張 希，東方梓涵，李 江，戚琬若，劉 旭，胡昌江，余曉玲*

(1.昆明市中醫(yī)醫(yī)院，云南 昆明 650500；2.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 中藥材學(xué)院，吉林 長春 130118；3.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 611137)

中藥臨床運(yùn)用遵循七情配伍原則，其中除了少數(shù)單用能發(fā)揮治療作用外，其余大多數(shù)均需聯(lián)合配伍發(fā)揮藥效，這體現(xiàn)了中藥配伍的協(xié)同增效機(jī)制，體現(xiàn)了中醫(yī)藥的整體性特點(diǎn)。傳統(tǒng)中藥炮制理論一直指導(dǎo)中藥的工業(yè)生產(chǎn)和臨床運(yùn)用，同時(shí)現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)對(duì)傳統(tǒng)中藥炮制的研究已成為研究的核心和關(guān)鍵問題。研究發(fā)現(xiàn)，許多單味中藥經(jīng)炮制過后可“增效減毒”“緩和藥性”，但中藥配伍講究整體協(xié)同增效，因此炮制后的中藥在配伍運(yùn)用中是否發(fā)揮同樣的療效值得探討。

近年來，成都中醫(yī)藥大學(xué)胡昌江教授致力于復(fù)方中藥炮制研究，同時(shí)進(jìn)行了“方-證”結(jié)合對(duì)中藥炮制研究的可行性探索研究，已取得一系列進(jìn)展，這為中藥炮制研究提供了新思路。

1 “方-證”結(jié)合

《傷寒論》中提出方證對(duì)應(yīng)理論，其曰：“有是證用是方”，該理論是中醫(yī)學(xué)研究常用的方法之一，強(qiáng)調(diào)方為證立、方隨證轉(zhuǎn)、方證對(duì)應(yīng)的原則。又古人云：“炮制不明，藥性不確，則湯方無準(zhǔn)，而病證不驗(yàn)也”，表明中藥炮制理論同樣基于“方-證”理論，臨床不能僅僅根據(jù)患者之證，機(jī)械性地使用某一方劑，當(dāng)根據(jù)患者病證之變化，在辨證論治基礎(chǔ)上針對(duì)不同證候譴方用藥，對(duì)中藥進(jìn)行炮制以增效減毒，避免“工于分離解析，疏于還原整合”的研究模式，充分體現(xiàn)其中醫(yī)臨證的精準(zhǔn)性[1]。

賈天柱等[2]提出“炮制組學(xué)”的假設(shè)，認(rèn)為任何單一化合物的改變都不能全面展現(xiàn)中藥炮制前后功效和藥性的變化，只有多種成分的比例、組成變化的綜合結(jié)果才能更好地解析炮制機(jī)理以及藥材炮制后功能變化對(duì)中藥多成分、多靶點(diǎn)整體協(xié)同作用的特點(diǎn)，從整體上全面表征中藥發(fā)揮藥效的作用特點(diǎn)。

圖1 中藥炮制復(fù)方配伍研究思路

1.1 基于復(fù)方功效拆方研究

在臨床使用炮制品入藥時(shí)，往往采用藥物炮制后的藥性入藥，但是許多藥物炮制前后的藥性和藥效變化巨大，如萊菔子“生升熟降”，所以選擇單味炮制藥配伍時(shí)需根據(jù)藥物在復(fù)方中發(fā)揮的藥效與炮制前后的藥材進(jìn)行對(duì)比。

