何衛(wèi)美 謝驍

胃癌是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，具有較高的發(fā)病率和死亡率[1-2]。目前，我國(guó)早期胃癌的診斷率仍較低，發(fā)現(xiàn)時(shí)多為進(jìn)展期，患者5年總生存率低于30%[3]。尋找早期胃癌的診斷標(biāo)志物對(duì)提高胃癌發(fā)現(xiàn)率以及延長(zhǎng)患者生存期具有重要臨床意義。SOX9（SRYBox 9）是一種核轉(zhuǎn)錄因子蛋白[4]，在胃癌腫瘤組織中表達(dá)異常增加，且與胃癌的增殖及侵襲相關(guān)，提示其可能成為胃癌的標(biāo)志物及潛在治療靶點(diǎn)[5-8]。目前，關(guān)于SOX9蛋白在胃癌患者血清中表達(dá)水平對(duì)胃癌診斷及其臨床病理特征相關(guān)報(bào)道罕見(jiàn)。該研究通過(guò)檢測(cè)胃癌、慢性胃炎和健康體檢人群血清SOX9蛋白水平，探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年1月至2017年12月湖州市中心醫(yī)院收治的胃癌患者85例，作為胃癌組。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)內(nèi)鏡或手術(shù)后病理確診為胃癌；尚未接受放、化療。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：合并嚴(yán)重肝、腎、心腦血管??；具有其他惡性腫瘤病史；合并免疫系統(tǒng)疾病。其中，符合早期胃癌診斷標(biāo)準(zhǔn)（癌組織浸潤(rùn)僅限于粘膜層及粘膜下層）患者22例；胃癌分期，I期12例、II期15例、III期32例、IV期26例。另選取同期慢性胃炎患者65例和健康體檢者63例作為對(duì)照組。三組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。見(jiàn)表1。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象簽署知情同意書(shū)。

表1 三組一般資料比較

1.2 研究方法 （1）采集所有研究對(duì)象清晨空腹靜脈血3 mL，以3,000r/min離心10 min，血清分裝并于-70 ℃儲(chǔ)存?zhèn)溆?。血清SOX9蛋白水平檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒（ELH-SOX9-1，P48436，RayBiotech公司），按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。在酶標(biāo)儀（Model 680 Microplate Reader，美國(guó)BIO-RAD公司）上以雙波長(zhǎng)450 nm/630 nm測(cè)定OD值。以標(biāo)準(zhǔn)SOX9蛋白稀釋后濃度為參考標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測(cè)范圍0～100 ng/mL，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本血清SOX9濃度，以ng/mL表示。（2）收集所有胃癌患者的臨床病理資料，包括Lauren分型、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移、TNM分期、浸潤(rùn)深度、分化程度等。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS24.0統(tǒng)計(jì)軟件。非正態(tài)分布的計(jì)量資料以 [M（P25，P75）] 表示，兩組比較采用非參數(shù)Mann-Whitney U檢驗(yàn)，多組間比較采用非參數(shù)Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)。診斷試驗(yàn)采用受試者工作特征（ROC） 曲線方法，并計(jì)算曲線下面積（AUC）。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同人群血清SOX9蛋白水平比較 胃癌組血清SOX9蛋白水平為76.8（48.1，84.3）ng/mL，慢性胃炎對(duì)照組血清SOX9蛋白水平為33.7（27.0，44.0）ng/mL，健康對(duì)照組血清SOX9蛋白水平為15.5（9.9，25.9）ng/mL。胃癌組的血清SOX9蛋白水平顯著高于其他兩組，差異有統(tǒng)計(jì)血意義（P＜0.05），見(jiàn)圖1。不同分期胃癌患者的血清SOX9蛋白水平比較，隨著胃癌的進(jìn)展SOX9蛋白水平有逐漸上升的趨勢(shì)，見(jiàn)圖2。

圖1 三組的血清SOX9蛋白水平比較

圖2 不同分期胃癌患者血清SOX9蛋白水平

2.2 血清SOX9蛋白水平對(duì)胃癌的診斷價(jià)值 ROC曲線分析顯示，血清SOX9蛋白水平區(qū)分胃癌和慢性胃炎的AUC值為0.845（95% CI：0.780～0.911），見(jiàn)圖3A；區(qū)分胃癌和健康體檢者的AUC值為0.951（95% CI：0.920～0.981），圖3B；區(qū)分胃癌和非胃癌者的AUC值 為0.897（95% CI：0.851～0.944），圖3C。以 . 清SOX9蛋白水平46.0 ng/mL為診斷界值時(shí)，對(duì)胃癌診斷的敏感度為81.2%、特異度為88.3%。進(jìn)一步對(duì)早期胃癌的診斷價(jià)值分析，AUC值為0.757（95% CI：0.659～0.855），血清SOX9蛋白水平對(duì)早期胃癌診斷的敏感度為72.7%，特異度為70.3%，見(jiàn)圖4。

