譚 純，賈紅菓，梅四鵬，王冰楠，孫 雪，羅 珊，周榮瓊,2

（1.西南大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，重慶 402460；2.西南大學(xué)醫(yī)學(xué)研究院，重慶 402460）

【研究意義】兔球蟲(chóng)病是由艾美耳屬（Eimeria）球蟲(chóng)寄生于兔肝膽管或腸上皮細(xì)胞內(nèi)而引起的一種寄生性原蟲(chóng)病，在臨床上以腹瀉、生長(zhǎng)緩慢、消瘦為主要特征［1-2］。該病一年四季均可發(fā)生與流行，尤其是在溫暖、潮濕的春夏多雨季節(jié)，常呈地方性流行［3］。不同品種、年齡的家兔均可感染［4］。根據(jù)球蟲(chóng)不同的寄生部位，可將該病分為腸型、肝型和混合型，臨床上最為多見(jiàn)的是混合型［5］。目前已確定感染兔的球蟲(chóng)有11 種，其中以侵害肝臟的斯氏艾美耳球蟲(chóng)致病力最強(qiáng)，30 日齡以下的幼兔極易感，且感染率達(dá)90%以上，死亡率高達(dá)30%以上［6］，對(duì)養(yǎng)兔業(yè)可造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，防治兔球蟲(chóng)病多以藥物為主，將抗球蟲(chóng)藥物添加進(jìn)飼料或水中是防治兔球蟲(chóng)病的常見(jiàn)方法［7-8］。由于抗球蟲(chóng)藥物種類繁多且致病蟲(chóng)株復(fù)雜多變，加上長(zhǎng)期不合理使用藥物，兔球蟲(chóng)不斷產(chǎn)生耐藥性。此外，抗球蟲(chóng)藥物容易殘留于兔肉中，影響消費(fèi)者健康［9］。因此，掌握渝西地區(qū)兔球蟲(chóng)病流行情況和優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種十分必要，有利于科學(xué)防治該地區(qū)的兔球蟲(chóng)病。

【前人研究進(jìn)展】近年來(lái)，一些國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)兔球蟲(chóng)病流行情況進(jìn)行了調(diào)查。據(jù)Dusynski等［10］報(bào)道，全球兔球蟲(chóng)感染率為64%～100%。Jing 等［11］在對(duì)我國(guó)14 個(gè)省的調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，兔球蟲(chóng)的總體感染率為41.9%，其中流行率最高（70%）的是西北地區(qū)。兔球蟲(chóng)感染過(guò)程中容易受到機(jī)體自身免疫程度和外界環(huán)境的影響，且兔球蟲(chóng)種類多，不同地區(qū)流行蟲(chóng)種有差異。白鑫等［12］報(bào)道斯氏艾美耳球蟲(chóng)是致病力最強(qiáng)的兔球蟲(chóng)蟲(chóng)種，在我國(guó)感染范圍廣，主要分布在西南、中南、西北等地區(qū)。任永軍等［13］發(fā)現(xiàn)四川兔球蟲(chóng)病的感染強(qiáng)度為中、輕度感染，其感染蟲(chóng)種高達(dá)11 種，而致病蟲(chóng)種為斯氏艾美爾球蟲(chóng)、黃艾美爾球蟲(chóng)和腸艾美爾球蟲(chóng)。陳紅等［14］發(fā)現(xiàn)甘肅兔艾美耳球蟲(chóng)的總體感染率為50%，其中地區(qū)、品種和年齡等因素是影響兔艾美耳球蟲(chóng)感染率的風(fēng)險(xiǎn)因素?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】重慶近10 余年來(lái)鮮有兔球蟲(chóng)病流行病學(xué)報(bào)告，僅見(jiàn)樵星芳等［15］于2009 年6 月對(duì)重慶市中藥研究院實(shí)驗(yàn)兔球蟲(chóng)感染種類的鑒定。為掌握渝西地區(qū)兔球蟲(chóng)病的流行情況，本研究對(duì)渝西地區(qū)兔球蟲(chóng)感染情況進(jìn)行調(diào)查。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】調(diào)查渝西地區(qū)不同年齡兔和不同規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)的兔球蟲(chóng)病流行情況，分析影響該地區(qū)兔球蟲(chóng)病流行的主要因素，通過(guò)形態(tài)學(xué)對(duì)兔球蟲(chóng)種類進(jìn)行鑒定，以期掌握該地區(qū)兔球蟲(chóng)的流行情況和優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種，從而為兔球蟲(chóng)病的防治提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

