鄧 卉，鄒成義，汪林書，屈 東，李 斌，余 丹，倪青松，劉進遠，張 敏

（四川省畜牧科學研究院，動物遺傳育種四川省重點實驗室，四川成都 610066）

目前，豆粕是我國畜禽日糧的主要植物蛋白源，玉米-豆粕型日糧已被生產(chǎn)上廣泛采用。但因豆粕主要依賴進口且價格高，正在成為制約我國飼料工業(yè)和養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的瓶頸。因此，豆粕替代或減量使用技術(shù)正在成為行業(yè)的研究熱點。菜籽粕含粗蛋白質(zhì)35%～41%，除賴氨酸含量低于豆粕外，其余氨基酸含量與豆粕近似。由于菜籽粕含有硫甙等抗營養(yǎng)因子，會引起單胃動物適口性變差、養(yǎng)分利用率下降、慢性中毒等，在畜禽日糧中的使用非常有限。

研究表明，微生物發(fā)酵或膨化等預消化處理工藝技術(shù)可提高菜籽粕的飼用品質(zhì)。倪光遠報道，發(fā)酵處理可提高蛋菜籽粕粗蛋白質(zhì)、多肽的含量及體外消化率。胡永娜等研究表明，菜籽粕發(fā)酵后噁唑烷硫酮（OZT）的降解率達99.99%。Chiou 等發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵能大幅度改善菜籽粕中纖維素消化率。田珍珍等研究表明，膨化加工可嚴重破壞菜籽粕中的異硫氰酸酯（ITC）和噁唑烷硫酮（OZT）。以上研究表明，無論是微生物發(fā)酵還是膨化加工均可改善菜籽粕的飼用品質(zhì)。單一處理工藝發(fā)揮作用程度有限，而2 種及2 種以上的聯(lián)用工藝是否可進一步提升菜籽粕飼用品質(zhì)，目前鮮見報道。

本試驗采用先發(fā)酵、后膨化的工藝制備膨化發(fā)酵菜籽粕，在日糧中添加不同水平膨化發(fā)酵菜籽粕對崇仁麻雞生長性能、血清生化及抗氧化指標的影響，評價膨化發(fā)酵菜籽粕在肉雞日糧中的飼喂效果。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 菜籽粕經(jīng)固態(tài)混菌發(fā)酵工藝處理后，再經(jīng)115℃濕法擠壓膨化進行二次處理，2 種工藝聯(lián)用生產(chǎn)出膨化發(fā)酵菜籽粕，備用。發(fā)酵菜籽粕主成分：水分9.50%；干物質(zhì)（DM）基礎(chǔ)條件下，粗蛋白質(zhì)38.82%、賴氨酸1.03%、酸溶蛋白3.83%、酸性洗滌纖維（ADF）30.50%、中性洗滌纖維（NDF）38.90%、異硫氰酸酯（ITC）34.25%、噁唑烷硫酮（OZT）0.11%。

1.2 試驗設(shè)計及日糧 采用單因子隨機區(qū)組試驗設(shè)計，選擇60 日齡、平均體重700 g 左右的崇仁麻公雞600 只，隨機分為5 組，每組5 個重復，每個重復24 只雞。對照組飼喂玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧，試驗組分別在日糧中添加2.5%、5.0%、7.5%、10.0% 膨化發(fā)酵菜籽粕。參照《黃羽肉雞營養(yǎng)需要量》（NY/T 3645-2020）及崇仁麻肉雞近期營養(yǎng)研究文獻，確定營養(yǎng)需要和配制基礎(chǔ)日糧。試驗組選用不同比例膨化發(fā)酵菜籽粕等氮替代基礎(chǔ)日糧中的豆粕，日糧組成及營養(yǎng)成分見表1。試驗期56 d。

表1 日糧組成及營養(yǎng)成分（風干基礎(chǔ)）

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗于2020 年開展，試雞飼養(yǎng)在全新的3 層階梯式金屬籠里，自由采食及飲水，按肉雞常規(guī)免疫程序免疫和飼養(yǎng)管理，各處理組飼養(yǎng)管理條件保持一致。

1.4 測定指標與方法

1.4.1 生長性能 試驗開始和結(jié)束時，試驗雞禁食12 h 后稱重，以重復為單位記錄初始重和末重，并統(tǒng)計試驗全期耗料量。計算雞的平均日采食量（ADFI）和平均日增重（ADG），根據(jù)ADFI 和ADG 計算耗料增重比（F/G）。