在確定復(fù)方中的藥物是否需要炮制時(shí)，需對(duì)其中的單味藥作炮制篩選，包括前期炮制方法和藥理藥效篩選；篩選的基礎(chǔ)需要根據(jù)“方-證”的具體臨床療效選擇合適的模型。對(duì)于模型的選擇，有兩種參考，第一，以藥物在復(fù)方中發(fā)揮的藥效為基礎(chǔ)進(jìn)行選擇與造模，如李文兵等[3-4]根據(jù)益智仁在縮泉丸中溫補(bǔ)脾腎、澀精縮尿的功能，分別以水負(fù)荷多尿和腎陽虛多尿大鼠為模型，研究縮泉丸中益智仁鹽炙對(duì)模型大鼠縮尿及補(bǔ)腎作用的影響。張希等[5]根據(jù)五子衍宗丸中覆盆子溫腎固精縮尿的作用，以腺嘌呤復(fù)制腎陽虛多尿大鼠模型，研究五子衍宗丸中覆盆子鹽炙后的腎臟改善研究。第二，以復(fù)方證候?yàn)槟Ｐ瓦M(jìn)行選擇，采用“證候-藥效-模型-相關(guān)藥理學(xué)指標(biāo)-闡明炮制機(jī)理”的研究模式。如補(bǔ)骨脂基于補(bǔ)骨脂丸治療脾腎陽虛型泄瀉，李凱等[6]將補(bǔ)骨脂與小茴香的炮制品相互組合(鹽補(bǔ)骨脂+生小茴香、生補(bǔ)骨脂+鹽小茴香、生補(bǔ)骨脂+生小茴香)，驗(yàn)證鹽炙組成復(fù)方的合理性，同時(shí)探討對(duì)脾腎陽虛泄瀉模型大鼠干預(yù)作用的最佳炮制品組合，結(jié)果發(fā)現(xiàn)五靈脂、蒲黃相須合用，為臨床治療氣血瘀滯證的失笑散；周習(xí)[7]利用血瘀證模型大鼠研究蒲黃制炭前后與五靈脂組成復(fù)方失笑散的藥效差異。這類方法主要基于復(fù)方病證研究，以炮制品組成復(fù)方的藥效差異來驗(yàn)證炮制的合理性。

1.2 將單味藥納入復(fù)方、生熟飲片互換，進(jìn)行配伍作用研究

目前主要通過HPLC、UPLC、LC-MS、GC-MS等解析技術(shù)對(duì)藥物化學(xué)成分進(jìn)行比較，以及通過藥效學(xué)比較增效與否來研究中藥飲片炮制前后差異，缺少基于相關(guān)病證的復(fù)方配伍研究。中藥炮制的主要目的是發(fā)揮復(fù)方藥效作用，因此需將單味藥納入復(fù)方，生熟飲片互換，進(jìn)行配伍作用研究，以此驗(yàn)證復(fù)方中采用炮制品的科學(xué)性。如吳珊珊[8]將益智仁鹽炙前后分別組成縮泉丸，通過觀察對(duì)水負(fù)荷多尿大鼠首次排尿時(shí)間和排泄率的影響，判斷縮泉丸中益智仁鹽炙的科學(xué)性及其縮尿機(jī)制。張希等[9]以單味篩選出的生、鹽覆盆子和生、鹽五味子分別組成五子衍宗丸進(jìn)行生品和炮制品藥效比較，證實(shí)五子衍宗丸中藥物鹽制能提高腎精虧虛證大鼠的生精作用。魏江存[10]以大承氣湯的臨床功效泄下為基礎(chǔ)，將大黃不同炮制品配伍后的大承氣湯進(jìn)行比較研究。肖宏斌等[11]利用大黃生片、熟片和炭片之間化學(xué)成分的組成及量比關(guān)系的差異進(jìn)行三黃瀉心湯成分配伍研究，基于飲片炮制的成分配伍，從抗炎、活血化瘀及清熱等藥效學(xué)的角度，為三黃瀉心湯的合理、有效應(yīng)用提供理論依據(jù)。事實(shí)證明，“方-證”相結(jié)合，炮制品配伍組方進(jìn)行研究更切合臨床用藥實(shí)際，符合中醫(yī)整體觀念思想。

2 復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)研究

有效物質(zhì)基礎(chǔ)是中藥復(fù)方發(fā)揮藥效的基本保證，其物質(zhì)基礎(chǔ)的明確與解析也是闡述炮制配伍合理性和科學(xué)性的有效途徑。對(duì)炮制品入復(fù)方后物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行研究更能明確其作用機(jī)制，其物質(zhì)基礎(chǔ)的闡明也為炮制機(jī)理的證實(shí)奠定基礎(chǔ)。

