賈 賀

（單縣中心醫(yī)院病理科，山東 菏澤 274300）

三陰性乳腺癌（triple-negative breast cancer，TNBC）是乳腺癌常見類型，作為女性惡性腫瘤疾病，發(fā)病率較高。乳腺癌發(fā)病的危險因素較多，比如肥胖、多年乳腺增生病史、居住城市生活壓力大、月經初潮較早或絕經年齡較晚、長期精神抑郁刺激、乳腺癌家族史等[1]，而我國近年調查報道顯示，乳腺癌發(fā)病率持續(xù)升高，影響女性身心健康[2]。TNBC指的是分子標記物PR、ER、Her-2均為陰性表達的一類乳腺癌，也是比較特殊的類型，但其在乳腺癌中占15%～24%，相比其他乳腺癌類型，TNBC惡變率更高，侵襲能力更強，進展更快，且復發(fā)更早[3]。研究表明，乳腺癌易感基因-1（BRCA-1）表達與多種惡性腫瘤有關，比如惡性黑色素瘤、子宮內膜癌等，且其表達與腫瘤分期及預后也有關[4]。此外，在國外一些報道中指出，多腺苷二磷酸核糖聚合酶-1（PARP-1）抑制劑對BRCA突變的乳腺癌有效[5]。國內關于BRCA-1、PARP-1表達與乳腺癌的研究較多，但多數為單一指標報道，關于TNBC中BRCA-1、PARP-1表達相對少見。本次就單縣中心醫(yī)院收治的TNBC患者進行了研究，旨在探究BRCA-1、PARP-1表達情況，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月至2021年12月單縣中心醫(yī)院收治的80例乳腺癌患者為研究對象進行回顧性分析，根據是否為TNBC分為觀察組（TNBC）和對照組（非TNBC），每組40例。觀察組患者年齡23～65歲，平均年齡（42.15±5.31）歲；腫瘤直徑：≤2 cm有22例，＞2 cm有18例。對照組患者年齡22～65歲，平均年齡（42.45±5.12）歲；腫瘤直徑：≤2 cm有24例，＞2 cm有16例。兩組患者一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），組間具有可比性。本研究經單縣中心醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準。納入標準：①符合《中國抗癌協會乳腺癌診治指南與規(guī)范（2015版）》[6]中乳腺癌的診斷標準，并經術后病理確診，其中觀察組患者符合《世界衛(wèi)生組織乳腺腫瘤的組織學分類》[7]中TNBC的診斷標準；②臨床資料無缺失。排除標準：①既往乳腺疾病或已接受過放化療者、精神疾病和其他嚴重惡性腫瘤；②妊娠或哺乳期者。

1.2 檢測方法 入院經手術切除后取患者新鮮乳腺組織標本檢測，將采集的組織標本分割為0.1 g左右，存放于EP凍存管（1.5 mL），且取材后30 min內置入-80 ℃保存，以石蠟包埋組織塊，實施4 μm厚組織切片，待檢。采用免疫組化法檢測BRCA-1、PARP-1，方法如下：切片經60 ℃過夜烘干與脫蠟及水化后備用；以蒸餾水處理后，高壓抗原修復，冷卻到室溫；經0.1 mol/L磷酸緩沖鹽溶液（PBS）（北京生物制品研究所，國藥準字S10850002，規(guī)格：1 mL）洗滌，5 min/次，PBS共3次，加入10 mL過氧化物酶阻斷劑（合肥卡秋醫(yī)療科技有限公司，皖合械備20210096號，規(guī)格：100 mL/瓶），時間10～15 min；經0.1 mol/L PBS洗滌，5 min/次，共3次，予以血清封閉15 min；將多余液體甩去，滴入5 mL一抗即兔抗人胸腺細胞免疫球蛋白（Genzyme Polyclonals S.A.S.，國藥準字J20130139，規(guī)格：5 mL∶25 mg），4 ℃過夜，且選擇PBS代替一抗作為空白對照；加100 μL生物素標記二抗（北京百奧萊博科技有限公司，型號：WK376，規(guī)格：100 μL），時間10～15 min；經0.1 mol/L PBS洗滌，5 min/次，共3次，加100 mL中性樹膠（上海研生實業(yè)有限公司，型號：XW-RS-005，規(guī)格：100 mL/瓶）；核對顯色，予以50 μg蘇木精（北京藍博斯特生物技術有限公司，型號：CH6001，規(guī)格：10 g）復染，脫水封固后，采用光鏡（成都明萱電子科技有限公司，型號：FGM-XX）檢查。

1.3 觀察指標 ①比較兩組患者BRCA-1、PARP-1表達水平。②分析觀察組患者BRCA-1、PARP-1表達水平與臨床參數的關系。

1.4 統計學分析 采用SPSS 22.0統計學軟件進行數據處理。計量資料以（x）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者BRCA-1、PARP-1表達水平比較 觀察組患者BRCA-1表達水平低于對照組，而PARP-1表達水平高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組患者BRCA-1、PARP-1表達水平比較（x）

