程菊芬，張立，周衛(wèi)東*，盧明文，潘洪聯(lián)

(1.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 畜牧獸醫(yī)研究所，浙江 杭州 310021；2.浙江燈塔種豬有限公司，浙江 杭州 311107；3.浙江艾杰斯生物科技有限公司，浙江 杭州 310051)

幼兔在斷奶后面臨飼養(yǎng)環(huán)境改變、母源抗體降低、腸黏膜發(fā)育不完善、消化酶分泌不足等不利因素，容易發(fā)生以腹瀉為主的消化系統(tǒng)疾病，危害其生長(zhǎng)發(fā)育，甚至死亡，嚴(yán)重影響?zhàn)B殖效益[1]。在全面“禁抗”后，具有保健、促生長(zhǎng)功效的微生態(tài)添加劑已展現(xiàn)出良好的“替抗”效果與應(yīng)用前景[2-3]。將酵母菌、酵母培養(yǎng)產(chǎn)物添加于飼料中，能明顯提升肉兔消化道健康水平與免疫機(jī)能。酵母菌體蛋白是動(dòng)物不可或缺的營養(yǎng)成分，可改善腸道營養(yǎng)平衡性能，提高生產(chǎn)性能[4-5]。芽孢桿菌在動(dòng)物腸道內(nèi)增殖成為優(yōu)勢(shì)菌群，可抑制病源菌的繁殖；芽孢桿菌產(chǎn)生的多種消化酶、維生素、氨基酸及生長(zhǎng)刺激因子能直接達(dá)到促生長(zhǎng)和提高飼料利用效率的目的。無論是單一還是多個(gè)菌種的芽孢桿菌，在疾病預(yù)防、促生長(zhǎng)方面均有較多的研究報(bào)道[6-9]。

微生態(tài)制劑作為肉兔飼料添加劑的研究與應(yīng)用，以單一或復(fù)合型芽孢桿菌制劑報(bào)道最多。有關(guān)酵母菌的研究多集中在酵母培養(yǎng)產(chǎn)物、兔腸道分離活酵母的應(yīng)用試驗(yàn)。外源性釀酒酵母可促進(jìn)消化，價(jià)格低廉，但與枯草芽孢桿菌組合的研究未見報(bào)道。本研究以釀酒酵母+枯草芽孢桿菌組合微生態(tài)制劑為試驗(yàn)材料，通過飼養(yǎng)試驗(yàn)，評(píng)價(jià)不同劑量的微生態(tài)制劑對(duì)斷奶新西蘭幼兔的生長(zhǎng)性能、腸道健康的影響，旨在為開發(fā)此類微生態(tài)高效組合添加劑提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

復(fù)合微生態(tài)制劑由浙江艾杰斯生物科技有限公司提供，含釀酒酵母(活細(xì)胞數(shù)≥0.2億·g-1)和枯草芽孢桿菌(桿菌數(shù)≥0.1億·g-1)，載體為蒙脫石。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物分組與管理

選取30日齡斷奶、健康、體重基本一致的新西蘭肉兔96只，公母各半，作為飼養(yǎng)試驗(yàn)兔。隨機(jī)選取公母兔各12只為1個(gè)組，共4個(gè)組，即試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和空白對(duì)照組。每只試驗(yàn)兔在不銹鋼籠內(nèi)獨(dú)立飼養(yǎng)，標(biāo)注編號(hào)。試驗(yàn)在半封閉式兔舍進(jìn)行，全程飼喂顆粒飼料，自由采食、飲水。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)和日糧配制

采用單因素飼養(yǎng)試驗(yàn)設(shè)計(jì)。每組24只兔，每只兔為1個(gè)重復(fù)。對(duì)照組投喂基礎(chǔ)日糧，其組成為玉米20%、麥麩15%、豆粕12%、苜蓿草粉30%、麥芽根17%、石粉1.5%、食鹽0.5%、復(fù)合預(yù)混料4.0%(復(fù)合預(yù)混料為每千克基礎(chǔ)飼料提供VA7 500 IU、VD33 000 IU、VE15 IU、銅3.0 mg、鐵80 mg、錳50 mg、鋅60 mg、賴氨酸1.20 g)，主要營養(yǎng)指標(biāo)為消化能10.86%、粗蛋白質(zhì)17.65%、粗纖維15.05%、粗脂肪3.75%、鈣1.86%、總磷0.65%、賴氨酸0.88%。

試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上依次添加0.10%、0.15%、0.20%的復(fù)合微生態(tài)制劑，各組日糧均制成顆粒料。試驗(yàn)設(shè)預(yù)試期5 d，正式試驗(yàn)期30 d。

