劉少娟 彭湘明 巫楚媚 賴艷榕 鄧露露 劉瀚榆

[摘要]目的探討血培養(yǎng)直接藥敏試驗對血流感染性疾病的臨床應(yīng)用價值。方法選取血培養(yǎng)陽性標(biāo)本55例，運(yùn)用 K-B 法進(jìn)行直接藥敏試驗和標(biāo)準(zhǔn)藥敏試驗，統(tǒng)計血培養(yǎng)革蘭陽性球菌和革蘭陰性桿菌7 h 和16 h 直接藥敏試驗結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)符合率并進(jìn)行比較。結(jié)果血培養(yǎng)革蘭陽性球菌7 h 和16 h 的直接藥敏試驗結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)符合率分別為78.261%和84.950%;血培養(yǎng)革蘭陰性桿菌7 h 和16 h 的直接藥敏試驗結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)符合率分別為81.066%和91.912%。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，直接藥敏試驗結(jié)果兩個時間段之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義，血培養(yǎng)革蘭陽性球菌和革蘭陰性桿菌16 h 藥敏試驗結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)符合率均高于7 h 藥敏試驗結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)符合率（ P <0.05）。結(jié)論血培養(yǎng)直接藥敏試驗耗時短，操作簡便，培養(yǎng)16 h 的結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)符合率較高，臨床醫(yī)生可參考血培養(yǎng)直接藥敏結(jié)果為早期血流感染患者選取合適的抗生素治療。

[關(guān)鍵詞]血培養(yǎng);直接藥敏試驗;標(biāo)準(zhǔn)藥敏試驗;紙片擴(kuò)散法;菌液濃度

[中圖分類號] R446.1? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A?? [文章編號]2095-0616（2022）09-0142-05

Study on the clinical value of direct drug susceptibility testing of blood cultures for blood-borne infectious diseases

LIU 1Shaojuan??? PENG? Xiangming ??WU? Chumei（ 2）?? LAI 1Yanrong??? DENG? Lulu（ 1）?? LIU 1Hanyu

1. Department of Clinical Laboratory， Guangzhou Red Cross Hospital， Guangdong， Guangzhou 510220， China;2. Foshan Nanhai District Fifth People's Hospital， Guangdong， Foshan 528231， China

[Abstract] Objective To investigate the clinical value of direct drug susceptibility testing of blood cultures for blood-borne infectious diseases. Methods A total of 55 blood culture positive samples were selected for direct drug susceptibility testing and standard drug susceptibility testing by the K-B method. The standard coincidence rates of 7-hour and 16-hour direct drug susceptibility testing results for blood culture gram- positive cocci and gram-negative bacilli were counted and compared. Results The standard coincidence rates of 7-hour and 16-hour direct drug susceptibility testing results for blood culture gram-positive cocci were 78.261% and 84.950%， respectively; the standard coincidence rates of 7-hour and 16-hour direct drug susceptibility testing results for blood culture gram-negative bacilli were 81.066% and 91.912%， respectively. Upon statistical processing， there was a statistically significant difference between the two periods in the results of direct drug susceptibility testing. The standard coincidence rate of 16-hour drug susceptibility testing results for blood culture gram-positive cocci and gram-negative bacilli was higher than that of 7-hour drug susceptibility testing results （P <0.05）. Conclusion The direct drug susceptibility testing of blood cultures is less time- consuming and easy to operate. The standard coincidence rate of the results for the 16-hour culture is relatively high. Clinicians can refer to the direct drug susceptibility testing results of blood cultures to select appropriate antibiotic therapy for patients with early blood stream infection.

[Key words] Blood culture; Direct drug susceptibility testing; Standard drug susceptibility testing; Disk diffusion method; Bacterial solution concentration

血流感染是極易引起機(jī)體中毒、感染及全身炎癥反應(yīng)的感染性疾病，起病急、病情兇險、病死率高[1-3]。對于嚴(yán)重的血流感染，早期明確病原菌并給予有效的抗菌藥物治療至關(guān)重要，可顯著降低患者病死率[4-5]。按照傳統(tǒng)的方法，血培養(yǎng)和藥敏試驗需要3～5 d 才得到結(jié)果以指導(dǎo)臨床用藥[6]。但是直接藥敏試驗用時較短，減少了細(xì)菌分離純化的步驟，縮短報告時間。本研究是通過計算直接藥敏試驗的標(biāo)準(zhǔn)符合率，比較兩個時間段標(biāo)準(zhǔn)符合率的差異，探討能否運(yùn)用直接藥敏試驗在較短的時間內(nèi)得出準(zhǔn)確的藥敏結(jié)果，為臨床提供用藥參考依據(jù)。

