黃 召，施 璐，凌智群

(江漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，湖北 武漢 430056)

隨著藥物機(jī)制的深入研究，為地平類降壓藥物的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)提供了參考[1]。尼群地平(nitrendipine，NTD)作為第二代二氫吡啶類藥物，體內(nèi)半衰期及藥效持續(xù)時(shí)間均較第一代二氫吡啶類藥物顯著延長(zhǎng)，對(duì)外周血管選擇性約為硝苯地平的10倍，且首過(guò)作用明顯。但因二氫吡啶類藥物脂溶性強(qiáng)，故其生物利用度仍較低。栓劑作為一種固體制劑，采用的是非口服給藥方式，其特殊的給藥形式不僅能夠使藥物避免顯著地肝腸首關(guān)效應(yīng)，提高進(jìn)入體循環(huán)的有效藥量，而且能夠有效避免藥物對(duì)胃黏膜的刺激性，降低藥物不良反應(yīng)發(fā)生率，增強(qiáng)治療效果。目前市場(chǎng)上NTD的口服制劑較為常見(jiàn)，但國(guó)內(nèi)外少有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，故NTD栓劑的開(kāi)發(fā)具有較重要的研究?jī)r(jià)值。

1 儀器與試劑

1.1 儀 器

UV-1780雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，島津有限公司；分析天平；恒溫水浴鍋；超聲波清洗儀，昆山美美超聲儀器有限公司；氮吹儀。

1.2 藥品與試劑

尼群地平標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)于麥卡林試劑網(wǎng)，其它化學(xué)試劑均國(guó)產(chǎn)分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 含藥栓的制備

2.1.1 NTD-β-環(huán)糊精包合物的制備

避光條件下，精密稱取0.36 g NTD標(biāo)準(zhǔn)品置于三頸瓶中，加入20 mL無(wú)水乙醇，于50 ℃恒溫水浴攪拌至完全溶解。同時(shí)精密稱取β-環(huán)糊精2.27 g，再加入50 mL純化水，50 ℃下攪拌制得β-環(huán)糊精水溶液。將β-環(huán)糊精水溶液緩慢逐滴加入到NTD標(biāo)準(zhǔn)品的醇溶液中，50 ℃恒溫?cái)嚢璺磻?yīng)2 h，置于4 ℃冰箱冷藏室冷卻過(guò)夜24 h，得到黃色混懸液，抽濾洗去未被包和的NTD。將所得沉淀物放入烘箱，40 ℃避光干燥4 h，得略顯淺黃色的細(xì)粉。稱重、研磨后過(guò)100目篩，避光干燥條件下儲(chǔ)存。

2.1.2 甘油明膠含藥栓的制備

精密稱取6 g明膠，充分浸脹30 min，于60 ℃水浴中緩慢加入21 g甘油，制成30 g甘油明膠基質(zhì)(水:明膠:甘油=1:2:7)，備用。將360 mg NTD-β-環(huán)糊精包合物與0.15 g泊洛沙姆/十二烷基硫酸鈉(SDS)/吐溫80混合均勻后，攪拌下加入到融化的甘油明膠基質(zhì)中，混合均勻。趁熱注入到涂抹有少量液狀石蠟的栓模中，放入冰箱冷藏室，于3 ℃條件下冷卻 15 min后，刮去多余部分，脫模，再用吸水紙吸干栓劑表面的水分，即得。

2.1.3 混合型脂肪酸甘油酯含藥栓的制備

精密稱取24 g混合型脂肪酸甘油酯，于60 ℃水浴中得到熔融態(tài)混合型脂肪酸甘油酯基質(zhì)。將360 mg NTD-β-環(huán)糊精包合物與0.15 g泊洛沙姆/SDS/吐溫80混合均勻后，攪拌下加入到融化的混合型脂肪酸甘油酯基質(zhì)中，混合均勻。趁熱注入到涂抹有少量潤(rùn)滑劑的栓模中，放入冰箱冷藏室，于3 ℃條件下冷卻15 min后，刮去多余部分，脫模，再用吸水紙吸干栓劑表面的水分，即得。

