曹 穎 曹 偉 賈延偉 王冰瑩 （蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院檢驗科，蘇州 215100）

肝癌是全球范圍內(nèi)最常見的致命惡性腫瘤，晚期患者預(yù)后不良。選擇新的肝癌治療方式，以改善患者預(yù)后是必要的［1］。分子靶向藥物已應(yīng)用于肝癌的臨床治療中，但部分藥物療效不理想，需尋找新的靶點以開發(fā)新的靶向藥物［2］。環(huán)狀RNA（circRNA）是一種新的非編碼RNA，涉及多種疾病的發(fā)生和發(fā)展，可作為新型有前景的人類腫瘤的生物標(biāo)志物或治療靶標(biāo)［3］。研究報道肝癌腫瘤組織中的circ_0001955 水平升高，敲除circ_0001955 在體內(nèi)外抑制了肝癌腫瘤的生長［4］。circ_0001955 可通過調(diào)控miR-145-5p 影響大腸癌進展［5］。然而circ_0001955對肝癌BEL-7402細(xì)胞增殖、凋亡及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的影響及機制尚未完全清楚。研究報道m(xù)iR-1243 通過抑制胰腺癌的EMT 來增加其對吉西他濱的敏感性，miR-1243 可能是新型的化學(xué)治療靶標(biāo)，可以作為胰腺癌的生物標(biāo)志物［6］。miR-1243在甲狀腺乳頭狀癌組織中表達下調(diào)，敲低miR-1243 后促進TPC-1 細(xì)胞的增殖和遷移能力［7］。而miR-1243 對肝癌細(xì)胞增殖、凋亡及EMT 的影響尚不清楚。本實驗旨在研究circ_0001955是否通過調(diào)控miR-1243影響肝癌細(xì)胞的增殖、凋亡及EMT。

1 資料與方法

1.1 資料

1.1.1 一般資料 選取蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院2016年1月至2020年6月期間收治的20例肝癌患者，通過手術(shù)取其癌組織及癌旁組織，本研究獲蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①與《原發(fā)性肝癌規(guī)范化病理診斷指南（2015 版）》中原發(fā)性肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)相符，經(jīng)病理學(xué)確診；②年齡≥18 歲，首次發(fā)?。虎鬯谢颊呔榍彝?。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有心、肺、腎等重要器官疾??；②伴其他部位惡性腫瘤者；③入組前1 周接受放化療、介入治療、分子靶向藥物治療等抗腫瘤治療。20 例患者中男14 例，女6 例；年齡28～78 歲，平均55 歲；肝癌TNM 臨床分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ+Ⅱ期15例，Ⅲ+Ⅳ期5例；病理學(xué)分級：Ⅰ/Ⅱ：12例，Ⅲ/Ⅳ期8例。

1.1.2 材料 肝癌細(xì)胞株BEL-7402（上海北諾生物科技有限公司）；RPMI1640 培養(yǎng)基（上海高創(chuàng)化學(xué)科技有限公司）；熒光定量試劑盒（上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司）；MTT 試劑盒（上海美軒生物科技有限公司）；Annexin V-FITC/PI 凋亡檢測試劑盒（上海超研生物科技有限公司）；蛋白提取試劑盒、BCA 試劑盒（艾美捷科技有限公司）；雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒（武漢純度生物科技有限公司）。circ_0001955 干擾質(zhì)粒及陰性對照、miR-1243 模擬物，miR-1243 inhibitor 及其陰性對照購自上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞處理與分組 肝癌細(xì)胞株BEL-7402接種在RPMI1640 培養(yǎng)基中進行常規(guī)培養(yǎng)，取對數(shù)生長期細(xì)胞，將circ_0001955 干擾質(zhì)粒及陰性對照、miR-1243 模擬物及其陰性對照用50 μl 無血清培養(yǎng)液稀釋，輕輕混勻；同時取同樣量的培養(yǎng)液稀釋轉(zhuǎn)染試劑，室溫靜置5 min；然后將上述兩種溶液混勻，靜置20 min 后加入到提前培養(yǎng)好的BEL-7402 細(xì)胞中，混勻，孵育6 h 后更換新的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，將其分別記為si-NC 組、si-circ_0001955 組、miR-NC組、miR-1243 組；將circ_0001955 干擾質(zhì)粒分別與miR-1243 inhibitor 及其陰性對照按上述方法轉(zhuǎn)染至BEL-7402 細(xì)胞中，記為si-circ_0001955+anti-miRNC 組、si-circ_0001955+anti-miR-1243 組。si-circ_0001955 序列為：5'-TTCGAAATCAGGTGAAGGT-3'；miR-1243 mimic：5'-AACTGGATCAATATAGGAGTG-3'；miR-1243 inhibitor：5'-GGCATTCACCGCGT‐GCCTTA-3'。

