冀 葉，袁小筍，張 蕾，馬慧利，董 薇，李長生，張敬偉，任中海，張怡飛

（1.南陽市中心醫(yī)院腫瘤內(nèi)科二病區(qū)，河南 南陽 473000；2.南陽市第二人民醫(yī)院腫瘤科，河南 南陽 473000；3.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南 鄭州 450001）

胃癌是消化道常見的惡性腫瘤，發(fā)病率高、惡性程度高，且早期不易被發(fā)現(xiàn)，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，療效不佳，病死率較高[1]。有研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)是導(dǎo)致胃癌患者死亡的主要因素[2]。因此，探討與胃癌轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)相關(guān)的分子機(jī)制對(duì)指導(dǎo)治療及改善預(yù)后意義重大。長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是一種缺乏開放閱讀框的RNA，沒有或僅有少量蛋白編碼功能，長度>200 nt，可對(duì)表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)控，在多種生理病理過程中發(fā)揮著重要作用[3]。小核仁RNA宿主基因15（small nuclear RNA host gene 15，SNHG15）作為新近發(fā)現(xiàn)的一種lncRNA，在多種惡性腫瘤組織中表達(dá)異常[4]，且與腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲轉(zhuǎn)移過程密切相關(guān)[5]，但其在胃癌中的表達(dá)情況少有報(bào)道。本研究擬通過檢測(cè)胃癌組織中SNHG15表達(dá)，探討其在胃癌中的作用，以期為胃癌的機(jī)制研究提供參考依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

收集2012年5月—2015年5月南陽市中心醫(yī)院擇期行根治性手術(shù)治療的胃癌患者97例，其中男59例、女38例，年齡（56.31±10.35）歲。所有患者均經(jīng)胃鏡及病理學(xué)檢查確診，術(shù)前未接受任何治療。97例患者中，腫瘤≥5 cm者55例，腫瘤<5 cm者42例；低分化者61例，中高分化者36例；TNM分期Ⅰ期6例、Ⅱ期34例、Ⅲ期31例、Ⅳ期26例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移62例。本研究經(jīng)南陽市中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號(hào)：NYSZXYYZLK201108160933），所有患者均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 胃癌患者組織樣本及一般資料收集 收集術(shù)中留取的腫瘤中心組織及距腫瘤邊緣5 cm以上且病理學(xué)檢查正常的胃黏膜組織，沖洗后液氮冷凍，-80 ℃保存。同時(shí)收集所有患者的一般資料，包括性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、分化程度、Lauren分型、TNM分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等。

1.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）檢測(cè) 取胃癌組織和正常胃黏膜組織，剪碎后超聲勻漿。采用Tizol試劑盒（上海源葉生物科技有限公司）提取總RNA，用雙蒸水溶解，-80 ℃保存。檢測(cè)提取的總RNA的純度和濃度。采用PrmeScriptRT reagent Kit[寶生物工程（大連）有限公司，貨號(hào)DRR037]將RNA逆轉(zhuǎn)錄為互補(bǔ)DNA（complementary DNA，cDNA），-20 ℃保存。采用7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（美國ABI公司）及PCR Amplification Kit[寶生物工程（大連）有限公司，貨號(hào)：DRR081]進(jìn)行擴(kuò)增。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。SNHG15：上游5'-GTTGCCTGACCATTCCTGAG-3'，下游5'-AGTAAGCTCTTCCACTTTGAGACC-3'。GAPDH：上游5'-CCAAAATCAGATGGGGCAA TGCTGG-3'，下游5'-TGATGGCATGGACTGT GGTCATTCA-3'。反應(yīng)條件：95℃ 3 min，95℃30 s，56 ℃ 30 s，73 ℃ 30 s，38個(gè)循環(huán)。每份樣本設(shè)6個(gè)復(fù)孔。以GAPDH為內(nèi)參，采用2-△△Ct法計(jì)算SNHG15的相對(duì)表達(dá)量。

1.2.3 隨訪 對(duì)所有患者從術(shù)后第1天開始隨訪5年，形式包括院內(nèi)查房、院外電話、門診復(fù)查及病歷追蹤等，隨訪截止時(shí)間為2020年5月31日。隨訪終點(diǎn)為死亡或隨訪滿5年，隨訪中無失訪病例。患者生存時(shí)間定義為術(shù)后第1天至死亡的時(shí)間。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 14.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。呈正態(tài)分布的計(jì)量資料采用±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。采用Kaplan-Meier生存曲線分析患者術(shù)后生存期，采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型對(duì)預(yù)后影響因素進(jìn)行分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織和正常胃黏膜組織中SNHG15表達(dá)