2019 年9 月至2020 年8 月期間，采集渝西8 個(gè)區(qū)14 個(gè)不同規(guī)模及生產(chǎn)管理水平養(yǎng)殖場(chǎng)的兔糞便樣本1 273 份，其中榮昌區(qū)148 份、永川區(qū)121 份、大足區(qū)166 份、璧山區(qū)196 份、江津區(qū)142 份、銅梁區(qū)161 份、潼南區(qū)140 份、合川區(qū)199 份。將各糞便樣本置于無(wú)菌的塑料袋內(nèi)，編號(hào)并記錄場(chǎng)址、日齡、糞便外觀、養(yǎng)殖模式及用藥情況等，置于4 ℃冰箱中保存，待檢。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣本處理 采用飽和鹽水漂浮法對(duì)采集的糞樣逐一鏡檢。經(jīng)鑒定的陽(yáng)性樣本通過(guò)麥克馬斯特氏法測(cè)定克糞便卵囊數(shù)（Oocysts Per Gram，OPG）［16］。

1.2.2 卵囊收集 將陽(yáng)性樣本用研缽磨碎，加適量清水，充分混勻，先后使用孔徑為100、280 μm 的網(wǎng)篩過(guò)濾2 次；將濾液2 500 r/min 離心10 min；棄上清，往沉淀中加入飽和食鹽水溶液，混勻，1 500 r/min 離心10 min；棄上清，往沉淀中加入清水，混勻，2 500 r/min 離心10 min；棄上清，往沉淀中加入適量的1%氯胺T 溶液，置于26～28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，直至95%以上的球蟲(chóng)卵囊孢子化時(shí)停止培養(yǎng)，收集卵囊液，置于4 ℃冰箱中保存。

1.2.3 兔球蟲(chóng)種類鑒定 參照文獻(xiàn)［15］進(jìn)行兔球蟲(chóng)種類鑒定。分別觀察各地區(qū)球蟲(chóng)孢子化卵囊，從卵囊壁顏色、原生質(zhì)層顏色、有無(wú)殘?bào)w和卵膜孔等特征進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定。

采用Excel 2010 軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 渝西地區(qū)兔球蟲(chóng)感染情況

2.1.1 不同地區(qū)兔球蟲(chóng)感染情況 對(duì)渝西地區(qū)1 273 份糞樣進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果（表1）顯示，各地區(qū)均存在兔球蟲(chóng)感染，平均感染率為90.65%，平均OPG 值為3.50×104。不同地區(qū)之間的感染情況存在不同程度的差異，其中璧山區(qū)和江津區(qū)的兔球蟲(chóng)感染率最高、達(dá)100%，潼南區(qū)的感染率最低、為72.14%；大足區(qū)的兔球蟲(chóng)OPG 值最高、達(dá)到6.56×104，永川的OPG 最低、為9.65×103。

表1 不同地區(qū)兔球蟲(chóng)感染情況Table 1 Infection of rabbit coccidia in different regions

2.1.2 不同年齡兔球蟲(chóng)感染情況 對(duì)不同年齡兔的糞樣進(jìn)行鏡檢，結(jié)果（表2）顯示，2 月齡以下兔的球蟲(chóng)感染率最高、達(dá)98.19%，極顯著高于2～4 月齡、4～9 月齡及9 月齡以上年齡段兔的感染率。9 月齡以上兔的球蟲(chóng)感染率最低、為62.18%；隨月齡增大，兔球蟲(chóng)感染率逐漸降低。此外，2～4 月齡兔球蟲(chóng)OPG 最高、達(dá)到6.31×104，9 月齡以上的OPG 最低、為2.47×103。