1.2.2 RT-qPCR 檢測circ_0001955 和miR-1243 的表達水平 提取癌組織、癌旁組織及細(xì)胞的總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，按照熒光定量試劑盒說明進行PCR，反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性3 min，95 ℃變性20 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共40 個循環(huán)；融解曲線：95 ℃15 s，60 ℃15 s，95 ℃15 s。相對表達量用2?ΔΔCt法計算，其中circ_0001955 和miR-1243 分別以GAPDH和U6為內(nèi)參。circ_0001955正向引物序列：5'-GGTGCATCTGCAATAACTCG-3'，反向引物序列：5'-ATTTCCCACATGGTCCAAAG-3'；GAPDH 正向引物序列：5'-CACCCACTCCTCCACCTTTG-3'，反向引物序列：5'-CCACCACCCTGTTGCTGTAG-3'；miR-1243 正向引物序列：5'-AACTGGATCAATTATAG‐GAGTG-3'，反向引物序列：5'-CAGTGCGTGTCGTG‐GAGT-3'；U6 正向引物序列：5'-CTCGCTTCGGCAG‐CACA-3'，反向引物序列：5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'；引物由上海生工生物工程公司合成。

1.2.3 MTT 檢測細(xì)胞增殖 取各組對數(shù)生長期細(xì)胞，以1×104個/孔接種細(xì)胞于96 孔板，培養(yǎng)48 h 后每孔分別加入MTT 溶液20 μl，在培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育4 h，棄去上清液，每孔加入DMSO 150 μl，振蕩反應(yīng)10 min 使沉淀溶解，用酶標(biāo)儀檢測490 nm 處吸光度（OD）值。增殖抑制率（%）=（1?OD實驗組/OD對照組）×100%。

1.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡 收集培養(yǎng)48 h的各組細(xì)胞，用預(yù)冷的PBS 漂洗2 次，與500 μl 的結(jié)合緩沖液混勻，按試劑盒說明加入Annexin V-FITC和PI 試劑各5 μl，混勻，避光孵育10 min；用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。細(xì)胞凋亡率即為AnnexinV+PI-和AnnexinV+PI+2 個象限的細(xì)胞數(shù)之和占總細(xì)胞數(shù)的比例。

1.2.5 Western blot 法檢測蛋白表達 提取細(xì)胞總蛋白，定量后取50 μl 進行SDS-PAGE，經(jīng)電轉(zhuǎn)將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF 膜上，用5%脫脂牛奶室溫封閉90 min，分別加入相應(yīng)的一抗，4 ℃孵育過夜，PBS 洗滌3次，每次5 min；再加入二抗室溫孵育2 h，PBS洗滌3 次，每次10 min，曝光顯影，再浸入定影液，晾干后用Quantity One 凝膠軟件分析各組蛋白條帶的灰度值，以目的條帶和GAPDH 條帶的比值作為蛋白表達水平。

