同光照時(shí)間AL光照前光照2周光照4周光照6周正常強(qiáng)度光照組187.91±0.178.17±0.15a8.45±0.16b8.70±0.16c低強(qiáng)度光照組187.92±0.218.21±0.16a8.41±0.16b8.58±0.14c高強(qiáng)度光照組187.91±0.198.25±0.17a8.43±0.16b8.60±0.19c 注:F組別=0.105,P=0.900;F時(shí)間=408.302,P<0.001.與各自光照前比較,aP<0.001;與各自組內(nèi)光照2周比較,bP<0.001;與各自組內(nèi)光照4周比較,cP<0.001(重復(fù)測量兩因素方差分析,Bonferroni檢驗(yàn)) FDM:形覺剝奪性近視;AL:眼軸長度 Note:Fgroup=0.105,P=0.900;Ftime=408.302,P<0.001.Compared with respective pre-lighting,aP<0.001;compared with respective 2-week lighting,bP<0.001;compared with respective 4-week lighting,cP<0.001 (Repeated measures two-way ANOVA,Bonfer-roni test) FDM:form deprivation myopia;AL:axial length

表4 FDM豚鼠不同強(qiáng)度光照組不同光照時(shí)間屈光度比較(x±s,D)Table 4 Comparison of diopter of FDM guinea pigs after different lighting duration among three groups(x±s,D)組別眼數(shù)不同光照時(shí)間屈光度光照前光照2周光照4周光照6周正常強(qiáng)度光照組18+1.80±0.82+0.24±2.64-0.40±2.22a-2.83±2.35bc低強(qiáng)度光照組18+1.90±0.97+2.35±1.95+0.02±2.37-1.91±3.91b高強(qiáng)度光照組18+1.55±1.39+0.26±2.22-0.25±3.01a-2.41±4.29b 注:F組別=0.973,P=0.387;F時(shí)間=27.407,P<0.001.與各自光照前比較,aP<0.001;與各自光照2周比較,bP<0.001;與各自光照4周比較,cP<0.001(重復(fù)測量兩因素方差分析,Bonferroni檢驗(yàn)) FDM:形覺剝奪性近視 Note:Fgroup=0.973,P=0.387;Ftime=27.407,P<0.001.Compared with respective pre-lighting,aP<0.001;compared with respective 2-week lighting,bP<0.001;compared with respective 4-week lighting,cP<0.001 (Repeated measures two-way ANOVA,Bonferroni test) FDM:form deprivation myopia

2.3 各組豚鼠AL和屈光度變化趨勢

正常屈光度發(fā)育豚鼠光照不同時(shí)間豚鼠AL變化量總體比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

F

=215.765，

P

<0.001)，其中高強(qiáng)度光照組AL最短且變化量最小，光照4周豚鼠屈光度變化量明顯小于低強(qiáng)度光照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

P

<0.05)，低強(qiáng)度光照組豚鼠AL最長且變化量最大；正常屈光度發(fā)育豚鼠高強(qiáng)度光照組呈相對遠(yuǎn)視狀態(tài)，低強(qiáng)度光照組呈相對近視狀態(tài)。從光照4周開始，F(xiàn)DM豚鼠低強(qiáng)度光照組和高強(qiáng)度光照組AL變化量與正常強(qiáng)度光照組相比均有減小趨勢，且各時(shí)間點(diǎn)豚鼠屈光度近視漂移程度均小于正常強(qiáng)度光照組，F(xiàn)DM眼低強(qiáng)度光照組光照2周屈光度變化量明顯小于正常強(qiáng)度光照組，產(chǎn)生短暫性遠(yuǎn)視漂移(圖2)。

圖2 不同光照時(shí)間各組豚鼠AL及屈光度變化量趨勢 A：正常屈光發(fā)育豚鼠AL變化量趨勢 B：正常屈光發(fā)育豚鼠屈光度變化量趨勢 C：FDM豚鼠AL變化量趨勢 D：FDM豚鼠屈光度變化量趨勢 與低強(qiáng)度光照組比較，aP<0.05 AL：眼軸長度Figure 2 Change trend of AL and diopter in various groups A:Change trend of AL in the normal refractive development guinea pigs B:Change trend of diopter in the normal refractive development guinea pigs C:Change trend of AL in FDM guinea pigs D:Change trend of diopter in FDM guinea pigs Compared with the low intensity-lighting group,aP<0.05 AL:axial length