2.1 基于譜-效關(guān)系的物質(zhì)基礎(chǔ)研究

中藥譜-效研究是根據(jù)中藥化學(xué)性質(zhì)利用溶劑分離等方式最大程度表征中藥成分信息，建立有效化學(xué)成分/群的特征峰的指紋圖譜，結(jié)合體內(nèi)外藥效檢測(cè)指標(biāo)，采用灰關(guān)聯(lián)度、偏最小二乘回歸、雙變量相關(guān)及多元回歸分析等數(shù)據(jù)處理技術(shù)將“譜”與“效”聯(lián)系起來，得到發(fā)揮有效藥效的活性成分或物質(zhì)基礎(chǔ)群，主要包括體外譜-效關(guān)系和血清譜-效關(guān)系[12]。如李夢(mèng)琪等[13-14]將益智仁鹽炙后組成縮泉丸，采用溶劑分離富集分析得到各個(gè)部位指紋圖譜，灰關(guān)聯(lián)度分析對(duì)縮尿藥效的貢獻(xiàn)大小，又通過有效部位-石油醚部位的指紋圖譜，從物質(zhì)基礎(chǔ)上揭示益智仁鹽炙后增強(qiáng)縮泉丸縮尿藥效的機(jī)理。中藥復(fù)方由多味飲片組合而成，發(fā)揮藥效的同時(shí)也不一定是全部成分對(duì)機(jī)體產(chǎn)生作用，譜效關(guān)系從側(cè)面體現(xiàn)了中藥對(duì)機(jī)體病證的靶向性，體現(xiàn)了中藥成分發(fā)揮藥效的主次之分，這也與中醫(yī)傳統(tǒng)理論的“君臣佐使”相符合。定位中藥的有效物質(zhì)基礎(chǔ)/成分群，將中藥復(fù)方的復(fù)雜成分細(xì)化，使化學(xué)成分與藥理藥效相關(guān)聯(lián)，提取的有效物質(zhì)有利于代謝組學(xué)的研究。

2.2 基于代謝組學(xué)的物質(zhì)基礎(chǔ)研究

中藥防治疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)在于有效成分，而有效成分大多為次生代謝產(chǎn)物，復(fù)雜的生成過程和生物合成機(jī)制，形成具有千變?nèi)f化的分子結(jié)構(gòu)的化合物[15]。另外藥物還可能與機(jī)體新陳代謝發(fā)生化學(xué)變化，產(chǎn)生生物活性。采用現(xiàn)代技術(shù)對(duì)復(fù)方炮制前后的物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行化學(xué)成分的分析只能表觀其變化，并不能深入闡明炮制發(fā)揮作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。另外，一些中藥僅經(jīng)過蒸、煮等加熱方式炮制，藥材化學(xué)成分基本一致，但在代謝過程中產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物可以作為藥效基團(tuán)發(fā)揮藥理作用。因此，需要利用代謝組學(xué)的整體性和動(dòng)態(tài)性，更加全面地揭示中藥復(fù)方炮制前后對(duì)藥物本身以及對(duì)機(jī)體代謝物的影響。王喜軍等[16]將中藥血清化學(xué)與代謝組學(xué)有機(jī)結(jié)合，利用中醫(yī)方證代謝組學(xué)分析確定證候生物標(biāo)記物，建立方劑藥效生物評(píng)價(jià)體系，揭示中藥復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。代謝組學(xué)分析的目標(biāo)是所有的樣本整體中所有的代謝物(如血清、尿液、糞便等)，這種整體性的思想和傳統(tǒng)中醫(yī)藥注重整體觀相似。陳志敏等[17]以血清差異代謝物為標(biāo)志物，采用GC-MS分析并鑒定得到42種共有內(nèi)源性代謝物，最終篩選得到10個(gè)化合物，從血清代謝組學(xué)證實(shí)補(bǔ)骨脂鹽炙組成二神丸的物質(zhì)基礎(chǔ)。李夢(mèng)琪等[18]提取縮泉丸的石油醚有效部位給大鼠灌胃后取血，利用HPLC聯(lián)合LC-MS對(duì)大鼠含藥血清和空白血清化學(xué)成分比較分析，確定縮泉丸石油醚部位在大鼠血中移行成分有7種，通過指認(rèn)峰判斷其可能是縮泉丸發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)。

2.3 基于藥物動(dòng)力學(xué)-藥物效應(yīng)動(dòng)力學(xué)(PK-PD)研究

PK-PD能夠比較炮制前后分別組成的復(fù)方中主要藥效成分在動(dòng)物體內(nèi)的“時(shí)間-血藥濃度-效應(yīng)”之間三維關(guān)系的不同，客觀反映有效物質(zhì)的體內(nèi)吸收程度和生物利用度，監(jiān)測(cè)藥效成分動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，更加準(zhǔn)確客觀地評(píng)價(jià)中藥炮制復(fù)方在體內(nèi)的吸收、代謝、分布和排泄的動(dòng)力學(xué)過程和產(chǎn)生藥理效應(yīng)的動(dòng)態(tài)變化，闡明其藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。目前以有效部位提取物、復(fù)方水提取物、醇提取物給藥，腹腔、皮下、靜脈及肌肉注射四種給藥形式，以及眼睛、尾部、動(dòng)脈采血等研究形式。但由于中藥復(fù)方傳統(tǒng)劑型大部分為水煎液，某些提取物/化合物入血較困難，有些甚至不能入血，導(dǎo)致檢測(cè)濃度過低，建立PK-PD模型時(shí)血藥濃度-時(shí)間很難擬合，這也是目前中藥復(fù)方炮制在此階段研究遇到的瓶頸之一。