1.2.6 雙熒光素酶報告實驗檢測circ_0001955 和miR-1243 的靶向調(diào)控 構(gòu)建野生型和突變型circ_0001955 的熒光素酶表達載體WT-circ_0001955 和MUT-circ_0001955，將其分別與miR-NC 和miR-1243 共轉(zhuǎn)染至細(xì)胞BEL-7402 中；按試劑盒說明檢測BEL-7402 細(xì)胞中螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶活性，以二者比值作為相對熒光素酶活性。將circ_0001955 過表達載體、circ_0001955 抑制表達載體及其陰性對照轉(zhuǎn)染至BEL-7402 細(xì)胞中，按1.2.2中方法檢測miR-1243表達水平。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS20.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，符合正態(tài)分布的計量資料用±s表示，兩組比較行t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 circ_0001955 和miR-1243 在肝癌組織中的表達 采用RT-qPCR 方法比較了20 例肝癌和癌旁組織中circ_0001955 和miR-1243 的表達水平，結(jié)果顯示，與癌旁組織比較，肝癌組織中circ_0001955表達水平升高，miR-1243表達水平降低（P<0.05，表1）。

表1 circ_0001955 和miR-1243 在肝癌組織中的表達（±s，n=20）Tab.1 Expressions of circ_0001955 and miR-1243 in liver cancer tissues（±s，n=20）

表1 circ_0001955 和miR-1243 在肝癌組織中的表達（±s，n=20）Tab.1 Expressions of circ_0001955 and miR-1243 in liver cancer tissues（±s，n=20）

Note：Compared with adjacent tissues，1）P<0.05.

miR-1243 1.01±0.01 0.35±0.011）36.970 0.000 Groups Adjacent tissue Liver cancer tissue tP circ_0001955 0.98±0.02 3.67±0.011）101.800 0.000

2.2 抑制circ_0001955 表達對肝癌BEL-7402 細(xì)胞增殖的影響 采用RT-qPCR 方法檢測干擾circ_0001955 效果，結(jié)果顯示，circ_0001955 表達水平降低，說明干擾成功；用MTT 法檢測細(xì)胞增殖情況，結(jié)果顯示，干擾circ_0001955后細(xì)胞增殖活力降低；用Western blot 檢測Ki-67 蛋白表達水平，結(jié)果顯示，干擾circ_0001955 后Ki-67 蛋白表達水平降低（P<0.05，圖1、表2）。

表2 抑制circ_0001955 表達對肝癌BEL-7402 細(xì)胞增殖活力的影響（±s，n=9）Tab.2 Effects of inhibiting expression of circ_0001955 on proliferation of liver cancer BEL-7402 cells（±s，n=9）

表2 抑制circ_0001955 表達對肝癌BEL-7402 細(xì)胞增殖活力的影響（±s，n=9）Tab.2 Effects of inhibiting expression of circ_0001955 on proliferation of liver cancer BEL-7402 cells（±s，n=9）

Note：Compared with si-NC group，1）P<0.05.

Ki-67 protein 0.72±0.03 0.29±0.041）8.561 0.000 Groups si-NC si-circ_0001955 tP circ_0001955 1.03±0.03 0.36±0.031）15.620 0.000 Cell viability/%100.00±9.40 48.57±4.401）14.866 0.000

圖1 增殖相關(guān)蛋白表達Fig.1 Proliferation-related protein expression

2.3 抑制circ_0001955 表達對肝癌BEL-7402 細(xì)胞凋亡的影響 采用流式細(xì)胞術(shù)檢測干擾circ_0001955肝癌細(xì)胞凋亡情況，結(jié)果顯示，BEL-7402細(xì)胞凋亡率升高；用Western blot檢測凋亡相關(guān)蛋白表達情況，結(jié)果顯示，Bcl-2 表達水平降低，Bax 表達水平升高（P<0.05，圖2、表3）。

表3 抑制circ_0001955 表達對肝癌BEL-7402 細(xì)胞凋亡的影響（±s，n=9）Tab.3 Effects of inhibiting expression of circ_0001955 on apoptosis of liver cancer BEL-7402 cells（±s，n=9）

表3 抑制circ_0001955 表達對肝癌BEL-7402 細(xì)胞凋亡的影響（±s，n=9）Tab.3 Effects of inhibiting expression of circ_0001955 on apoptosis of liver cancer BEL-7402 cells（±s，n=9）

Note：Compared with si-NC group，1）P<0.05.