1.4 指標(biāo)測(cè)試

增重、采食量。在正式試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)，分別對(duì)兔子逐一空腹稱重，記錄試驗(yàn)期內(nèi)每只兔子的實(shí)際采食量，計(jì)算日增重、日采食量與全程料重比。

腹瀉、死亡數(shù)。每日觀察并記錄發(fā)病和死亡情況。腹瀉判定規(guī)則為每天早上定時(shí)觀察1次，糞便明顯變稀的個(gè)體記錄為腹瀉1次，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，統(tǒng)計(jì)每組總腹瀉次數(shù)。

免疫指標(biāo)。飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每組選擇12只試驗(yàn)兔(公母各6只)，空腹采心臟血4 mL，待血液自然析出血清，分裝后保存于-20 ℃冰箱，用于分析免疫球蛋白指標(biāo)；血清IgA、IgG、IgM的測(cè)定采用ELISA雙抗體夾心法。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示；采用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行計(jì)數(shù)指標(biāo)值比較。組間差異顯著性檢驗(yàn)采用單因素方差分析(one-way ANOVA)和LSD法多重比較(P<0.05)。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)新西蘭肉兔生長(zhǎng)性能影響

由表1可見，各組試驗(yàn)初始體重一致，組間無差異；期末試驗(yàn)組體重均高于對(duì)照組，其中，試驗(yàn)Ⅲ組最高，顯著高于其他處理，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ組高于對(duì)照，但差異不顯著。試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組的日增重分別比對(duì)照組提高5.9%、3.8%、14.2%，差異顯著性同末重。試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組料重比分別比對(duì)照組下降3.5%、3.7%、7.2%，處理間差異不顯著。綜上可知，3個(gè)劑量的微生態(tài)制劑均能提高肉兔日增重、降低料重比，以0.2%微生態(tài)制處理最為顯著。

表1 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)新西蘭肉兔生產(chǎn)性能的影響

2.2 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)新西蘭肉兔腹瀉和死亡的影響

由表2可知，試驗(yàn)組的個(gè)體腹瀉發(fā)生率均顯著低于對(duì)照組，且試驗(yàn)Ⅲ組顯著低于Ⅰ和Ⅱ組，而試驗(yàn)Ⅰ和Ⅱ組間無顯著差異。試驗(yàn)組的死亡數(shù)均低于對(duì)照組，其中，Ⅲ組全程無死亡，Ⅰ、Ⅱ組死亡數(shù)均低于對(duì)照組，但與對(duì)照組差異顯著。結(jié)果表明，添加復(fù)合微生態(tài)后，幼兔死亡數(shù)下降趨勢(shì)較為明顯，3個(gè)添加量均明顯降低了幼兔的腹瀉發(fā)生率，其中高劑量組防腹瀉率效果最好，發(fā)生率比對(duì)照組低8.4百分點(diǎn)。

表2 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)新西蘭肉兔腹瀉和死亡的影響

2.3 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)新西蘭肉兔免疫球蛋白指標(biāo)的影響

由表3可知，各試驗(yàn)組血清IgG、IgA、IgM均較對(duì)照組有提高。其中，血清IgG值的各組間存在顯著差異，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別較對(duì)照組提高12.8%、14.4%、25.9%，Ⅲ組顯著高于Ⅰ和Ⅱ組；血清IgA值組間存在顯著差異，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別較對(duì)照組提高17.1%、8.6%、22.9%，Ⅲ組顯著高于Ⅱ組；血清IgM值組間存在顯著差異，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別較對(duì)照組提高34.2%、28.9%、50.0%，Ⅲ組顯著高于Ⅰ和Ⅱ組。

表3 試驗(yàn)兔血清免疫指標(biāo)

3 討論

3.1 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)新西蘭肉兔生長(zhǎng)性能、腸道健康的影響

研究表明，日糧中添加0.2%酵母培養(yǎng)物，能顯著提高獺兔平均日增重，降低料重比，提高主要營養(yǎng)物質(zhì)的表觀消化率[4]。由酵母菌、枯草芽孢桿菌、乳酸菌等組成的微生態(tài)制劑，活菌總數(shù)為0.67億·g-1的日糧，試驗(yàn)組家兔的3周增重較對(duì)照組提高63%[10]。日糧中添加貝萊斯芽孢桿菌1.0億·g-1，30 d試驗(yàn)期可使35日齡幼兔的日增重提高12.6%，飼料轉(zhuǎn)化效率提高13.1%；添加芽孢桿菌使試驗(yàn)兔腸道有益菌數(shù)量增加，其中酵母菌數(shù)量增加2.2倍[5]。有學(xué)者分離出兔腸道中的芽孢桿菌、酵母菌等制成內(nèi)源性微生物制劑，當(dāng)活菌用量為3.2億·g-1試驗(yàn)日糧時(shí)，試驗(yàn)兔期末體重明顯增加，料肉比下降，促生長(zhǎng)效果明顯優(yōu)于商品型菌制劑[6]。從上述文獻(xiàn)可以得出，單一酵母培養(yǎng)物、活酵母、芽孢桿菌及酵母+芽孢桿菌復(fù)合菌均能有效改善幼兔的生長(zhǎng)性能和飼料轉(zhuǎn)化率，這與本次試驗(yàn)研究結(jié)果一致。