2.4 基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的物質(zhì)基礎(chǔ)研究

中藥作用的整體性、成分的復(fù)雜性和作用機(jī)制的多途徑、多靶點(diǎn)導(dǎo)致中藥藥效組分處于“黑箱體系”狀態(tài)。隨著組學(xué)技術(shù)(如基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、腸道菌群組學(xué)、代謝組學(xué)等)的發(fā)展，系統(tǒng)生物學(xué)視角的引入及生物信息學(xué)的應(yīng)用，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)應(yīng)運(yùn)而生，并經(jīng)過不斷與中醫(yī)藥理論相融合，逐漸形成了“中藥網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)”[19-20]。采用組學(xué)技術(shù)和高通量檢測(cè)(蛋白質(zhì)表達(dá)譜及基因表達(dá)譜等)對(duì)復(fù)方進(jìn)行生物信息學(xué)分析，篩選得到相關(guān)藥物靶點(diǎn)，構(gòu)建“藥物-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)”，預(yù)測(cè)藥物的作用機(jī)制，另一種則是利用公共數(shù)據(jù)篩選藥物成分信息、藥效及藥理作用等預(yù)測(cè)藥物可能作用的靶點(diǎn)分子，進(jìn)一步構(gòu)建“藥物-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)”，再從分子網(wǎng)絡(luò)平衡角度解析藥物作用機(jī)制，從而預(yù)測(cè)藥物作用機(jī)制。中藥復(fù)方藥味多，成分復(fù)雜，可采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究方法對(duì)復(fù)方化學(xué)成分及作用靶點(diǎn)進(jìn)行篩選和預(yù)測(cè)。對(duì)于炮制的中藥復(fù)方，可以先通過組學(xué)技術(shù)預(yù)測(cè)其作用靶點(diǎn)，初步篩選出藥物作用靶點(diǎn)，然后通過構(gòu)建中藥炮制前后的有效組分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)來預(yù)測(cè)炮制藥物作用機(jī)制。但目前關(guān)于中藥復(fù)方炮制的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究較少，公共數(shù)據(jù)庫中炮制化學(xué)成分變化的信息不夠全面，因此傳統(tǒng)的用藥理論與現(xiàn)代技術(shù)是否能高度擬合闡明其作用機(jī)制還有待研究。

此外，還有基于線粒體為靶點(diǎn)進(jìn)行的中藥物質(zhì)基礎(chǔ)研究，如采用離心超濾(CU)技術(shù)與液質(zhì)(LC/MS)相結(jié)合，對(duì)以線粒體為靶點(diǎn)的中藥活性成分進(jìn)行篩選、分離與鑒定，對(duì)線粒體活細(xì)胞熒光標(biāo)記再對(duì)其熒光成像分析篩選中藥活性物質(zhì)，將篩選出的中藥有效成分組/群結(jié)合線粒體靶標(biāo)分析得到物質(zhì)基礎(chǔ)以及以線粒體能量代謝為靶標(biāo)研究中藥有效物質(zhì)基礎(chǔ)等[21]。目前這些方法正用于中藥及其復(fù)方的物質(zhì)基礎(chǔ)研究，但用于復(fù)方炮制品物質(zhì)基礎(chǔ)的闡明是否合理還有待實(shí)驗(yàn)研究。

3 復(fù)方炮制機(jī)制闡明

目前，有關(guān)中藥炮制機(jī)制的研究主要是通過化學(xué)成分改變和傳統(tǒng)藥效學(xué)改變的角度進(jìn)行闡述，能夠較為明確地闡明部分中藥飲片的炮制機(jī)制，使中藥炮制機(jī)制研究取得了較大的突破和發(fā)展。

