李 娜 李清平 陳曉藝▲ 黃小童 方 剛

1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)制藥廠，廣西南寧 530023；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)壯醫(yī)藥學(xué)院，廣西南寧 530001

產(chǎn)后缺乳是指產(chǎn)婦在哺乳期內(nèi)，乳汁分泌缺少或完全沒有，不能滿足嬰兒母乳喂養(yǎng)的需要[1]。中醫(yī)學(xué)認為缺乳多為產(chǎn)婦氣血化源不足，或肝氣郁結(jié)、氣機不暢，或氣血失調(diào)、經(jīng)脈澀滯所致[2]。隨著國家“三孩”政策的開放，高齡產(chǎn)婦產(chǎn)后氣血虛弱而致缺乳的情況更加頻繁[3]。針對這一形勢，廣西中醫(yī)藥大學(xué)制藥廠聯(lián)合廣西中藥大學(xué)依據(jù)國醫(yī)大師班秀文教授在中醫(yī)婦產(chǎn)科、壯醫(yī)藥的壯醫(yī)理論開發(fā)研制了用于治療產(chǎn)后缺乳的制劑——壯藥補噓養(yǎng)勒糖漿（Buxu Yangle Syrup，BXYL）。本研究通過對甲磺酸溴隱亭誘發(fā)大鼠缺乳的藥理學(xué)研究，驗證BXYL 治療產(chǎn)后缺乳的作用，旨在為后期的臨床研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

72 只SD 雌鼠， 體重220～230 g；18 只SD 雄鼠，體重250～260 g， 由長沙市天勤生物技術(shù)有限公司提供，許可證號：SCXK（湘）2019-0014。

1.2 材料與試劑

BXYL（由廣西中醫(yī)藥大學(xué)制藥廠以五指毛桃、當歸、田七、麥冬、川芎、木瓜提取、制備所得，批號：2020801，每克膏含10 g 藥材）；甲磺酸溴隱亭（匈牙利吉瑞大藥廠，批號：T04360A）；通乳顆粒[遼寧上藥好護士藥業(yè)（集團）有限公司，批號：200501]；大鼠泌乳素（prolactin，PRL）酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒（上海泛柯實業(yè)有限公司，批號：F3438-A）；HE 染液（北京雷根生物技術(shù)有限公司，批號：0603A20）。

1.3 主要儀器

FA1004 型上皿電子天平；Multiskan Go 型全波長全自動多功能酶標儀； 徠卡EG1150 H 石蠟包埋機；徠卡RM2255 切片機；徠卡DM2500 顯微鏡。

1.4 方法

1.4.1 分組 實驗動物適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后，取未經(jīng)孕產(chǎn)的SD 大鼠雌鼠與雄鼠按4∶1 的比例同籠飼養(yǎng)， 交配受孕。 以發(fā)現(xiàn)仔鼠為分娩后第1 天，將每窩仔鼠數(shù)量調(diào)整為8 只， 雌雄各半， 同時將受孕成功并分娩的60只母鼠隨機分成6 組，分別為空白組、模型組、陽性組和BXYL 低、中、高劑量組。

1.4.2 制備甲磺酸溴隱亭缺乳大鼠模型及試驗用藥劑量 除空白組外，其余5 組的母鼠每日早晚采用甲磺酸溴隱亭灌胃1 次，連續(xù)10 d。 根據(jù)人與動物劑量換算法，溴隱亭溶液用藥劑量為0.525 mg/kg，按照330 g大鼠灌胃5 ml 的給藥體積灌服，溴隱亭溶液的濃度為0.0693 mg/ml。同時開始給藥，每日1 次，連續(xù)10 d：給藥低劑量2.5 g 生藥/kg，中劑量5 g 生藥/kg，高劑量10 g 生藥/kg（分別相當于人用臨床劑量的0.5、1、2 倍），通乳顆粒12.0 g/kg。

1.4.3 對缺乳母鼠所喂養(yǎng)仔鼠體重的影響 每日晨8時用電子秤稱仔鼠重， 記錄每窩仔鼠每日平均體重，仔鼠體重增加率=（仔鼠每日平均體重-分娩第1 天平均體重）/分娩第1 天平均體重×100%。

1.4.4 對大鼠缺乳模型母鼠泌乳量的影響 出生第2天開始，將仔鼠與母鼠分籠，7 h 后，稱量每窩仔鼠體重后與母鼠同籠，讓母鼠喂乳，1 h 后，重新給每窩仔鼠稱重， 將哺乳前后體重差值作為母鼠8 h 的泌乳量。每日測定1 次，連續(xù)9 d。