表2 不同年齡兔球蟲(chóng)感染情況Table 2 Infection of rabbit coccidia at different ages

2.1.3 不同規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)兔球蟲(chóng)感染情況 對(duì)來(lái)自不同規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)的兔糞樣進(jìn)行鏡檢，結(jié)果（表3）顯示，大型養(yǎng)殖場(chǎng)的感染率最高、達(dá)到92.90%；小型養(yǎng)殖場(chǎng)的感染率最低、為86.53%，表明兔球蟲(chóng)感染率隨著養(yǎng)殖規(guī)模的增大呈上升趨勢(shì)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，小型養(yǎng)殖場(chǎng)的兔球蟲(chóng)感染率極顯著低于大型養(yǎng)殖場(chǎng)。中型養(yǎng)殖場(chǎng)的兔球蟲(chóng)感染強(qiáng)度最高，OPG 達(dá)到4.96×104，而大型和小型養(yǎng)殖場(chǎng)的兔球蟲(chóng)感染強(qiáng)度較低，OPG 分別為2.71×104和2.69×104。

表3 不同規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)兔球蟲(chóng)感染情況Table 3 Infection of rabbit coccidia in different breeding scales farms

2.1.4 不同用藥對(duì)兔球蟲(chóng)感染情況的影響 對(duì)使用不同藥物的兔糞便樣本進(jìn)行鏡檢，結(jié)果（表4）顯示，使用鹽霉素養(yǎng)殖場(chǎng)的感染率最高，達(dá)到92.31%；使用磺胺氯丙嗪鈉養(yǎng)殖場(chǎng)的感染率最低，為78.51%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，使用磺胺氯丙嗪鈉的養(yǎng)殖場(chǎng)兔球蟲(chóng)感染率極顯著低于使用地克珠利、鹽霉素的養(yǎng)殖場(chǎng)和未用藥養(yǎng)殖場(chǎng)。未用藥養(yǎng)殖場(chǎng)的兔球蟲(chóng)感染強(qiáng)度最高，OPG 達(dá)到4.42×104，而使用磺胺氯丙嗪鈉養(yǎng)殖場(chǎng)的兔球蟲(chóng)感染強(qiáng)度較低，OPG 為1.04×104。

表4 不同用藥對(duì)兔球蟲(chóng)感染情況的影響Table 4 Effects of different drugs on rabbit coccidia infection

2.2 兔球蟲(chóng)種類鑒定及優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種分析

對(duì)渝西8 個(gè)區(qū)14 個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)感染的球蟲(chóng)種類進(jìn)行鑒定，結(jié)果（表5、圖1）共鑒定出10 種艾美耳球蟲(chóng)，分別是斯氏艾美耳球蟲(chóng)（E.stiedai）、大型艾美耳球蟲(chóng)（E.magna）、中型艾美耳球蟲(chóng)（E.media）、小型艾美耳球蟲(chóng)（E.exigua）、無(wú)殘艾美耳球蟲(chóng)（E.irresidua）、穿孔艾美耳球蟲(chóng)（E.perforans）、黃艾美耳球蟲(chóng)（E.f lavescens）、盲腸艾美耳球蟲(chóng)（E.coecicola）、腸艾美耳球蟲(chóng)（E.intestinalis）、梨形艾美耳球蟲(chóng)（E.piriformis）。其中，優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種為穿孔艾美耳球蟲(chóng)（E.perforans）、大型艾美耳球蟲(chóng)（E.magna）、盲腸艾美耳球蟲(chóng)（E.coecicola）和中型艾美耳球蟲(chóng)（E.media），檢出率分別為25.20%、23.38%、11.96%、10.02%；黃艾美耳球蟲(chóng)和梨形艾美耳球蟲(chóng)檢出率最低，僅為1.91%和1.40%。

圖1 渝西地區(qū)10 種兔球蟲(chóng)（×400）Fig.1 Ten kinds of rabbit coccidia in western Chongqing (×400)