1.4.2 血清生化 試驗結(jié)束時，每重復按平均體重選取1 只雞翅靜脈采血8 mL 置于采血管中，室溫靜置4 h 后，3 000 r/min 離心制備血清，待測相關(guān)指標。血清中堿性磷酸酶（ALP）采用AMP 法測定，谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）采用丙氨酸底物法測定，谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）采用天門冬氨酸底物法測定，總蛋白（TP）采用雙縮脲法測定，尿素氮（BUN）采用尿素酶-谷氨酸脫氫酶法測定。測定儀器選用日立（HITACHI）全自動生化分析儀（型號：3100）。

1.4.3 血清抗氧化指標 血清中總超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、過氧化氫酶（CAT）活性、總抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）含量采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定。ELISA 試劑盒均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。

1.5 統(tǒng)計分析 運用SPSS17.0 軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析（One-Way ANOVA）和Duncan's 法多重比較，并進行線性和二次曲線回歸分析，以<0.05 和<0.01作為差異顯著和極顯著的判斷標準，試驗數(shù)據(jù)采用平均值±標準差表示。

2 結(jié)果

2.1 膨化發(fā)酵菜籽粕對肉雞生長性能的影響 由表2 可知，2.5%、5.0%、7.5%、10.0% 膨化發(fā)酵菜籽粕組雞只末重、耗料量、ADG、ADFI 和F/G 與對照組均無顯著差異；膨化發(fā)酵菜籽粕添加水平與F/G 存在二次回歸關(guān)系（<0.05），F(xiàn)/G 隨添加水平升高呈先降低后上升趨勢，以5.0%添加量最低（圖1）。

圖1 膨化發(fā)酵菜籽粕添加水平與肉雞F/G 的二次曲線回歸關(guān)系

表2 膨化發(fā)酵菜籽粕對肉雞生長性能的影響

2.2 膨化發(fā)酵菜籽粕對肉雞血清生化指標的影響 由表3 可知，各組血清ALP、ALT、TP 和BUN 含量均無顯著差異，5.0%和10.0%膨化發(fā)酵菜籽粕組AST 含量高于對照組（<0.05）；膨化發(fā)酵菜籽粕添加水平與血清AST 含量存在線性回歸關(guān)系（<0.05），AST 含量隨添加水平升高而升高（圖2）。

表3 膨化發(fā)酵菜籽粕對肉雞血清生化指標的影響

圖2 膨化發(fā)酵菜籽粕添加水平與肉雞血清AST 含量的線性回歸關(guān)系

2.3 膨化發(fā)酵菜籽粕對肉雞血清抗氧化指標的影響 由表4 可知，各組血清CAT、T-SOD、GSH-Px 活性均無顯著差異；2.5%、7.5%、10.0%膨化發(fā)酵菜籽粕組T-AOC含量低于對照組（<0.05），5.0% 膨化發(fā)酵菜籽粕組T-AOC 含量與對照組差異不顯著；7.5%、10.0% 膨化發(fā)酵菜籽粕組MDA 含量高于對照組（<0.01），而2.5%、5.0% 膨化發(fā)酵菜籽粕組MDA 含量與對照組差異不顯著；膨化發(fā)酵菜籽粕添加水平與血清CAT 活性存在二次回歸關(guān)系（<0.05），CAT 活性隨添加水平升高呈先降低后升高趨勢，與血清MDA 含量存在線性回歸關(guān)系（<0.05），MDA 含量隨添加水平升高而升高（圖3 和圖4）。