1.4.5 對缺乳母鼠血清泌乳素的影響 6 組母大鼠分別于分娩后第3、7、11 天清晨尾靜脈取血，離心，取上清液，采用ELISA 法測定血清PRL 水平。

1.4.6 對缺乳母鼠垂體和乳腺組織學(xué)的影響 將以上各組母鼠在分娩后第11 天稱重，放血處死，剝離母鼠垂體和乳腺，福爾馬林液固定，石蠟包埋切片HE 染色，光鏡檢查。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 16.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析， 符合正態(tài)分布的計量資料用均數(shù)±標準差（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗，不符合正態(tài)分布者經(jīng)過變量轉(zhuǎn)換為正態(tài)分布后行統(tǒng)計學(xué)分析， 以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組母鼠所喂養(yǎng)仔鼠體重的比較

各組每窩仔鼠每日平均體重增長結(jié)果見圖1，各組仔鼠每日平均體重及仔鼠平均體重增加率見表1。模型組母鼠所喂養(yǎng)仔鼠體重增長率低于空白組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；BXYL 高劑量組缺乳性母鼠所喂養(yǎng)的仔鼠體重高于模型組， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）（圖1、表1）。

表1 各組仔鼠每日平均體重和體重增加率（±s）

表1 各組仔鼠每日平均體重和體重增加率（±s）

注 與模型組同期比較，aP＜0.05，aaP＜0.01；與空白組同期比較，bP＜0.05；與陽性組同期比較，cP＜0.05；BXYL：補噓養(yǎng)勒糖漿

分娩后時間（d）12 3 4 5 6 7 8 9 1 0 11仔鼠平均體重BW（g）仔鼠體重增加率WR（%）BW BW WR BW WR BW WR BW WR BW WR BW WR BW WR BW WR BW WR BW WR空白組（n=10）7.62±0.94 8.84±1.51a 16.06±11.80 10.38±1.77aa 36.18±14.85a 12.08±2.14aa 58.58±19.22a 13.94±2.36aa 82.95±22.18a 15.90±2.54aa 108.68±24.63a 18.09±2.84a 137.38±28.94a 20.25±3.04a 165.71±32.18 22.49±3.31a 195.11±36.08 24.87±3.97a 226.37±44.56 26.99±4.09a 254.23±46.87模型組（n=10）7.07±0.50 7.54±0.70 7.14±11.81 8.15±1.01 16.49±18.03 9.39±1.41 35.37±23.12 10.78±1.96 56.57±31.34 12.58±2.00 83.90±33.51 14.17±3.06 115.75±48.10 16.37±3.09 149.18±48.07 18.41±3.45 180.32±53.94 20.62±3.37 213.91±53.11 23.05±3.67 250.95±57.43陽性組（n=10）6.95±0.89 9.32±2.49a 34.18±27.86a 9.86±3.03 41.87±34.90a 11.41±3.52 64.19±42.87 13.27±3.80 92.41±47.11a 14.98±4.31 115.56±55.15 17.05±4.54 145.35±58.79 18.89±5.04 171.92±66.65 20.95±5.45 201.55±73.13 23.10±5.84 232.49±78.44 25.61±6.23 268.49±85.05 BXYL 高劑量組（n=10）8.07±0.90aac 9.40±1.69aa 16.47±12.53 10.89±1.18aa 34.89±8.19aa 12.36±0.97aa 53.08±10.46a 14.53±1.26aa 80.03±13.35a 16.35±1.42aa 102.56±16.12a 18.27±1.55aa 126.33±18.71 20.62±1.81aa 155.48±21.55 23.17±2.11aa 187.05±25.34 24.99±1.92aa 209.65±22.38 27.35±2.23aa 238.92±26.68 BXYL 中劑量組（n=10）7.62±1.54 9.19±1.53aa 21.03±18.32 9.96±1.64a 21.28±11.58ab 11.69±1.75a 54.55±12.45a 13.42±1.83aa 77.63±12.54a 15.45±2.13aa 104.85±14.92a 17.20±2.15a 128.29±31.74 19.29±2.11a 156.17±15.60 21.51±2.35a 185.98±17.14 23.60±2.39a 213.96±19.94 26.32±3.45 250.33±34.16 BXYL 低劑量組（n=10）7.17±0.49 8.47±0.60 18.20±4.46 9.84±0.81 37.24±6.78 11.66±0.76 62.61±7.91 13.41±1.25 87.07±16.89 15.80±1.14 120.37±13.36 17.92±1.27 149.89±15.86 20.02±1.81 179.17±24.11 22.39±1.70 212.32±21.69 24.28±2.04 238.68±25.75 25.97±2.81 262.16±36.65

