汪燕昌，簡(jiǎn)瑩娜，韓青忠，萬瑪吉，李劍，馬利青

(1.青海省祁連縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,祁連 810499；2.青海大學(xué)畜牧獸醫(yī)科學(xué)院,西寧 810016)

2021年5月，祁連縣默勒鎮(zhèn)某養(yǎng)殖戶羊群中的羔羊(2月齡左右)發(fā)生死亡，死前咳嗽，體溫升高。同期羔羊間斷性發(fā)病死亡，陸續(xù)出現(xiàn)臥地不起、呻吟、腹瀉，有時(shí)出現(xiàn)搖頭等神經(jīng)癥狀。送檢至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行臨床剖檢，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)和分子生物學(xué)鑒定，診斷為D型產(chǎn)氣莢膜梭菌合并感染綿羊肺炎支原體，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 發(fā)病及癥狀

祁連縣默勒鎮(zhèn)瓦日尕村某養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)的2月齡左右的羔羊不時(shí)發(fā)病死亡，截至送檢病料時(shí)已經(jīng)發(fā)病死亡3只。發(fā)病羔羊臥地不起，眼結(jié)膜蒼白，呻吟，腹式呼吸，腹瀉，糞便呈暗黑色，混有黏液或血液，有時(shí)出現(xiàn)搖頭、轉(zhuǎn)圈等神經(jīng)癥狀，死前咳嗽，體溫升高。

2 剖檢癥狀

病死羊體表有少量的羊虱蠅，剖檢發(fā)現(xiàn)心包積液、心包膜有出血斑點(diǎn)，心臟冠狀溝脂肪上有少量出血點(diǎn)；肝臟腫大、質(zhì)基脆、土黃色，肝臟背側(cè)有不規(guī)則的病灶；脾正常；肺臟腫大、實(shí)變，靠近胸肋骨處有化膿灶，肺小管切面有白色膿汁流出；胸腔積液；腎臟柔軟、土黃色；腹腔積液；腸膨氣，部分腸段潮紅，腸淋稍腫大；瘤胃中充滿積食，胃黏膜脫落(瓣胃，瘤胃)；十二指腸球狀部稍腫，有一處鮮紅的出血斑。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 涂片鏡檢

取病死羊的心、肝、脾、肺、腎及腸淋巴等組織涂片，瑞特氏染色，鏡檢肝臟涂片中有梭狀大桿菌；肺組織涂片鏡檢有小桿菌；腸系膜淋巴結(jié)涂片鏡檢有大桿菌。

3.2 細(xì)菌的分離培養(yǎng)

將上述無菌采集的心、肝、脾、肺、腎、腸淋巴及小腸內(nèi)容物等組織病料依次接種至普通肉湯、鮮血平板和厭氣肉肝湯培養(yǎng)基上，經(jīng)24 h培養(yǎng)后，接種腸內(nèi)容物的鮮血平板培養(yǎng)基上有圓形、表面突起、呈灰白色半透明狀菌落，且在菌落周圍形成雙層溶血環(huán)，菌落染色鏡檢為革蘭氏陽(yáng)性大桿菌，該菌能在厭氣肉肝湯中生長(zhǎng)、產(chǎn)氣。

3.3 動(dòng)物試驗(yàn)

取病死羊小腸水樣內(nèi)容物，用1倍量的滅菌生理鹽水進(jìn)行稀釋，3 000 r離心10 min，取上清液。選取2只健康15 g左右的小鼠，靜脈注射上清液0.2 mL/只，對(duì)照組小鼠2只，均注射生理鹽水0.2 mL/只，試驗(yàn)組小鼠經(jīng)過24 h左右死亡，對(duì)照小鼠正常，說明有毒素致實(shí)驗(yàn)組小鼠死亡。