1.1儀器與試劑

BACTEC FX 全自動血培養(yǎng)儀（美國 BD 公司），比濁儀（美國 BD 公司），血培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)需氧瓶（美國 BD 公司，批號：9239513），厭氧瓶（美國 BD 公司，批號：9281699），血平板（江門凱林，批號：200320），營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（杭州濱和，批號：210302），MH 平板（廣州迪景，批號： MHP-200301D），藥敏紙片（英國 OXOID，批號：青霉素3184404，利奈唑胺2490427，四環(huán)素3230868，氯霉素3247319，萬古霉素3195888，哌拉西林/他唑巴坦3190129，替考拉寧2203197，利福平2942763，左氧氟沙星3195900，慶大霉素2972738，復(fù)方磺胺3270612，克林霉素2972599，紅霉素2866326，頭孢西丁3001688，頭孢哌酮2422371，頭孢呋辛3250444，頭孢唑林3195880，美洛培南3207311，亞胺培南2993932，阿米卡星2968034，頭孢吡肟3184467，頭孢他啶2961052，環(huán)丙沙星3242763，氨芐西林2499343，氨曲南2897396）。

1.2操作方法

1.2.1鏡檢血培養(yǎng)瓶報陽之后，首先將血瓶顛倒搖勻，然后用注射器抽取血瓶血液滴一滴在有磨砂玻璃玻片上，固定烘干之后進(jìn)行快速革蘭染色，在顯微鏡下觀察判斷為革蘭陽性球菌還是革蘭陰性桿菌。

1.2.2直接藥敏試驗直接用1 ml 注射器抽取血培養(yǎng)儀報警陽性瓶中的血液4滴（約50μl）滴在 MH 平板上，用無菌棉簽蘸取無菌生理鹽水后，再將血液均勻涂布在 MH 藥敏平板，用紙片分配器貼上相應(yīng)的革蘭陽性球菌或者革蘭陰性桿菌藥敏紙片，置35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，在培養(yǎng)后的6～8 h 和16～18 h 分別量取抑菌環(huán)直徑。

1.2.3標(biāo)準(zhǔn)藥敏試驗按照常規(guī)操作程序進(jìn)行，用血平板先進(jìn)行菌種的分離純化，培養(yǎng)后選取單個菌落配制為0.5個麥?zhǔn)蠞舛龋脽o菌棉簽蘸取菌液后，均勻涂布在 MH 藥敏平板上，并貼上相應(yīng)的革蘭陽性球菌或者革蘭陰性桿菌藥敏紙片，置35℃培養(yǎng)箱18～24 h 培養(yǎng)后量取抑菌環(huán)直徑。

1.2.4藥敏結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)[7] 按美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會標(biāo)準(zhǔn)，①標(biāo)準(zhǔn)符合率（CA）：標(biāo)準(zhǔn)藥敏和直接藥敏結(jié)果一致;②嚴(yán)重錯誤（VME）：標(biāo)準(zhǔn)藥敏耐藥 R，直接藥敏敏感 S;③重大錯誤（ME）：標(biāo)準(zhǔn)藥敏敏感 S，直接藥敏耐藥 R;④一般錯誤（MIE）：標(biāo)準(zhǔn)藥敏敏感 S 或耐藥 R，直接藥敏中度敏感 I，標(biāo)準(zhǔn)藥敏中度敏感 I，直接藥敏敏感 S 或耐藥 R。

采用 SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料用[n （%）]表示，采用χ2檢驗， P <0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1藥敏試驗中病原菌的種類

本實驗菌株均來自臨床患者，共55例，革蘭陽性球菌23例，革蘭陰性桿菌32例;其中革蘭陽性球菌分別為金黃色葡萄球菌18例、凝固酶陰性葡萄球菌5例;革蘭陰性桿菌分別為大腸埃希菌20例、肺炎克雷伯菌5例、銅綠假單胞菌7例。

2.2藥敏結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)符合率統(tǒng)計

血培養(yǎng)革蘭陽性球菌7 h 和16 h 直接藥敏試驗結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)符合率分別為78.261%、84.950%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.456， P <0.05），見表1～2，可認(rèn)為16 h 的直接藥敏試驗結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)符合率更高，結(jié)果更可靠;革蘭陰性桿菌7 h 和16 h 藥敏試驗結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)符合率分別為81.066%、91.912%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=27.380， P <0.001），見表3～4，可認(rèn)為16 h 的直接藥敏試驗結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)符合率更高，結(jié)果更可靠。