圖1 各組仔鼠每日平均體重

2.2 各組母鼠每日8 h 泌乳量的比較

模型組每日8 h 泌乳量低于空白組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；BXYL 高、中、低劑量組分娩后3～10 d的每日8 h 泌乳量高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；BXYL 高、中劑量組與空白組、陽性組的每日8 h泌乳量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（表2）。

表2 各組母鼠每日8 h 泌乳量的比較（g，±s）

表2 各組母鼠每日8 h 泌乳量的比較（g，±s）

注 與模型組同期比較，aP＜0.05，aaP＜0.01；與空白組同期比較，bP＜0.05，bbP＜0.01；與陽性組同期比較，cP＜0.05，ccP＜0.01；BXYL：補噓養(yǎng)勒糖漿

分娩后時間（d） 空白組（n=10）模型組（n=10）陽性組（n=10）BXYL 高劑量組（n=10）BXYL 中劑量組（n=10）BXYL 低劑量組（n=10）234567891 0 1.13±0.15aa 2.13±0.16aa 2.72±0.22aa 3.56±0.38aa 3.87±0.25aa 4.20±0.29aa 4．65±0.28aa 4.94±0.30aa 5.21±0.27aa 0.84±0.05 1.03±0.13 2.12±0.32 2.54±0.29 2.90±0.24 3.25±0.24 3.72±0.22 4.09±0.22 4.44±0.20 1.06±0.25a 1.54±0.19aa 2.42±0.27a 3.25±0.20aa 3.76±0.35a 4.16±0.33aa 4.55±0.31aa 4.83±0.30aa 5.12±0.29aa 1.20±0.10aa 1.56±0.18aabb 2.54±0.25aa 3.34±0.19aa 3.83±0.30aa 4.23±0.26aa 4.66±0.24aa 4.98±0.24aa 5.21±0.20aa 1.02±0.18a 1.37±0.12aabbc 2.44±0.34a 3.32±0.23aa 3.66±0.39aa 3.94±0.43aa 4.29±0.46aa 4.59±0.42aa 4.95±0.40aa 0.90±0.08bb 1.28±0.14aabbcc 2.38±0.20abb 3.20±0.22aab 3.44±0.39aabb 3.82±0.38aabc 4.23±0.36aabbc 4.53±0.39aab 4.86±0.35aab

2.3 各組母鼠血清PRL 水平的比較

各組母鼠于分娩后第3 天血清PRL 處于分泌峰值，藥物對此期血清泌乳素水平影響較大。 模型組母鼠血清PRL 低于空白組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；陽性組、BXYL 高、中劑量組缺乳母鼠血清PRL 水平高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 隨著哺乳天數(shù)遞增，各組母鼠血清PRL 下降，開始進入分泌穩(wěn)定期，藥物對此穩(wěn)定期血清PRL 水平仍有影響。 模型組母鼠血清PRL 低于空白組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；BXYL 高劑量組第11 天血清PRL 水平高于陽性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）（表3）。

表3 各組母鼠血清PRL 水平的比較（ng/ml，±s）

表3 各組母鼠血清PRL 水平的比較（ng/ml，±s）

注 與模型組同期比較，aP＜0.05，aaP＜0.01；與空白組同期比較，bP＜0.05；與陽性組同期比較，ccP＜0.01；BXYL：補噓養(yǎng)勒糖漿；PRL：泌乳素

組別 第3 天 第7 天 第11 天空白組（n=10）模型組（n=10）陽性組（n=10）BXYL 高劑量組（n=10）BXYL 中劑量組（n=10）BXYL 低劑量組（n=10）72.75±12.68a 59.70±7.43 67.47±5.21a 73.81±9.65aa 67.88±5.27a 64.52±6.66 30.17±4.96aa 22.83±2.19 26.39±5.25 28.20±5.03aa 27.81±5.78a 25.36±3.63b 27.78±3.16aa 24.00±2.33 24.41±1.65 27.32±2.48aacc 24.76±1.44ab 26.05±1.87a