圖3 膨化發(fā)酵菜籽粕添加水平與肉雞血清CAT 活性的二次曲線回歸關(guān)系

圖4 膨化發(fā)酵菜籽粕添加水平與肉雞血清MDA 含量的線性回歸關(guān)系

表4 膨化發(fā)酵菜籽粕對肉雞血清抗氧化指標的影響

3 討論

3.1 膨化發(fā)酵菜籽粕對肉雞生長性能的影響 吳東等研究結(jié)果表明，3.0%、6.0%、9.0% 發(fā)酵菜籽粕組肉雞ADG、ADFI 和F/G 與0.0% 組均無顯著差異。劉長松等研究表明，用發(fā)酵菜籽粕替代肉雞基礎(chǔ)日糧12.0%的豆粕對肉雞生長性能無顯著影響。陳昭琪等分別用發(fā)酵菜籽粕等氮替代肉雞基礎(chǔ)日糧中15.0%、35.0%、50.0%豆粕，結(jié)果表明發(fā)酵菜籽粕等氮替代飼料中15.0% 豆粕對肉雞生長性能無負面影響。本試驗結(jié)果顯示，2.5%、5.0%、7.5%、10.0% 膨化發(fā)酵菜籽粕組肉雞ADG、ADFI 和F/G 與對照組無顯著差異，這與選用單一發(fā)酵工藝改良菜籽粕在肉雞上的研究結(jié)果類似。此外，本試驗發(fā)現(xiàn)膨化發(fā)酵菜籽粕添加水平與F/G 存在顯著的二次回歸關(guān)系，F(xiàn)/G 隨添加水平升高呈先降低后上升趨勢，F(xiàn)/G 在5.0% 添加量時最低，這可能與高水平膨化發(fā)酵菜籽粕組日糧中的賴氨酸含量較低有關(guān)。賴氨酸是在肉雞日糧中繼蛋氨酸之后的第二限制性氨基酸，肉雞體蛋白中賴氨酸含量最高，約為含硫氨基酸和蘇氨酸含量的2 倍，說明肉雞代謝過程中體蛋白沉積對賴氨酸的需求很高。劉升軍等研究也發(fā)現(xiàn)，在日糧中0.70 %、0.85 %、1.00 %、1.15%賴氨酸水平下，肉雞F/G 隨賴氨酸水平升高呈逐漸降低的趨勢。

3.2 膨化發(fā)酵菜籽粕對肉雞血清生化指標的影響 TP 含量主要反映體內(nèi)蛋白質(zhì)合成或丟失情況；BUN 是蛋白質(zhì)、氨基酸代謝的終產(chǎn)物；ALT 和AST 主要參與體內(nèi)氨基酸的轉(zhuǎn)氨基作用，ALT 主要存在于肝細胞漿內(nèi)，AST 主要分布在心臟的肌肉中及肝細胞的線粒體內(nèi)。彭雙等研究結(jié)果表明，在生長豬日糧中采用10%發(fā)酵菜籽粕替代豆粕對血清TP、ALT、AST 和BUN 均無顯著影響；孫佩佩等研究結(jié)果表明，在生長豬日糧中添加8.4%、12.0%、16.0%發(fā)酵菜籽粕等氮替代豆粕，各組血清TP、BUN 均無顯著差異。本試驗中，膨化發(fā)酵菜籽粕添加水平與血清AST 含量存在顯著的線性回歸關(guān)系，AST 含量隨添加水平升高而升高，提示膨化發(fā)酵菜籽粕替代豆粕對肉雞心臟、肝臟等組織可能存在潛在影響。AST 是評價肝臟、心臟等組織病變的輔助指標，還應結(jié)合ALT 指標和組織細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)來明確膨化發(fā)酵菜籽粕是否對機體造成不良影響。本試驗結(jié)果表明，膨化發(fā)酵菜籽粕對ALT 指標不存在顯著影響，并且各膨化發(fā)酵菜籽粕組血清中ALP、TP、BUN、ALT 等多項指標含量均與對照組無顯著差異。

3.3 膨化發(fā)酵菜籽粕對肉雞血清抗氧化指標的影響 需氧生物細胞內(nèi)具有抗氧化防御系統(tǒng)，該系統(tǒng)的酶類（SOD、CAT、GSH-Px 等）可因體內(nèi)自由基化合物數(shù)量的增加而被誘導合成，它們的含量和活性會影響機體內(nèi)活性氧自由基的水平，該系統(tǒng)酶類活性升高說明其保護細胞免受自由基損傷的程度增強；T-AOC 是衡量機體抗氧化能力的綜合指標；MDA 作為脂質(zhì)過氧化作用的終產(chǎn)物，其含量能直接反映細胞膜被氧化的程度。本試驗中，雖然膨化發(fā)酵菜籽粕添加水平與血清MDA含量存在顯著的線性回歸關(guān)系，MDA 含量隨添加水平升高而升高，但2.5%和5.0%膨化發(fā)酵菜籽粕組MDA含量與對照組差異不顯著；CAT 活性隨添加水平增加而降低，但在5.0%添加水平后呈升高趨勢，這可能是體內(nèi)隨自由基化合物數(shù)量的增加而被誘導合成的原因；各組血清T-SOD、GSH-Px 活性均無顯著差異；5.0%膨化發(fā)酵菜籽粕組T-AOC 含量與對照組無顯著差異。由此說明，5.0% 膨化發(fā)酵菜籽粕等氮替代豆粕對肉雞血清抗氧化指標無負面影響。

4 結(jié)論

本試驗條件下，選用發(fā)酵-膨化聯(lián)用工藝對菜籽粕進行預消化處理，肉雞日糧中膨化發(fā)酵菜籽粕替代豆粕對肉雞生長性能、血清生化和抗氧化指標無顯著影響，以5.0%添加量效果最佳。