◎ 王 琴，張若良，王 靜，楊慧敏

（贛州市食品藥品檢測所，江西 贛州 341000）

百菌清是一種多作用位點(diǎn)的保護(hù)性廣譜殺菌劑，主要用于葉面噴灑，防治多種作物如蔬菜、果樹和小麥等的多種病害，如早疫病、晚疫病、霜霉病、白粉病和葉斑病等[1-4]。百菌清在蔬菜和水果中的應(yīng)用廣泛，主要通過抑制孢子萌發(fā)和游動孢子運(yùn)動而起作用。目前百菌清的檢測方法有氣相ECD檢測法，該法前處理需要過柱等，較為煩瑣，且樣品基質(zhì)干擾較大。本文建立了以QuEChERS為前處理方法，三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用法測定植物源性食品中的百菌清，此法方便快捷且樣品基質(zhì)干擾較小，能快速、準(zhǔn)確地檢測出植物源性食品中的百菌清，檢測結(jié)果可為植物源性食品的種植生產(chǎn)和流通監(jiān)管提供參考[5]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

樣品均為市場采購，總共有13種，分別是番茄、梨、沃柑、芒果、火龍果、韭菜、大白菜、茄子、辣椒、胡蘿卜、蘋果、香蕉和甜瓜。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：百菌清（批號：T16A7T13207；HPLC≥98%），源葉生物；環(huán)氧七氯B（批號：07102KC），Accustandard；QuEChERS salts（4 g 硫酸鎂+1 g氯化鈉+1 g檸檬酸鈉+0.5 g檸檬酸氫二鈉），深圳逗點(diǎn)生物技術(shù)有限公司；QuEChERS凈化管1（150 mg PSA+900 mg MgSO4），深圳逗點(diǎn)生物技術(shù)有限公司；QuEChERS凈化管2（150 mg PSA+15 mg GCB+885 mg MgSO4），深圳逗點(diǎn)生物技術(shù)有限公司；乙腈為色譜純，乙酸乙酯為農(nóng)藥殘留級。

1.2 儀器與設(shè)備

TQ8050NX 氣相色譜質(zhì)譜儀，配有電子轟擊源（EI），日本島津公司；BP211D型萬分之一電子天平和HLD-6002百分之一電子天平。

1.3 試驗方法

1.3.1 氣相色譜條件

色譜柱：SHIMADZU SH-RXi-5SilMS毛細(xì)管柱（30 m×250 μm×0.25 μm）；載氣：高純氦；碰撞氣：高純氬；柱溫程序：100 ℃保持1 min，以30 ℃·min-1升溫至270 ℃，保持4 min；進(jìn)樣口溫度：260 ℃；進(jìn)樣量：1 μL；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量：1 μL。

1.3.2 質(zhì)譜條件

檢測器增益：相對于調(diào)諧結(jié)果，+0.30 kV；接口溫度：270 ℃；溶劑延遲：5.0 min；電子轟擊源：70 eV，離子源溫度：200 ℃，接口溫度：280 ℃；動態(tài)多反應(yīng)監(jiān)測（MRM），百菌清及內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜參數(shù)見表1[1]。

表1 百菌清及內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜參數(shù)表

1.3.3 溶液的制備

（1）內(nèi)標(biāo)溶液的制備。精密稱取環(huán)氧七氯B約0.02 g置于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，制得約2 mg·mL-1環(huán)氧七氯B溶液，再精密量取適量環(huán)氧七氯B溶液用乙酸乙酯稀釋至5 μg·mL-1內(nèi)標(biāo)溶液。

（2）百菌清標(biāo)準(zhǔn)溶液制備。精密稱取百菌清約0.015 g，置于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度；精密量取百菌清標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，逐級用空白基質(zhì)稀釋成質(zhì)量濃度為 0 μg·mL-1、0.005 μg·mL-1、0.010 μg·mL-1、0.050 μg·mL-1、0.100 μg·mL-1、0.250 μg·mL-1和 0.500 μg·mL-1的百菌清標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液，用0.22 μm濾膜過濾，用于上機(jī)測定。