2.4 各組母鼠垂體和乳腺組織學(xué)結(jié)果

各組母鼠在分娩后第11 天放血處死， 剝離母鼠垂體和乳腺作組織形態(tài)學(xué)檢查，各組母鼠乳腺組織形態(tài)學(xué)結(jié)果見圖2，垂體組織形態(tài)學(xué)結(jié)果見圖3?？瞻捉M母鼠乳腺腺泡和導(dǎo)管結(jié)構(gòu)正常，腺小葉間有正常的脂肪和結(jié)締組織；模型組母鼠乳腺小葉數(shù)量減少，腺泡和導(dǎo)管結(jié)構(gòu)無明顯變化，腺小葉間脂肪和結(jié)締組織增多；與模型組比較，陽性組母鼠乳腺腺小葉增多，腺泡增大導(dǎo)管擴張，腺小葉間脂肪和結(jié)締組織減少；BXYL各劑量組母鼠乳腺腺泡及導(dǎo)管數(shù)量明顯增多，并擴張增生，乳腺小葉間脂肪結(jié)締組織減少（圖2）。 空白組母鼠垂體細胞正常；模型組母鼠垂體細胞核固縮樣改變，嗜酸性細胞減少；與模型組比較，陽性組母鼠垂體嗜酸性細胞有所增加， 但達不到空白組水平；BXYL各劑量組母鼠垂體細胞形態(tài)正常， 嗜酸性細胞增多（圖3）。

圖2 各組母鼠乳腺組織形態(tài)學(xué)（HE 染色，100×）

圖3 各組母鼠垂體組織形態(tài)學(xué)（HE 染色，400×）

3 討論

中醫(yī)學(xué)認為產(chǎn)后缺乳的病因為氣血虛弱、津液不足，使乳汁化生乏源，或經(jīng)脈阻滯、氣血不通，使乳絡(luò)通行不暢，治療方法應(yīng)補氣養(yǎng)血、活血通絡(luò)[4]。 BXYL遵循主幫帶的配伍原則，由五指毛桃、當歸、田七、麥冬、川芎、木瓜組成。 其中五指毛桃，壯名為Gocijcwz，又稱為南芪、土北芪等，具有補噓（氣）、健谷道水道、利濕通絡(luò)的功效， 其補氣補虛功同北芪卻不溫不燥，更適合產(chǎn)婦實用[5]；當歸味甘、辛，性溫，功能為補血活血、調(diào)經(jīng)止痛[6]；番木瓜味甘，性平，功效為健胃消食、滋補催乳、舒筋通絡(luò)，主治脾胃虛弱、食欲不振、乳汁缺少等[7]；麥冬壯名為Megdoeng，味甘、微苦，性微寒，功效為養(yǎng)陰生津、潤肺清心[8]。方中的各藥在壯醫(yī)防治產(chǎn)后病中使用頻率較高[5]。

母乳中含有碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂肪、維生素、礦物質(zhì)、消化酶和激素等營養(yǎng)素，是嬰兒生長發(fā)育的最佳營養(yǎng)，而且含有豐富的抗體，是新生兒腸道獲得適應(yīng)性免疫的第一來源[1]。 PRL 是垂體前葉的一種蛋白質(zhì)激素，PRL 能夠促進乳腺的生長和發(fā)育， 并促進乳汁的合成和維持乳汁的分泌，經(jīng)過催乳素刺激乳腺發(fā)育，從而產(chǎn)生乳汁成分[17]，產(chǎn)婦泌乳素水平的多少決定了泌乳量的多少[19]。 因此，本研究通過監(jiān)測仔鼠體重、母鼠泌乳量、母鼠血清PRL、母鼠垂體和乳腺組織學(xué)，驗證BXYL 對缺乳模型大鼠的治療作用。結(jié)果顯示，BXYL 高劑量組中仔鼠的體重高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；BXYL 高、中劑量組的泌乳量高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；BXYL高、中劑量組與空白組的泌乳量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；隨著時間的增長，泌乳素水平逐漸下降后趨于平穩(wěn)，但因僅記載3 個時間點的數(shù)據(jù)，還需進一步深入研究；模型組母鼠血清PRL 低于空白組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；BXYL 高劑量組第11 天血清PRL 水平高于陽性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），提示BXYL 各劑量組均能改善模型組大鼠缺乳的狀態(tài)，并有效調(diào)節(jié)缺乳模型大鼠的泌乳素水平。 各劑量組母鼠乳腺腺泡及導(dǎo)管數(shù)量多于模型組， 并擴張增生，乳腺小葉間脂肪結(jié)締組織減少；而BXYL 各劑量組母鼠垂體細胞形態(tài)正常，嗜酸性細胞增多。

綜上所述，BXYL 可促進缺乳母鼠乳腺腺小葉增多，腺泡及導(dǎo)管擴大增生，減少乳腺小葉間脂肪結(jié)締組織，且明顯增加垂體嗜酸性細胞數(shù)量和血清泌乳素水平，從而增加母鼠的泌乳量，提高其所喂養(yǎng)的仔鼠體重。 BXYL 對產(chǎn)后缺乳模型大鼠具有明顯的催乳作用，其作用機制有待進一步研究。