3討論

血流感染，是一種威脅生命的全身性感染疾病，用藥必須及時才能最大程度控制感染，所以，臨床醫(yī)生對血流感染往往首先考慮經(jīng)驗用藥。但隨著抗生素的不規(guī)范使用，細(xì)菌對抗菌藥物的耐藥性日趨嚴(yán)重，使感染性疾病的治療受到巨大挑戰(zhàn)[8-10]。為避免盲目使用抗生素，盡快有效控制感染，快速的直接藥敏試驗的應(yīng)用價值越來越多被研究。采用直接藥敏試驗?zāi)芸s短患者住院時間，降低罹患難辨梭菌相關(guān)腹瀉的風(fēng)險、降低患者平均病死率與感染相關(guān)病死率[11]。直接藥敏試驗跟傳統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)藥敏試驗相比，減少了第一步的菌種分離純化的步驟，但是由于血流感染多數(shù)情況下是單一菌種的感染，因此直接選用血培養(yǎng)瓶報警陽性后的血液進(jìn)行 K-B 法藥敏試驗也是可取的。相關(guān)研究[12-14]顯示，血培養(yǎng)直接藥敏試驗比傳統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)藥敏試驗耗時短，兩種方法對抗菌藥物的敏感性和耐藥性方面無明顯差距，本研究也認(rèn)同此觀點(diǎn)。本研究革蘭陽性球菌和革蘭陰性桿菌16 h 的直接藥敏試驗結(jié)果比7 h 的結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)符合率更高，結(jié)果更可靠，主要原因可能是培養(yǎng)時間的不足，傳統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)藥敏試驗都是過夜培養(yǎng)18～24 h，細(xì)菌有充分時間進(jìn)行傳代、與藥物作用，而細(xì)菌只培養(yǎng)7 h 傳代次數(shù)不足、細(xì)菌生長不好、與藥物未能充分作用，因此很多藥敏紙片的抑菌環(huán)直徑顯示不清晰，容易造成判讀結(jié)果時的誤差，出現(xiàn)較為嚴(yán)重的錯誤。

革蘭陽性球菌的直接藥敏試驗中，培養(yǎng)7 h 和16 h，青霉素、利奈唑胺、四環(huán)素和氯霉素的標(biāo)準(zhǔn)符合率高達(dá)90%以上，但是也發(fā)現(xiàn)萬古霉素、替考拉寧、頭孢西丁和左氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)符合率不太高，可能由于藥敏規(guī)則中萬古霉素是培養(yǎng)24 h 才能判讀結(jié)果，另外，學(xué)者普遍認(rèn)為采用紙片擴(kuò)散法對萬古霉素的藥物敏感性進(jìn)行測定是不可靠的[15]，因為其對某些金黃色葡萄球菌對萬古霉素是敏感還是中介無法區(qū)分，應(yīng)該常規(guī)采用肉湯稀釋法來提高萬古霉素藥物敏感度的準(zhǔn)確性。頭孢西丁跟萬古霉素一樣，某些葡萄球菌也必須培養(yǎng)24 h 才能判讀抑菌環(huán)直徑大小，培養(yǎng)時間短、藥物未充分作用、菌種生長不好，可能是導(dǎo)致兩個時間段藥敏符合率偏低的主要原因。另外，革蘭陽性球菌還需要注意 D 試驗陽性的菌種，D 試驗用于觀察葡萄球菌對紅霉素誘導(dǎo)克林霉素的耐藥情況[16]。在本研究直接藥敏試驗中，發(fā)現(xiàn)有4例 D 試驗陽性，說明進(jìn)行直接藥敏試驗也可發(fā)現(xiàn) D 試驗陽性菌株，所以要特別注意紅霉素和克林霉素的藥敏結(jié)果，一旦發(fā)現(xiàn) D 試驗陽性，盡管紅霉素和克林霉素藥敏試驗中抑菌環(huán)大小顯示其為敏感，報告臨床時均改為耐藥。

革蘭陰性桿菌的直接藥敏試驗中，培養(yǎng)16 h，美洛培南、復(fù)方新諾明、亞胺培南和慶大霉素的標(biāo)準(zhǔn)符合率高達(dá)100%，另外多種藥物的標(biāo)準(zhǔn)符合率也高達(dá)90%以上;培養(yǎng)7 h，頭孢呋辛、左氧氟沙星、復(fù)方新諾明、慶大霉素和氨芐西林的標(biāo)準(zhǔn)符合率也高達(dá)90%以上，某些藥物7 h 和16 h 的標(biāo)準(zhǔn)符合率相差不是較大，分析原因可能因為革蘭陰性桿菌的傳代間隔時間較短，傳代次數(shù)較多，在7 h 判讀結(jié)果時已經(jīng)出現(xiàn)明顯的抑菌環(huán)直徑，提高肉眼判讀結(jié)果的準(zhǔn)確性。但是還存在有個別藥物的符合率相差甚遠(yuǎn)，如哌拉西林/他唑巴坦、亞胺培南、頭孢西丁和頭孢他啶等藥物，原因可能也與細(xì)菌生長周期和藥物的相互作用有關(guān)。

綜上所述，直接藥敏試驗比標(biāo)準(zhǔn)藥敏試驗耗時短，操作簡便，革蘭陰性桿菌16 h 的直接藥敏試驗結(jié)果在臨床上具有較高的參考價值，革蘭陽性球菌仍有幾類藥物（如利奈唑胺、四環(huán)素、氯霉素、慶大霉素、左氧氟沙星和復(fù)方磺胺等）符合率較高，臨床醫(yī)生可以直接藥敏試驗結(jié)果作為參考，及時給患者使用抗生素，降低患者病死率和避免抗生素的濫用造成細(xì)菌耐藥性的變異。

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（收稿日期：2021-09-30）