3.4 PCR檢測(cè)

將上述無菌采集的心、肝、脾、肺、腎、腸淋巴、小腸內(nèi)容物等組織病料剪碎后進(jìn)行DNA提取，經(jīng)PCR檢測(cè)，在腸內(nèi)容物擴(kuò)增出產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素和ε毒素，為D型產(chǎn)氣莢膜梭菌(見圖1)。在肺組織中檢測(cè)到綿羊肺炎支原體(見圖2)。

圖1 腸內(nèi)容物產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素PCR檢測(cè)結(jié)果圖2 綿羊肺炎支原體PCR檢測(cè)結(jié)果

4 結(jié)論

經(jīng)臨床觀察、剖檢變化、細(xì)菌分離培養(yǎng)、腸內(nèi)容物毒素檢查及PCR檢測(cè)，綜合判定該病例是由D型產(chǎn)氣莢膜梭菌和綿羊肺炎支原體合并感染引起的死亡。

5 防治

5.1羊腸毒血癥也叫做軟腎病，是由D型產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的一種急性非接觸性傳染病，具有非常高的死亡率，往往給養(yǎng)殖戶造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[1]。D型產(chǎn)氣莢膜梭菌通常在土壤、動(dòng)物腸道和污水中存在，病羊和帶菌羊是腸毒血癥的傳染來源，腸毒血癥常見經(jīng)口感染，綿羊?qū)υ摬》浅Ｒ赘?，呈散發(fā)狀態(tài)[2]。

5.2綿羊傳染性胸膜肺炎又稱綿羊支原體性肺炎，是一種由綿羊肺炎支原體(Mycoplasmaovipneumoniae,MO)引發(fā)的高度接觸性傳染病，俗名“爛肺病”。該病呈現(xiàn)地方性流行特點(diǎn)，可經(jīng)空氣傳播，羊只經(jīng)呼吸道感染，具有較強(qiáng)的接觸傳染性特性[3-5]。

5.3發(fā)病時(shí)應(yīng)立即隔離病羊，對(duì)羊舍內(nèi)外環(huán)境進(jìn)行消毒，及時(shí)清理糞便等排泄物，病死羊只在指定地點(diǎn)進(jìn)行無害化處理。禁止飼喂帶冰碴、霉變和變質(zhì)的草料，增加營(yíng)養(yǎng)以提高羊只的抵抗力[6]。

5.4確診后，對(duì)發(fā)病羊群及時(shí)免疫接種羊“三聯(lián)四防”疫苗[7，8]。該地區(qū)以前是羊腸毒血癥的老疫區(qū)，經(jīng)多年防疫，現(xiàn)已基本控制羊腸毒血癥在該鄉(xiāng)鎮(zhèn)的流行[9]。此次發(fā)現(xiàn)病例給當(dāng)?shù)孬F醫(yī)工作者敲響了警鐘，羊病的防治不可掉以輕心，尤其在老疫區(qū)。

5.5對(duì)于伴有咳嗽的羊只，需進(jìn)行隔離飼養(yǎng)，改善飼養(yǎng)環(huán)境，確保舍內(nèi)空氣通暢，有條件的及時(shí)注射綿羊傳染性胸膜肺炎疫苗。發(fā)病早期可以用30%的氟苯尼考注射液，按0.2 mL/kg體重的劑量注射，1次/d，3 d為1個(gè)療程。對(duì)高熱不退的病羊，可用30%安鈉咖注射液10 mL肌肉注射，同時(shí)用10%的維生素C注射液10 mL、維生素B1注射液2 mL、5%葡萄糖生理鹽水注射液200 mL，混合后靜脈注射補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)，1次/d，3 d為1個(gè)療程[3]。另外可在飼料中添加麻杏石甘散(主要成分為麻黃、苦杏仁、石膏、甘草)，飲水中添加電解多維。堅(jiān)持用藥治療1周后，病羊精神狀態(tài)、食欲恢復(fù)正常，無新病例出現(xiàn)，則肺炎疫情得到控制[10]。