胃癌組織SNHG15相對(duì)表達(dá)量為2.35±0.22，高于正常胃黏膜組織（1.02±0.10）（t=54.319，P<0.001）。

2.2 不同臨床病理特征患者胃癌組織中SNHG15的表達(dá)

不同性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小和Lauren分型的患者之間胃癌組織SNHG15相對(duì)表達(dá)量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），不同分化程度、TNM分期、浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者之間胃癌組織SNHG15相對(duì)表達(dá)量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 不同臨床病理特征患者胃癌組織中SNHG15的表達(dá)

2.3 SNHG15表達(dá)對(duì)胃癌患者生存期的影響

對(duì)97例胃癌患者隨訪3～60個(gè)月，中位隨訪時(shí)間為32個(gè)月。以胃癌組織SNHG15相對(duì)表達(dá)量的第25百分位數(shù)（P25）（2.18）為臨界值，將患者分為低表達(dá)組（25例，S N H G 1 5≤2.1 8）和高表達(dá)組（7 2例，SNHG15>2.18）。Kaplan-Meier生存曲線分析結(jié)果顯示，低表達(dá)組平均生存時(shí)間[（53.20±2.92）個(gè)月]和5年生存率（80.00%）均高于高表達(dá)組[（30.38±2.32）個(gè)月、23.61%]（Log-rank χ2=20.832，P<0.001）。見圖1。

圖1 不同SNHG15相對(duì)表達(dá)量胃癌患者的Kaplan-Meier生存曲線

2.4 胃癌患者死亡影響因素分析

Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析結(jié)果顯示，低分化、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和SNHG15高表達(dá)是影響胃癌患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素[風(fēng)險(xiǎn)比（hazard ratio，HR）分別為0.381、2.568、2.892和4.851]。見表2。

表2 胃癌患者預(yù)后影響因素的多因素分析

3 討論

近年來，腫瘤治療方法的不斷發(fā)展，特別是靶向藥物的應(yīng)用，在改善患者預(yù)后中發(fā)揮了重要作用，但胃癌靶向藥物治療效果總體仍不理想[6]。因此，臨床亟需尋找與胃癌發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的敏感基因，為胃癌的基因靶向治療提供靶點(diǎn)。lncRNA是近年來腫瘤機(jī)制研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)，與腫瘤惡性增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[7]。有研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA在胃癌組織中表達(dá)異常，參與了胃癌的發(fā)生及惡性化進(jìn)程[8]。SNHG15是一種定位于人7號(hào)染色體的lncRNA，已被發(fā)現(xiàn)在甲狀腺癌[9]、結(jié)直腸癌[10]、肺腺癌[11]等多種惡性腫瘤中表達(dá)升高。本研究結(jié)果顯示，胃癌組織SNHG15相對(duì)表達(dá)量高于正常胃黏膜組織（P<0.001），說明SNHG15在胃癌組織中呈高表達(dá)；低分化、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、浸潤深度T3～T4和發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者的癌組織SNHG15相對(duì)表達(dá)量明顯升高，提示SNHG15可能參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展。

有研究結(jié)果顯示，SNHG15與上皮性卵巢癌不良預(yù)后有關(guān)，可作為患者預(yù)后的生物標(biāo)志物[12]。DONG等[13]的研究結(jié)果顯示，SNHG15高表達(dá)與肺癌患者較差的預(yù)后有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，SNHG15低表達(dá)組平均生存時(shí)間和5年生存率均高于高表達(dá)組（P<0.001），說明SNHG15表達(dá)與胃癌患者預(yù)后有關(guān)，SNHG15高表達(dá)可能是患者預(yù)后不良的標(biāo)志。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析結(jié)果顯示，分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和SNHG15表達(dá)是影響胃癌患者預(yù)后的風(fēng)險(xiǎn)因素，提示SNHG15或可作為評(píng)估患者預(yù)后的潛在標(biāo)志物。

綜上所述，SNHG15在胃癌組織中表達(dá)升高，且與胃癌分化程度、TNM分期、浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，是影響患者預(yù)后的風(fēng)險(xiǎn)因素，有望成為胃癌機(jī)制研究及預(yù)后評(píng)估潛在的生物標(biāo)志物，但其在胃癌中的具體作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。