表5 渝西地區(qū)兔球蟲(chóng)種類Table 5 Species of rabbit coccidia in western Chongqing

2.2.1 不同地區(qū)兔球蟲(chóng)種類及優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種 渝西8 個(gè)地區(qū)中檢出率最高的兔球蟲(chóng)種類分別為穿孔艾美耳球蟲(chóng)（24.08%～26.27%）、大型艾美耳球蟲(chóng)（21.44%～24.01%）和盲腸艾美耳球蟲(chóng)（10.60%～13.28%）；檢出率最低的是黃艾美耳球蟲(chóng)（1.23%～2.66%）和梨形艾美耳球蟲(chóng)（0.99%～2.09%）。8 個(gè)區(qū)前3 種優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種均為穿孔艾美耳球蟲(chóng)、大型艾美耳球蟲(chóng)和盲腸艾美耳球蟲(chóng)，榮昌、合川區(qū)中型艾美耳球蟲(chóng)與無(wú)殘艾美耳球蟲(chóng)檢出率相同，為第4 種優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種；永川、璧山、江津和銅梁區(qū)中型艾美耳球蟲(chóng)為第4 種優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種；大足區(qū)第4 種優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種為無(wú)殘艾美耳球蟲(chóng)；斯氏艾美耳球蟲(chóng)為潼南區(qū)的第4 種優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種。

2.2.2 不同年齡兔球蟲(chóng)種類及優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種 不同年齡檢出率最高的兔球蟲(chóng)分別為穿孔艾美耳球蟲(chóng)（21.77%～24.53%）、大型艾美耳球蟲(chóng)（21.77%～24.53%）、盲腸艾美耳球蟲(chóng)（10.29%～14.29%）和中型艾美耳球蟲(chóng)（9.28%～10.90%）；檢出率最低的是黃艾美耳球蟲(chóng)（1.00%～2.54%）和梨形艾美耳球蟲(chóng)（0.83%～2.18%）。2 月齡以下、2～4 月齡和9 月齡以上兔優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種依次為穿孔艾美耳球蟲(chóng)、大型艾美耳球蟲(chóng)、盲腸艾美耳球蟲(chóng)、中型艾美耳球蟲(chóng)，4～9 月齡兔優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種依次為大型艾美耳球蟲(chóng)、穿孔艾美耳球蟲(chóng)、盲腸艾美耳球蟲(chóng)、中型艾美耳球蟲(chóng)（表6）。

表6 不同年齡兔球蟲(chóng)種類分布情況Table 6 Species of rabbit coccidia at different ages (%)

3 討論

我國(guó)是世界兔肉生產(chǎn)大國(guó)，無(wú)論是兔肉產(chǎn)量和出口方面均位列世界前茅。目前全世界兔肉總產(chǎn)量210 萬(wàn)t，我國(guó)約85 萬(wàn)t，占1/3 以上［17］。由于我國(guó)的兔產(chǎn)業(yè)具有品種不均勻及密集養(yǎng)殖的特點(diǎn)，因此防控兔球蟲(chóng)病十分困難。據(jù)報(bào)道，我國(guó)不同地區(qū)、不同兔場(chǎng)以及不同日齡的兔球蟲(chóng)總感染率為41.9%～87.4%［12-14,18］。Jing 等［11］發(fā)現(xiàn)西南地區(qū)兔球蟲(chóng)的感染率為62.5%，Yin 等［19］報(bào)道四川兔球蟲(chóng)感染率為56.4%。而本研究渝西地區(qū)兔球蟲(chóng)的感染比較普遍，感染率達(dá)到90.65%，平均OPG 為3.50×104，其中2 月齡以下兔的球蟲(chóng)感染率最高，與上述報(bào)道一致。