Bax protein 0.21±0.02 0.67±0.021）19.400 0.000 Groups si-NC si-circ_0001955 tP Apoptosis rate/%6.37±0.14 24.08±0.621）28.030 0.000 Bcl-2 protein 0.62±0.03 0.19±0.011）11.390 0.000

圖2 抑制circ_0001955 表達對肝癌BEL-7402 細(xì)胞凋亡的影響Fig.2 Effects of inhibiting expression of circ_0001955 on apoptosis of liver cancer BEL-7402 cells

2.4 抑制circ_0001955 表達對肝癌BEL-7402 細(xì)胞EMT 的影響 Western blot 檢測EMT 相關(guān)蛋白表達情況，結(jié)果顯示，干擾circ_0001955 后肝癌BEL-7402 細(xì)胞中E-cadherin 表達水平升高，Vimentin 表達水平降低（P<0.05，圖3、表4）。

表4 circ_0001955表達對肝癌BEL-7402細(xì)胞EMT 的影響（±s，n=9）Tab.4 Effects of circ_0001955 expression on EMT of liv?er cancer BEL-7402 cells（±s，n=9）

表4 circ_0001955表達對肝癌BEL-7402細(xì)胞EMT 的影響（±s，n=9）Tab.4 Effects of circ_0001955 expression on EMT of liv?er cancer BEL-7402 cells（±s，n=9）

Note：Compared with si-NC group，1）P<0.05.

Vimentin protein 0.68±0.03 0.27±0.021）12.960 0.000 Groups si-NC si-circ_0001955 tP E-cadherin protein 0.23±0.02 0.48±0.021）8.602 0.000

圖3 EMT相關(guān)蛋白表達Fig.3 EMT related protein expression

2.5 circ_0001955 靶向調(diào)控miR-1243 的表達（Star‐Base） StarBase 預(yù)測顯示circ_0001955 的序列中含有與miR-1243互補的核苷酸序列（圖4）。雙熒光素酶報告實驗檢測結(jié)果顯示，WT-circ_0001955 與miR-1243 共轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞熒光素酶活性降低（P<0.05）；MUT-circ_0001955 與miR-1243 共轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞熒光素酶活性差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05，表5）。采用RT-qPCR 方法檢測抑制circ_0001955表達及過表達circ_0001955 后miR-1243 的表達水平，結(jié)果顯示，與si-NC 組比較，si-circ_0001955 組miR-1243 的表達水平升高；與pcDNA 組比較，circ_0001955組miR-1243的表達水平降低（P<0.05，表6）。

表5 雙熒光素酶報告實驗（±s，n=9）Tab.5 Double luciferase report experiment（±s，n=9）

表5 雙熒光素酶報告實驗（±s，n=9）Tab.5 Double luciferase report experiment（±s，n=9）

Note：Compare with miR-NC，1）P<0.05.

MUT-circ_0001955 1.01±0.03 1.01±0.02 0.094 0.927 Groups miR-NC miR-1243 tP WT-circ_0001955 1.03±0.02 0.43±0.031）16.580 0.000

表6 circ_0001955調(diào)控miR-1243的表達（±s，n=9）Tab.6 circ_0001955 regulates expression of miR-1243（±s，n=9）

表6 circ_0001955調(diào)控miR-1243的表達（±s，n=9）Tab.6 circ_0001955 regulates expression of miR-1243（±s，n=9）

Note：Compared with si-NC group，1）P<0.05；compared with pcDNA group，2）P<0.05.

miR-1243 0.98±0.08 2.68±0.221）1.02±0.07 0.43±0.052）182.641 0.000 Groups si-NC si-circ_0001955 pcDNA circ_0001955 tP

圖4 circ_0001955 序列中含有與miR-1243 互補的核苷酸序列Fig.4 Sequence of circ_0001955 contains a nucleotide se?quence complementary to miR-1243

2.6 miR-1243 過表達對肝癌BEL-7402 細(xì)胞增殖、凋亡和EMT 的影響 采用RT-qPCR 方法檢測miR-1243轉(zhuǎn)染效果，結(jié)果顯示，miR-1243表達水平升高；MTT 法檢測過表達miR-1243后細(xì)胞增殖情況，結(jié)果顯示，細(xì)胞增殖活力降低；流式細(xì)胞術(shù)檢測過表達miR-1243 后細(xì)胞凋亡情況，結(jié)果顯示，細(xì)胞凋亡率升高；用Western blot檢測蛋白表達水平，結(jié)果顯示，過表達miR-1243 后，Ki-67、Bcl-2 和Vimentin 表達水平降低，Bax 和E-cadherin 表達水平升高（P<0.05，圖5、表7）。