2.2 空白栓的制備

2.2.1 甘油明膠空白栓的制備

方法同上述混合型脂肪酸甘油酯含藥栓的制備，除去添加NTD步驟。

2.2.2 混合型脂肪酸甘油酯空白栓的制備

方法同上述甘油明膠含藥栓的制備，除去添加NTD步驟。

2.3 栓劑的質(zhì)量控制

2.3.1 外觀

比較觀察由不同處方制備的NTD栓劑顏色、透明度及表面光滑度。見(jiàn)表1。

表1 甘油明膠栓和混合型脂肪酸甘油酯栓外觀評(píng)價(jià)結(jié)果Table 1 Appearance evaluation results of glycerol gelatin suppository and mixed fatty acid glyceride suppository

2.3.2 重量差異限度

精密稱定供試品10粒總質(zhì)量，求得平均粒重，再分別精密稱定每粒栓劑的質(zhì)量，根據(jù)公式(1)計(jì)算出每粒栓劑的重量差異限度，檢查結(jié)果顯示均為合格。

(1)

2.3.3 融變時(shí)限檢查

取3粒相同的供試品，于室溫下放置1 h后，將其分別放在融變時(shí)限儀的3個(gè)金屬套筒中固定。待水浴溫度恒定為(37.0±0.5) ℃后，將裝有栓劑的金屬套筒浸入4.5 L pH 7.4磷酸鹽緩沖液中，觀察不同NTD栓劑在溶出介質(zhì)中的融變情況，計(jì)時(shí)并真實(shí)記錄實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2和表3。

表2 甘油明膠栓融變時(shí)限檢查結(jié)果Table 2 Inspection results of melting time limit of glycerol gelatin suppository

表3 混合型脂肪酸甘油酯栓融變時(shí)限檢查結(jié)果Table 3 Inspection results of melting time limit of mixed fatty acid glyceride suppository

2.3.4 溶出度的測(cè)定

取6種含藥栓和6種空白栓各六粒，分別投入六個(gè)裝有200 mL pH 7.4磷酸鹽緩沖液的燒杯中，控制水浴溫度保持在(37±1) ℃，攪拌條件下記時(shí)，分別于1、2、3、4、5、6、7、8 h時(shí)用注射器吸取溶出液5 mL，同時(shí)補(bǔ)加5 mL同溫的pH 7.4磷酸鹽緩沖液，保證溶出介質(zhì)總體積不變。待取樣完畢后，使用氮吹儀干燥樣品溶液，并加入無(wú)水乙醇5 mL，充分振蕩溶解后，用水系微孔濾膜過(guò)濾，得到6種空白栓醇溶液和6種含藥栓醇溶液。然后以空白栓醇溶液作為對(duì)照品，記錄波長(zhǎng)為 237 nm處相應(yīng)含藥栓醇溶液的吸光度，計(jì)算出NTD栓劑中主藥在不同時(shí)間內(nèi)的累積溶出度，并通過(guò)比較甘油明膠栓和混合型脂肪酸甘油酯栓中NTD在相同時(shí)間內(nèi)累積溶出度的大小，來(lái)確定NTD栓劑的適宜基質(zhì)及最佳表面活性劑。溶出度實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果顯示：在添加同種、同量表面活性劑的條件下，甘油明膠栓中NTD的累積溶出度(8 h內(nèi))均明顯高于混合型脂肪酸甘油酯栓，說(shuō)明以甘油明膠作為基質(zhì)制備栓劑，在pH 7.4磷酸鹽緩沖液中，更有益于NTD栓劑中主藥的釋放與溶出；在三種甘油明膠栓中，以泊洛沙姆作為表面活性劑時(shí)，NTD栓劑中主藥在8 h內(nèi)的累計(jì)溶出度最高，高達(dá)79%，明顯高于含藥SDS栓和含藥吐溫80栓。