吳珊珊[8]以縮泉丸補(bǔ)腎縮尿?yàn)榍腥朦c(diǎn)，以腎陽虛多尿大鼠為模型，從腎相關(guān)臟器指數(shù)及病理形態(tài)、腎功能、免疫功能探究益智仁鹽炙后組方的“補(bǔ)腎”作用，又從機(jī)體水液代謝方面佐證腎主水，可調(diào)節(jié)全身水液代謝的作用。從復(fù)方證治角度闡述中醫(yī)藥理論“鹽炙入腎-腎主水”的作用機(jī)理，也證實(shí)了藥物炮制入藥增強(qiáng)療效的合理性。張希等[9]以五子衍宗丸補(bǔ)腎益精、澀精止瀉等功效為基礎(chǔ)，根據(jù)單味藥炮制篩選結(jié)果組成復(fù)方，以腎精虧虛模型大鼠的精子密度和活率為藥效表征，探討五味子、覆盆子鹽制前后組成五子衍宗丸的“補(bǔ)腎”作用。廖宇嬌等[22]通過檢測(cè)腎精虧虛模型大鼠睪丸中B細(xì)胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)的表達(dá)水平探討不同炮制品組成五子衍宗丸的“生精”作用。楊卓等[23-24]以血清免疫球蛋白G(IgG)、白細(xì)胞介素Ⅱ(IL-2)、白細(xì)胞介素Ⅵ(IL-6)及T淋巴細(xì)胞亞群表征研究五子衍宗丸中藥物鹽制對(duì)以腎精虧虛模型大鼠免疫功能的調(diào)控效應(yīng)。通過其促進(jìn)T淋巴細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)平衡以及對(duì)TGF-β1/Smads信號(hào)通路的調(diào)控作用，從復(fù)方角度共同闡明“鹽炙入腎-腎主生殖”的炮制作用機(jī)理。陳志敏等[17]闡述的利用代謝組學(xué)技術(shù)結(jié)合相應(yīng)的復(fù)方和中醫(yī)證候模型，以血清和尿液差異代謝物為標(biāo)志物，利用代謝組學(xué)體現(xiàn)二神丸中補(bǔ)骨脂、肉豆蔻炮制增效的機(jī)理，結(jié)果與傳統(tǒng)中藥炮制理論“補(bǔ)骨脂鹽炙溫補(bǔ)脾腎、肉豆蔻煨制免于滑腸”相符合。

目前，有關(guān)復(fù)方探討藥物炮制機(jī)制的研究較少，而炮制機(jī)制的研究與深入炮制運(yùn)用于臨床的必要途徑。對(duì)于炮制前后中藥的變化以及對(duì)機(jī)體代謝途徑和網(wǎng)絡(luò)機(jī)制等方面的研究，不僅有利于臨床中藥炮制學(xué)的發(fā)展，更有利于中藥炮制理論科學(xué)內(nèi)涵的完善。

4 討論

隨著中醫(yī)藥理論的不斷發(fā)展，炮制品在臨床中的運(yùn)用也愈加頻繁。對(duì)于中藥生熟異用的研究也越來越多，但是由于中藥本身由多種成分組成，某些中藥通過繁雜的炮制工藝化學(xué)成分會(huì)發(fā)生巨大變化。中藥復(fù)方藥味太多，煎煮過程中各成分間相互反應(yīng)、碰撞、聚集，導(dǎo)致對(duì)于物質(zhì)基礎(chǔ)的把控及炮制機(jī)理的研究難度增大。此外，中藥炮制過程不僅是通過加工方式使化學(xué)成分變化或藥物本身與輔料相互加和的簡單加工，還有在機(jī)體吸收發(fā)揮藥效過程中內(nèi)源性代謝性產(chǎn)物及其次生代謝產(chǎn)物機(jī)制的參與。另外，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)需要對(duì)中藥數(shù)據(jù)庫進(jìn)行大量搜索，但目前中藥炮制品的化學(xué)成分在數(shù)據(jù)庫中還未被完全發(fā)掘，藥理藥效與化學(xué)成分的關(guān)聯(lián)性還不足以形成“成分-靶點(diǎn)-疾病”的網(wǎng)絡(luò)機(jī)制，因此對(duì)于炮制品更多集中于物質(zhì)基礎(chǔ)研究階段，這也是中藥炮制研究中的巨大難題。相關(guān)學(xué)者也認(rèn)為將復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)與炮制機(jī)理相結(jié)合，利用現(xiàn)代相關(guān)組學(xué)技術(shù)來闡明炮制機(jī)制，才能更好地在臨床合理使用炮制品，使中醫(yī)臨床治療效果最大化。