3 討論

本研究探討不同強(qiáng)度光照對豚鼠屈光發(fā)育和FDM眼的影響，發(fā)現(xiàn)高強(qiáng)度光照組正常屈光發(fā)育豚鼠屈光度呈相對遠(yuǎn)視狀態(tài)，AL最短且變化量最小，低強(qiáng)度光照組豚鼠屈光度呈相對近視趨勢，AL最長且變化量最大，其中光照4周低強(qiáng)度光照組豚鼠屈光度小于高強(qiáng)度光照組，其變化量顯著大于高強(qiáng)度光照組，提示提高光照度能夠抑制屈光發(fā)育過程中的AL增長和屈光度向近視漂移，可作為預(yù)防近視的一種措施。本研究還發(fā)現(xiàn)，從光照4周開始，低強(qiáng)度光照組和高強(qiáng)度光照組FDM豚鼠AL變化量與正常強(qiáng)度光照組相比有減小趨勢。低強(qiáng)度光照組和高強(qiáng)度光照組光照不同時(shí)間豚鼠近視漂移程度均小于正常強(qiáng)度光照組，但低強(qiáng)度光照組光照2周屈光度遠(yuǎn)視漂移。這些研究結(jié)果提示，低強(qiáng)度光照并非必然促進(jìn)豚鼠FDM進(jìn)展，其原因和機(jī)制值得進(jìn)一步研究。

光暴露是影響眼球屈光發(fā)育的重要環(huán)境因素，光照可以轉(zhuǎn)換為影響眼球生長的生物信號(hào)。已有研究表明，在兒童眼屈光發(fā)育過程中，長期暴露在較低強(qiáng)度光照(200 lx)下會(huì)減少兒童遠(yuǎn)視儲(chǔ)備，增加近視風(fēng)險(xiǎn)，而戶外高強(qiáng)度光照可防止近視度數(shù)過快增長。Cohen等研究發(fā)現(xiàn)，50 lx低強(qiáng)度光照飼養(yǎng)90 d雛雞AL和玻璃體腔較長，呈絕對性近視狀態(tài)，但10 000 lx高強(qiáng)度光照呈遠(yuǎn)視狀態(tài)。近年來有研究發(fā)現(xiàn)，低強(qiáng)度光照不一定加速近視的發(fā)生和發(fā)展。因此，本研究設(shè)計(jì)3種不同強(qiáng)度光照進(jìn)行比較，進(jìn)一步探討低強(qiáng)度光照對近視發(fā)生和發(fā)展的影響。

本研究發(fā)現(xiàn)低強(qiáng)度光照有延緩FDM進(jìn)展的趨勢，與Ashby等及She等研究結(jié)果一致。Ashby等研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)DM雛雞以間歇性50 lx低強(qiáng)度光照6 h不會(huì)促進(jìn)近視進(jìn)展，表明短暫低強(qiáng)度光照可能不是禽類近視發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)因素。She等對發(fā)育早期的恒河猴進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)(15±8)lx低強(qiáng)度光照對FDM程度和AL均無明顯影響，而且可以阻止FDM的恢復(fù)，進(jìn)一步研究還發(fā)現(xiàn)(15±8)lx低強(qiáng)度光照也可降低恒河猴眼球?qū)ν哥R誘導(dǎo)的屈光度改變。上述2種情況均與脈絡(luò)膜未增厚有關(guān)，低強(qiáng)度光照會(huì)減弱眼球?qū)鈱W(xué)離焦信號(hào)的反應(yīng)，這表明在低強(qiáng)度光照下，由于光刺激減少，眼球?qū)ν饨缜飧深A(yù)作出適當(dāng)反應(yīng)的可能性減小。

不同動(dòng)物視網(wǎng)膜感光細(xì)胞的數(shù)量比例不同，這是導(dǎo)致對光線強(qiáng)弱敏感度不同的生理基礎(chǔ)。如鳥類視網(wǎng)膜中視錐細(xì)胞與視桿細(xì)胞比例為3∶ 2，視錐細(xì)胞數(shù)量占優(yōu)勢，而靈長類動(dòng)物視網(wǎng)膜中視錐細(xì)胞與視桿細(xì)胞比例為1∶ 20，視桿細(xì)胞數(shù)量占優(yōu)勢。Hn等研究發(fā)現(xiàn)，視桿細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白敲除