2.4 單枚栓劑含藥量的測(cè)定

2.4.1 NTD標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取NTD標(biāo)準(zhǔn)品5 mg， 100 mL容量瓶無(wú)水乙醇定容，即得NTD標(biāo)準(zhǔn)品母液。精密移取1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、 6 mL及8 mL的尼群地平標(biāo)準(zhǔn)品母液置于10 mL的容量瓶中并定容，制得系列NTD標(biāo)準(zhǔn)品無(wú)水乙醇溶液。以無(wú)水乙醇為空白，測(cè)定237 nm波長(zhǎng)處不同濃度NTD標(biāo)準(zhǔn)品醇溶液的吸光度值，并記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表4。以吸光度A為縱坐標(biāo)，以濃度C為橫坐標(biāo)，繪制出NTD標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)線性回歸后得回歸方程： A=0.0569C+0.0895(R2=0.9997)。結(jié)果表明， NTD標(biāo)準(zhǔn)品無(wú)水乙醇溶液濃度在5～40 μg/mL范圍內(nèi)，線性相關(guān)良好，即符合朗伯比爾定律。

表4 尼群地平標(biāo)準(zhǔn)品醇溶液的紫外測(cè)定結(jié)果Table 4 UV determination results of NTD standard alcohol solution

2.4.2 空白栓醇溶液的制備

精密稱定6?？瞻姿傎|(zhì)量，然后全部切碎，混合均勻，精密稱取其中的1 g，100 mL容量瓶中充分溶解后，用無(wú)水乙醇定容，制得空白栓醇溶液。

2.4.3 含藥栓醇溶液的制備

避光實(shí)驗(yàn)條件下，精密稱定含藥栓6?？傎|(zhì)量，同上操作制得含藥栓醇溶液。

采用紫外分光光度法[2-6]，測(cè)定含藥栓醇溶液的吸光度。根據(jù)NTD標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算單枚栓劑平均藥物含量位5.4253 mg。

2.4.4 回收率的測(cè)定

精密稱取NTD標(biāo)準(zhǔn)品10 mg，按栓劑處方配比加入一定量的基質(zhì)和表面活性劑，配制成100μg/ml NTD母液。分別精密量取2 mL、2.5 mL和3 mL濾液置于10 ml的容量瓶中， 配制高、中、低三種濃度的NTD溶液各三份作為供試品溶液；另用移液管移取2.7 ml過(guò)濾后的NTD母液置于10 ml的容量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋得對(duì)照品溶液。使用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，記錄波長(zhǎng)237 nm處NTD溶液的吸光度，計(jì)算平均回收率為101.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.89%。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表5。

表5 回收率實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果Table 5 Experimental results of recovery

3 結(jié) 論

NTD對(duì)外周血管的選擇性較冠脈高很多，臨床上多用于治療老年人收縮期高血壓，也用于治療原發(fā)性高血壓、繼發(fā)性高血壓及冠心病等疾病。作為脂溶性化合物，易透過(guò)細(xì)胞膜，但在胃腸液中溶解度小，半衰期較短，常用口服小劑量給藥方式，導(dǎo)致患者血壓波動(dòng)大，用藥頻繁，依從性較差，并且顯著的肝腸首過(guò)消除還會(huì)影響藥物的體內(nèi)溶出度，限制機(jī)體對(duì)藥物的吸收，從而使藥物療效降低。Mengran Guo等[1]首次采用濕介質(zhì)研磨法制備NTD納米晶。其溶出度試驗(yàn)表明，在0.3% SDS溶出介質(zhì)中，NTD納米晶的累積溶出度(20 min內(nèi))大于80%遠(yuǎn)高于物理混合物和市售片劑，反映出制備NTD納米晶是一種提高藥物溶解度和釋放度的有效方法。

上述實(shí)驗(yàn)顯示，使用甘油明膠基質(zhì)(水:明膠:甘油=1:2:7)和泊洛沙姆制備出的NTD栓劑，經(jīng)嚴(yán)格質(zhì)量控制發(fā)現(xiàn)，其在外觀、融變時(shí)限和重量差異限度三方面均符合質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，并且其在8 h內(nèi)的累積溶出度最高，高達(dá)79%。此外，采用紫外分光光度法測(cè)定出了單枚栓劑的平均含藥量約為 5.4253 mg，平均回收率為101.0%以及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.89%。

總之，NTD栓劑的制備工藝簡(jiǎn)單，操作方便，質(zhì)量評(píng)價(jià)合格，為進(jìn)一步對(duì)NTD栓劑的制備及質(zhì)量控制提供了初步的數(shù)據(jù)依據(jù)和實(shí)驗(yàn)參考。