表7 miR-1243過表達對肝癌BEL-7402細(xì)胞增殖、凋亡和EMT的影響（±s，n=9）Tab.7 Effects of miR-1243 overexpression on proliferation，apoptosis and EMT of liver cancer BEL-7402 cells（±s，n=9）

表7 miR-1243過表達對肝癌BEL-7402細(xì)胞增殖、凋亡和EMT的影響（±s，n=9）Tab.7 Effects of miR-1243 overexpression on proliferation，apoptosis and EMT of liver cancer BEL-7402 cells（±s，n=9）

Note：Compared with miR-NC group，1）P<0.05.

Vimentin protein 0.65±0.02 0.29±0.041）7.951 0.000 Groups miR-NC miR-1243 tP miR-1243 1.02±0.02 2.90±0.071）24.540 0.000 Cell viability/%100.00±8.80 48.61±4.201）15.811 0.000 Apoptosis rate/%7.09±0.31 19.85±0.501）21.580 0.000 Ki-67 protein 0.81±0.04 0.41±0.021）8.002 0.000 Bcl-2 protein 0.56±0.02 0.24±0.011）13.260 0.000 Bax protein 0.25±0.03 0.65±0.041）8.682 0.000 E-cadherin protein 0.17±0.01 0.46±0.031）8.131 0.000

圖5 miR-1243 過表達對肝癌BEL-7402 細(xì)胞增殖、凋亡和EMT的影響Fig.5 Effects of miR-1243 overexpression on prolifera?tion，apoptosis and EMT of liver cancer BEL-7402 cells

2.7 干擾miR-1243 表達逆轉(zhuǎn)了抑制circ_0001955表達對肝癌BEL-7402 細(xì)胞增殖、凋亡和EMT 的作用 采用RT-qPCR 方法檢測轉(zhuǎn)染效果，結(jié)果顯示，miR-1243 表達水平降低；MTT 法檢測抑制circ_0001955 和miR-1243 表達后細(xì)胞增殖情況，結(jié)果顯示，細(xì)胞活力升高；流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況，結(jié)果顯示，與si-circ_0001955+anti-miR-NC 組比較，si-circ_0001955+anti-miR-1243 組細(xì)胞凋亡率降低；用Western blot 檢測蛋白表達水平，結(jié)果顯示，Ki-67、Bax和Vimentin表達水平升高，Bcl-2和E-cad‐herin表達水平降低（P<0.05，表8、圖6）。

表8 干擾miR-1243表達逆轉(zhuǎn)了抑制circ_0001955表達對肝癌BEL-7402細(xì)胞增殖、凋亡和EMT的作用（±s，n=9）Tab.8 Interference of miR-1243 expression reversed effect of inhibiting circ_0001955 expression on proliferation，apopto?sis and EMT of liver cancer BEL-7402 cells（±s，n=9）

表8 干擾miR-1243表達逆轉(zhuǎn)了抑制circ_0001955表達對肝癌BEL-7402細(xì)胞增殖、凋亡和EMT的作用（±s，n=9）Tab.8 Interference of miR-1243 expression reversed effect of inhibiting circ_0001955 expression on proliferation，apopto?sis and EMT of liver cancer BEL-7402 cells（±s，n=9）

Note：Compared with si-circ_0001955+anti-miR-NC group，1）P<0.05.