圖3 血清SOX蛋白水平診斷胃癌的ROC曲線

圖4 血清SOX蛋白水平診斷早期胃癌的ROC曲線

2.3 血清SOX蛋白水平與胃癌臨床病理特征相關(guān)性分析 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)肌層、低分化、處于臨床進(jìn)展期的胃癌患者血清SOX蛋白水平顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)未及肌層、高分化、臨床分期低的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。不同性別、年齡、Lauren分型分組胃癌患者的血清SOX蛋白水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 血清SOX9蛋白水平與胃癌患者臨床病理特征相關(guān)性分析

3 討論

胃癌的早期診斷對(duì)其治療和患者預(yù)后有重要意義，但目前缺乏早期診斷的生物標(biāo)志物。SOX9是SOX家族成員之一，研究發(fā)現(xiàn)其在多種惡性腫瘤中表達(dá)增加，具有促進(jìn)腫瘤惡性生物學(xué)表型的作用[9-15]。研究表明，SOX9蛋白在胃癌組織中表達(dá)增加，且在胃癌的發(fā)生發(fā)展中起到促癌作用[5，7-8]，但血清中SOX9蛋白表達(dá)水平對(duì)胃癌的診斷價(jià)值及其與臨床病理特征的相關(guān)性尚不清楚。

本研究通過(guò)檢測(cè)不同人群的血清SOX9蛋白水平，結(jié)果顯示胃癌患者血清SOX9蛋白水平顯著高于慢性胃炎患者及健康體檢者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。應(yīng)用ROC曲線獲得血清SOX9蛋白水平區(qū)分胃癌和非胃癌的AUC值達(dá)0.897，診斷胃癌與非胃癌的敏感度和特異度分別為81.2%、88.3%。既往有研究報(bào)道，胃癌組織SOX9蛋白表達(dá)水平顯著高于癌旁組織[16-18]，但未對(duì)其在組織和血液中表達(dá)對(duì)胃癌診斷的性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。該研究結(jié)果顯示，血清SOX9蛋白水平對(duì)胃癌診斷有一定價(jià)值，進(jìn)一步對(duì)早期胃癌的亞組分析顯示血清SOX9對(duì)早期胃癌具有一定的診斷意義，但敏感度并不是非常高，可能與研究納入的早期胃癌病例數(shù)較少有關(guān)，所得結(jié)論有一定局限性。還有一些胃功能指標(biāo)應(yīng)用于胃癌早期診斷的研究，比如胃蛋白酶原Ⅰ（PG）、胃蛋白酶原Ⅱ（PGⅡ）、胃泌素17（G-17）[19]，是否可以聯(lián)合SOX9與其他生物標(biāo)志物以及常規(guī)腫瘤標(biāo)志物（CA199、CA724、CEA）等構(gòu)建診斷panel以提高胃癌早期診斷能力還有待進(jìn)一步探討。

本研究中胃癌患者的血清SOX9蛋白水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化、浸潤(rùn)深度、臨床分期顯著相關(guān)（P＜0.05），與性別、年齡、Lauren分型等無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）。既往有報(bào)道顯示，胃癌組織SOX9蛋白與腫瘤大小、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)，與性別、年齡、腫瘤分化程度無(wú)顯著相關(guān)性[20]。但邵長(zhǎng)明等[16]報(bào)道顯示，SOX9蛋白水平與胃癌患者的Lauren分型相關(guān)，因此SOX9蛋白與臨床病理特征的相關(guān)性值得進(jìn)一步探討。本研究還顯示，血清SOX9蛋白水平隨著胃癌病情的進(jìn)展呈現(xiàn)逐步升高趨勢(shì)，說(shuō)明其表達(dá)可能與胃癌的進(jìn)展有關(guān)。有多項(xiàng)研究表明，多種分子（miRNA、LncRNA）可以通過(guò)調(diào)控SOX9蛋白來(lái)促進(jìn)胃癌腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲等惡性表型[21-24]，提示SOX9蛋白與胃癌的惡性生物學(xué)行為相關(guān)，在胃癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，SOX9可能成為潛在的診斷標(biāo)志物和胃癌治療新靶點(diǎn)。邵長(zhǎng)明等[16]研究還發(fā)現(xiàn)，組織高表達(dá)SOX9胃癌患者的總生存時(shí)間短于SOX9低表達(dá)患者，同時(shí)組織高表達(dá)SOX9胃癌患者的無(wú)進(jìn)展生存時(shí)間也短于SOX9低表達(dá)胃癌患者[25]，SOX還被認(rèn)為是胃癌復(fù)發(fā)的生物標(biāo)志物[17，26]，以上結(jié)果均提示組織SOX9蛋白表達(dá)水平可能成為胃癌患者預(yù)后的判斷標(biāo)志。本研究結(jié)果也顯示，血清SOX9蛋白水平與胃癌的侵襲、轉(zhuǎn)移和惡性進(jìn)展有關(guān)，而且在臨床中血清樣本采集更方便、檢測(cè)更快捷，還能進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。

綜上所述，血清SOX9蛋白對(duì)胃癌有一定的輔助診斷價(jià)值，推測(cè)SOX9蛋白水平可能對(duì)胃癌的治療療效評(píng)估、復(fù)發(fā)和預(yù)后預(yù)測(cè)具有潛在臨床應(yīng)用價(jià)值，還有待進(jìn)一步研究驗(yàn)證。