本試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組試驗(yàn)日糧中活菌含量(2/3釀酒酵母+1/3枯草芽孢桿菌)分別為0.30億、0.45億、0.60億·g-1，低、中劑量組改善生長(zhǎng)性能的趨勢(shì)較明顯，而以高劑量組的效果最優(yōu)。但也有報(bào)道指出，枯草芽孢桿菌飼料添加量在200億～600億·g-1時(shí)能提高日增重，400億·g-1時(shí)則顯著降低料重比[7]。不同試驗(yàn)中，起作用的添加量間差異巨大，可能與試驗(yàn)菌種來源不同及菌制劑的生產(chǎn)工藝差別有關(guān)。

幼兔腹瀉發(fā)生率與增重、飼料轉(zhuǎn)化效率間呈強(qiáng)負(fù)相關(guān)性。幼兔消化道功能尚未發(fā)育完善，對(duì)飼料消化、吸收能力不足，而枯草芽孢桿菌、酵母能產(chǎn)生多種消化酶，有利于維護(hù)腸道健康[6-7]。其次，益生菌在腸道中定殖，成為優(yōu)勢(shì)菌群，有利于穩(wěn)定小腸pH值與腸黏膜形態(tài)，從而大幅降低引起腹瀉的大腸埃希氏菌等致病菌數(shù)量[8-9]。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組的死亡數(shù)均低于對(duì)照組，添加益生菌顯著降低試驗(yàn)組幼兔的腹瀉頻次，與文獻(xiàn)[3,6,10]得出的結(jié)果一致。由此推測(cè)，枯草芽孢桿菌、酵母組合通過減少腹瀉發(fā)生率從而實(shí)現(xiàn)日增重與飼料轉(zhuǎn)化率的提升。

3.2 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)新西蘭肉兔血清免疫指標(biāo)的影響

血清免疫球蛋白在體液免疫過程中發(fā)揮重要作用。在所有血清型免疫球蛋白中，通常IgG含量最高，在抗菌、抗病毒中發(fā)揮著重要作用。但動(dòng)物免疫系統(tǒng)始終處于動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)過程，該系統(tǒng)的總體機(jī)能狀態(tài)不穩(wěn)定，當(dāng)免疫系統(tǒng)受到一些病原微生物感染后，才引起免疫指標(biāo)的變化。王衛(wèi)正等[4]報(bào)道，酵母培養(yǎng)物可不同程度提高試驗(yàn)獺兔的血清IgG、IgA、IgM濃度及免疫器官重，但添加劑量與抗體提升幅度并不完全一致。薛云等[7]報(bào)道，加入枯草芽孢桿菌制劑后，試驗(yàn)兔血清IgA、IgG顯著高于對(duì)照組，胸腺重隨之增高。任永清等[8]報(bào)道，添加復(fù)合芽孢桿菌能顯著提高試驗(yàn)肉兔血清IgM、腸黏膜分泌型IgA含量。飼喂芽孢桿菌0.06億·g-1日糧，第4周起血清IgA、IgG顯著高于對(duì)照組。飼喂0.1億·g-1組兔在5周起血清IgM顯著增加，其規(guī)律與生長(zhǎng)性能結(jié)果相似[11]。多數(shù)文獻(xiàn)得到脾臟、胸腺等免疫器官指數(shù)與血清免疫球蛋白濃度間具有較高的一致性。本試驗(yàn)中，IgG、IgA、IgM濃度有不同程度的提高，由此推測(cè)，酵母+芽孢桿菌分泌出某些活性物質(zhì)，刺激免疫系統(tǒng)的快速成熟并提高機(jī)體免疫功能，是幼兔快速提升的重要原因。

4 小結(jié)

日糧中添加0.10%～0.20%的酵母+枯草芽孢桿菌復(fù)合微生態(tài)制劑，能提高斷奶幼兔的生長(zhǎng)速度、飼料轉(zhuǎn)化率，降低死亡數(shù)量與腹瀉發(fā)生率，顯著提高血清中IgG、IgA、IgM等動(dòng)物免疫力指標(biāo)值。微生態(tài)制劑的功效隨著添加量增加而增強(qiáng)，本試驗(yàn)條件下，以0.2%的酵母+枯草芽孢桿菌復(fù)合微生態(tài)制劑效果最優(yōu)。