Vimentin protein 0.23±0.02 0.55±0.021）13.640 0.000 Groups miR-1243 Ki-67 protein Bcl-2 protein Bax protein si-circ_0001955+anti-miR-NC si-circ_0001955+anti-miR-1243 tP 1.00±0.03 0.37±0.011）17.090 0.000 Cell viability/%48.15±5.40 61.25±0.041）7.278 0.000 Apoptosis rate/%23.67±1.37 15.63±0.561）5.434 0.000 0.30±0.03 0.66±0.031）9.074 0.000 0.56±0.03 0.49±0.031）1.899 0.000 0.22±0.01 0.37±0.021）20.125 0.000 E-cadherin protein 0.47±0.03 0.27±0.011）7.114 0.000

圖6 干擾miR-1243 表達逆轉(zhuǎn)抑制circ_0001955 表達對肝癌BEL-7402細(xì)胞增殖、凋亡和EMT的作用Fig.6 Interference of miR-1243 expression reversed effect of inhibiting circ_0001955 expression on prolifera?tion，apoptosis and EMT of liver cancer BEL-7402 cells

3 討論

隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，靶向治療正逐漸成為肝癌治療的主要途徑之一［8］。研究表明一些circRNA 可通過調(diào)節(jié)各種生物學(xué)過程在肝癌進程中發(fā)揮致癌作用或抑制作用，被鑒定為肝癌診斷和預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物［9］。circRHOT1 在肝癌組織中上調(diào)表達，circRHOT1表達水平高的患者預(yù)后較差；且circRHOT1可促進肝癌細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移［10］。肝癌組織中circSETD3 的低表達預(yù)示了預(yù)后不良，并且與患者的腫瘤較大和肝癌分化差有關(guān)，是有價值的預(yù)后生物標(biāo)志物；且circSETD3 高表達通過調(diào)控miR-421 抑制了肝癌細(xì)胞的增殖［11］。以上研究表明circRNA 參與了肝癌的發(fā)生發(fā)展過程，可作為生物標(biāo)志物。研究報道circ_0001955 在三陰性乳腺癌中差異表達［12］。本實驗結(jié)果顯示，肝癌組織中circ_0001955表達水平升高。此外，抑制circ_0001955表達后，肝癌細(xì)胞活力降低，Ki-67蛋白表達水平降低，BEL-7402 細(xì)胞凋亡率升高，Bcl-2 蛋白表達水平降低，Bax 蛋白表達水平升高；表明抑制circ_0001955表達可抑制肝癌細(xì)胞增殖，促進細(xì)胞凋亡。且抑制circ_0001955 表達還上調(diào)了E-cadherin 蛋白表達，下調(diào)了Vimentin 蛋白表達；E-cadherin、Vimentin 是EMT 過程相關(guān)因子，因此，實驗結(jié)果還表明，抑制circ_0001955表達抑制了肝癌的EMT過程。

研究表明circRNA 可通過miRNA 及其靶基因mRNA影響肝癌的進展［13］。如circRNA-5692可通過刺激miR-328-5p 進而增強DAB2IP 的表達來抑制肝癌的發(fā)展［14］。本實驗通過StarBase 預(yù)測circ_0001955的靶向結(jié)合miRNA，結(jié)果發(fā)現(xiàn)circ_0001955與miR-1243 有結(jié)合位點。研究報道m(xù)iR-1243 通過靶向抑制Akt1 和Akt2 的表達進而調(diào)節(jié)甲狀腺乳頭狀癌TPC-1 細(xì)胞遷移［15］。circ_0002570 通過miR-1243/血管動蛋白軸抑制高糖誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞的血管生成和炎癥［16］。本實驗結(jié)果顯示，肝癌組織中miR-1243 表達水平降低；過表達miR-1243 后，肝癌細(xì)胞活力降低，細(xì)胞凋亡率升高，Ki-67、Bax和Vimentin表達水平降低，Bcl-2和E-cad‐herin表達水平升高；表明過表達miR-1243可抑制肝癌細(xì)胞增殖及EMT，且促進細(xì)胞凋亡。本實驗還證實circ_0001955 靶向調(diào)控miR-1243；而干擾miR-1243 表達逆轉(zhuǎn)了抑制circ_0001955 表達對肝癌BEL-7402細(xì)胞增殖、凋亡和EMT的作用。

綜上所述，抑制circ_0001955 表達可能通過調(diào)控miR-1243 抑制肝癌BEL-7402 細(xì)胞增殖及EMT，促進細(xì)胞凋亡。