Gnat1

小鼠的正視化出現(xiàn)異常，且無法誘導(dǎo)出FDM。Landis等研究發(fā)現(xiàn)，不同光亮度對屈光度的影響不同，暴露于暗光(1.6×10cd/m)或明光(4.7×10cd/m)環(huán)境下時(shí)透鏡誘導(dǎo)小鼠發(fā)生的近視漂移程度明顯小于中間光(1.6×10cd/m)環(huán)境。也有研究采用僅有視桿細(xì)胞的小鼠進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)視桿細(xì)胞通路能夠在暗光下抑制近視，但在明亮光下則未出現(xiàn)該現(xiàn)象。本研究采用的豚鼠與恒河猴、小鼠均屬于哺乳動(dòng)物，低強(qiáng)度光照未促進(jìn)近視進(jìn)展還可能與視桿通路在屈光發(fā)育中的重要作用有關(guān)。

視桿細(xì)胞是感受弱光刺激的細(xì)胞，對光線的強(qiáng)弱反應(yīng)非常敏感。視桿細(xì)胞與視網(wǎng)膜AⅡ型無長突細(xì)胞形成突觸，這些無長突細(xì)胞與雙極細(xì)胞相連，激活雙極細(xì)胞后刺激多巴胺釋放。多巴胺是眼屈光發(fā)育的停止信號(hào)，對眼球生長有較強(qiáng)的抑制作用。AⅡ型無長突細(xì)胞在近似于黃昏光照度水平(300 lx)時(shí)電耦合程度最高，該條件下多巴胺將不能有效釋放，這可能是低強(qiáng)度光照與正常強(qiáng)度光照相比呈現(xiàn)相對遠(yuǎn)視的原因。最近有研究發(fā)現(xiàn)，視桿細(xì)胞在持續(xù)的強(qiáng)光條件下也是活躍的。這些研究均表明刺激視桿細(xì)胞和其介導(dǎo)的多巴胺釋放可能有助于低強(qiáng)度光照對近視發(fā)展的保護(hù)作用。

光照波長也會(huì)影響屈光發(fā)育，不同波長的單色光對不同動(dòng)物眼球的屈光發(fā)育可產(chǎn)生不同影響。在長波長光下，豚鼠和雛雞可發(fā)生近視，而恒河猴和樹鼩則發(fā)生遠(yuǎn)視。在短波長光下，雛雞和小鼠遠(yuǎn)視程度增加。不同波長光可能是通過影響視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的增生及其分泌的生長因子來影響屈光發(fā)育，如短波長藍(lán)光可延緩視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞生長及其細(xì)胞因子分泌，進(jìn)而延緩近視的發(fā)生和發(fā)展。此外，光照度大于250 lx的530 nm單色光可以抑制大鼠視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞生長，并下調(diào)細(xì)胞中近視相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)，進(jìn)而在近視的形成中發(fā)揮作用。以上研究表明，光線的不同特征對眼球屈光發(fā)育的影響較為復(fù)雜，光照強(qiáng)度與近視發(fā)生和發(fā)展并不是單純的線性關(guān)系。

本實(shí)驗(yàn)仍存在一定局限性，如給豚鼠佩戴眼罩可能會(huì)導(dǎo)致部分角膜感染與磨損，可能使角膜曲率發(fā)生改變。在今后的研究中，我們將用紅外驗(yàn)光儀進(jìn)行驗(yàn)光并測量角膜曲率，進(jìn)一步探討不同強(qiáng)度的光照對屈光發(fā)育和FDM的影響。此外，不同強(qiáng)度光照對屈光度和AL產(chǎn)生影響的分子機(jī)制也有待進(jìn)一步探討。

總之，本研究結(jié)果支持低強(qiáng)度光照并非必然會(huì)增加FDM的發(fā)生和發(fā)展。對于光線如何與視覺信號(hào)相互作用以影響近視進(jìn)展，目前尚未完全了解。外界低強(qiáng)度光照具體通過何種方式影響眼部發(fā)育，以及低強(qiáng)度光照是否可以作為近視防控的環(huán)境因素還有待進(jìn)一步研究。

利益沖突

所有作者均聲明不存在利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明

李聰穎：參與研究實(shí)施、分析/解釋數(shù)據(jù)、論文撰寫及修改；甘嘉禾：參與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、研究實(shí)施、修改論文；王美君：參與研究實(shí)施、數(shù)據(jù)采集；曹倍赫、黃瑛：參與研究實(shí)施、生物測量及數(shù)據(jù)采集；何曦、華梓煜、孫銘浩：參與研究實(shí)施；李仕明：參與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)、數(shù)據(jù)分析、對論文智力性內(nèi)容的修改及最終定稿