2.2 觀察組患者BRCA-1、PARP-1表達水平與臨床參數分析 觀察組患者BRCA-1表達水平與年齡、淋巴結轉移、TNM分期有關（P＜0.05），而PARP-1表達水平與淋巴結轉移、TNM分期有關（P＜0.05），見表2。

表2 觀察組患者BRCA-1、PARP-1表達水平與臨床參數分析（x）

3 討論

乳腺癌發(fā)病率逐年升高，北美與北歐等是該病高發(fā)地區(qū)，而亞洲與非洲發(fā)生率較低。但從20世紀70年代開始，亞洲乳腺癌發(fā)病率不斷升高，而我國呈現整體升高趨勢[8]。TNBC作為特殊的乳腺癌，在我國不同地區(qū)發(fā)生率有所不同，而且這種乳腺癌除了有侵襲性強與進展快等特點，還有較高的淋巴結轉移率，組織學分級普遍較高，治療難度大，預后較差[9]。從全球范圍內相關研究看出，TNBC與種族之間有相關性，BRCA-1基因相關性乳腺癌在乳腺惡性腫瘤中占60%～80%，其中大部分為TNBC，說明這兩種亞型之間存在相似的病變機制[10]。另外，抑制PARP-1能降低DNA修復功能，增強對多種腫瘤的治療效果。為此，針對TNBC患者，可從BRCA-1、PARP-1等方面進行探索，成為研究熱點。

本研究結果顯示，觀察組患者BRCA-1表達水平低于對照組，而PARP-1表達水平高于對照組；觀察組患者BRCA-1表達水平與年齡、淋巴結轉移、TNM分期有關，而PARP-1表達水平與淋巴結轉移、TNM分期有關。在同類研究[11]中有相似結論，但還指出良惡性乳腺腫瘤組織中BRCA-1表達低于正常乳腺組織，且惡性腫瘤組織表達低于良性腫瘤組織表達，說明BRCA-1參與TNBC發(fā)生與發(fā)展，而且病情越重，則其水平越低。另有BRCA-1表達水平與臨床參數研究分析顯示，年齡越大其表達水平越高，而臨床分期Ⅰ～Ⅱ期中表達水平高于Ⅲ～Ⅳ期，與本研究結論相似，說明BRCA-1是抑癌基因之一[12]。TNBC體內PARP-1表達水平高于非TNBC患者，同類報道中則指出正常乳腺組織、乳腺良性腫瘤、乳腺惡性腫瘤中，PARP-1表達呈遞增趨勢[13]，說明PARP-1的異常缺失也與乳腺癌發(fā)生有關，同時PARP-1表達與淋巴結轉移、TNM分期有關，說明TNBC采取PARP-1抑制劑治療能取得一定的作用。PARP-1作為存于真核細胞中催化聚ADP核糖化的一種細胞核酶，主要在DNA損傷修復與細胞凋亡及基因組穩(wěn)定性維持中發(fā)揮主要作用[14]。從既往體內或體外研究中證實，PARP-1受到抑制后，會導致DNA修復功能降低或被抑制，從而增強放化療對腫瘤的治療作用。BRCA-1作為一類抑癌基因，其突變與家族性乳腺癌有關，也是常見的乳腺癌易感基因，發(fā)生BRCA-1突變后，進展為乳腺癌的風險顯著升高[15]。BRCA-1基因多存在于真核細胞中，是一種有重要的生理功能的蛋白質翻譯后的修飾酶，主要作用在于DNA復制與損傷修復、細胞增殖分化調控，甚至對癌基因穩(wěn)定與細胞凋亡也有作用。隨著對其研究不斷深入，發(fā)現BRCA-1基因高表達和多類惡性腫瘤息息相關，特別是在乳腺癌中有高表達，與惡變程度、淋巴結轉移等呈正相關[16]。此外，從研究結果中看出，對于TNBC與非TNBC而言，BRCA-1表達水平與PARP-1表達水平呈相反的趨勢，其中TNBC患者中BRCA-1表達水平更低，而PARP-1表達水平更高，說明PARP抑制劑在BRCA-1突變型乳腺癌中應用，可作為新研究方向。但本研究中采集的樣本量有限，而且未能與正常乳腺組織進行對比分析，結論可能存在不足，還有待在以后研究中進一步完善。

綜上，BRCA-1、PARP-1參與了乳腺癌的發(fā)生及發(fā)展，TNBC患者BRCA-1表達水平低于非TNBC患者，PARP-1表達水平高于非TNBC患者，且均與淋巴結轉移、TNM分期有關，臨床應重點加強對淋巴結轉移、TNM分期的關注。