渝西地區(qū)不同規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)兔球蟲(chóng)的感染率隨養(yǎng)殖規(guī)模的增大呈上升趨勢(shì)。小型養(yǎng)殖場(chǎng)球蟲(chóng)感染率（86.53%）低于大型養(yǎng)殖場(chǎng)（92.90%）和中型養(yǎng)殖場(chǎng)（90.89%）。而Jing 等［11］對(duì)我國(guó)14 個(gè)省48 個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)的兔球蟲(chóng)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)小型養(yǎng)殖場(chǎng)的兔球蟲(chóng)感染率（61.4%）高于大型（34.2%）和中型（37.1%）養(yǎng)殖場(chǎng)，本研究結(jié)果與其存在差異。分析原因可能是渝西地區(qū)大、中型養(yǎng)殖場(chǎng)養(yǎng)殖兔數(shù)量過(guò)多，衛(wèi)生狀況較差；同時(shí)因場(chǎng)地有限，各年齡段兔混養(yǎng)現(xiàn)象普遍存在，導(dǎo)致兔球蟲(chóng)感染率及感染強(qiáng)度升高。

目前國(guó)際公認(rèn)的兔球蟲(chóng)有效種有11 種［13］，而不同地區(qū)兔球蟲(chóng)種類的優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種也存在差異。Maziz-Bettahar 等［20］報(bào)道阿爾及利亞北部的優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種為大型艾美耳球蟲(chóng)（42.5%）。Ladron等［3］發(fā)現(xiàn)墨西哥流行最廣的蟲(chóng)種為腸艾美耳球蟲(chóng)（11.3%）。Jing 等 ［11］報(bào)道了我國(guó)優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種為穿孔艾美耳球蟲(chóng)（35.2%）、中型艾美耳球蟲(chóng)（31%）和大型艾美耳球蟲(chóng)（28%）。Yin 等［19］發(fā)現(xiàn)四川兔球蟲(chóng)流行種類為穿孔艾美耳球蟲(chóng)（42.7%）、中型艾美耳球蟲(chóng)（35.45%）、無(wú)殘艾美耳球蟲(chóng)（34.55%）和大型艾美耳球蟲(chóng)（31.82%）。本試驗(yàn)在渝西地區(qū)共鑒定出10 種艾美耳球蟲(chóng)，其中 優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種為 穿孔艾美耳球蟲(chóng)（25.20%）、大型艾美耳球蟲(chóng)（23.38%）、盲腸艾美耳球蟲(chóng)（11.96%）。本研究鑒定的優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種與上述報(bào)道相符。穿孔艾美耳球蟲(chóng)和盲腸艾美耳球蟲(chóng)屬于輕微致病和無(wú)致病性的兔球蟲(chóng)種類，而大型艾美耳球蟲(chóng)和中型艾美耳球蟲(chóng)屬于中等致病力的蟲(chóng)種，與家兔腸道炎癥病變和腹瀉有關(guān)。

4 結(jié)論

渝西地區(qū)兔球蟲(chóng)感染率較高，平均感染率為90.65%，平均OPG 為3.50×104，說(shuō)明該地區(qū)兔球蟲(chóng)感染非常普遍。其中2 月齡以下兔感染率為98.19%，顯著高于其他年齡段兔感染率，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)2 月齡以下兔球蟲(chóng)病的防治。小型養(yǎng)殖場(chǎng)兔球蟲(chóng)感染率為86.53%，顯著低于大型規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)，表明小型養(yǎng)殖場(chǎng)更易于兔球蟲(chóng)病的控制。使用過(guò)磺胺氯丙嗪鈉的養(yǎng)殖場(chǎng)兔球蟲(chóng)感染率極顯著低于使用地克珠利、鹽霉素的養(yǎng)殖場(chǎng)及未用藥的養(yǎng)殖場(chǎng)，表明磺胺氯丙嗪鈉能更有效地防治兔球蟲(chóng)病。渝西地區(qū)兔球蟲(chóng)種類呈現(xiàn)混合感染，不同地區(qū)的前3 位優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種相同，均為穿孔艾美耳球蟲(chóng)（E.perforans）、大型艾美耳球蟲(chóng)（E.magna）、盲腸艾美耳球蟲(chóng)（E.coecicola），第四優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種存在差異，應(yīng)針對(duì)優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種選擇合適的抗球蟲(chóng)藥物進(jìn)行預(yù)防和治療。