（3）樣品溶液的制備。準(zhǔn)確稱取樣品10 g，置于50 mL塑料離心管中，準(zhǔn)確加入10 mL乙腈和QuEChERS salt及一顆陶瓷均質(zhì)子，蓋上離心管蓋，劇烈振蕩1 min后，4 200 r·min-1離心5 min。吸取6 mL上清液加到QuEChERS凈化管1中，對于顏色較深的樣品將6 mL上清液加到QuEChERS凈化管2中，渦旋混勻1 min后，4 200 r·min-1離心5 min，準(zhǔn)確吸取2 mL上清液于10 mL試管中，40 ℃水浴中氮?dú)獯抵两?。氮吹管中加?0 μL的內(nèi)標(biāo)溶液，1 mL乙酸乙酯復(fù)溶，過0.22 μm濾膜，用于上機(jī)測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍

取1.3.3（2）的百菌清標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，供氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定。以標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度和內(nèi)標(biāo)質(zhì)量濃度的比值為橫坐標(biāo)，以定量離子峰面積和內(nèi)標(biāo)定量離子峰面積的比值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程。當(dāng)百菌清濃度在0～0.5 μg·mL-1，得到線性回歸方程為Y=8.983 0X-0.067 599，相關(guān)系數(shù)為0.999 1，線性良好。

2.2 回收率試驗

取陰性樣品（樣品中百菌清結(jié)果為未檢出），精密稱取陰性樣品9份，每份取樣量為10 g。將這9份陰性樣品分為3組[6]。每組3份陰性樣品，分別加入百菌清標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，3組樣品加標(biāo)量分別為0.10 μg、0.25 μg、1.25 μg，按1.3.3（3）樣品溶液的制備進(jìn)行制備，上機(jī)測定含量，計算回收率，結(jié)果見表2。

表2 回收率測定結(jié)果表

2.3 精密度試驗

取標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為0.1 μg·mL-1的百菌清，連續(xù)進(jìn)樣5針，記錄百菌清定量離子峰面積，再分別計算各成分峰面積的RSD。試驗得到5針百菌清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的峰面積平均值為4 938，精密度為1.8%，可見此方法測定百菌清穩(wěn)定性和重復(fù)性良好。

2.4 樣品測定

取13種蔬菜水果每個品種各一批，共計13批，分別按1.3.3（3）制備樣品溶液，供上機(jī)測定。百菌清標(biāo)準(zhǔn)圖譜、樣品陰性結(jié)果圖譜和樣品陽性結(jié)果圖譜（樣品中檢出百菌清）結(jié)果分別見圖1、圖2與圖3。

圖1 百菌清標(biāo)準(zhǔn)溶液測定圖譜圖

圖2 陰性樣品測定圖譜圖

圖3 陽性樣品測定圖譜圖

2.5 重復(fù)性試驗

取“2.4”項下陽性樣品5份，測定其含量，結(jié)果見表3。

表3 重復(fù)性試驗結(jié)果表

3 結(jié)論與討論

3.1 討論

①提取溶劑的選擇。乙腈作為QuEChERS法中最常用的提取溶劑，適用于提取極性范圍較寬的農(nóng)藥，對蔬菜水果含水量較高的樣品可直接提取。②質(zhì)譜條件的選擇。

色譜柱應(yīng)選用強(qiáng)極性的色譜柱，試驗前選用SHIMADZU毛細(xì)色譜柱SH-Rtx-1701（30 m×250 μm×0.25 μm），百菌清在50～60 min出峰，時間過長，故采用SHIMADZU毛細(xì)色譜柱SH-RXi-5SilMS（30 m×0.25 mm×0.25 μm），百菌清在6.4 min出峰。結(jié)合常規(guī)農(nóng)藥殘留檢驗基礎(chǔ)，參考島津農(nóng)藥數(shù)據(jù)庫，并以基質(zhì)加標(biāo)進(jìn)行驗證，多反應(yīng)檢測掃描方式響應(yīng)高，干擾小，利于植物源性食品中百菌清的檢測。

3.2 結(jié)論

本文的樣品制備方法、氣相色譜條件和質(zhì)譜條件適合百菌清的檢測。其中QuEChERS技術(shù)應(yīng)用于樣品前處理，處理速度快，溶劑使用量少，百菌清回收率以及精確度和準(zhǔn)確度高。本文建立的以QuEChERS為前處理方法，三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用法方法能快速、準(zhǔn)確地檢測出植物源性食品中的百菌清，為百菌清的檢測提供了一種高效的新方法。