劉金蓮,馬水群,曾麗梅,鄭雪慧,邵金揚(yáng),張 玲 (.廣寧縣中醫(yī)院,廣東 廣寧 56300；.廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心有限公司,廣東 廣州 50000)

鼻咽癌作為常見的頭頸部惡性腫瘤，其發(fā)生率占頭頸部惡性腫瘤的首位，對(duì)患者生存質(zhì)量及生命健康威脅較大[1]。鼻咽癌發(fā)病部位隱蔽、位置較深，尤其是病灶位于鼻咽頂壁、咽隱窩處患者，早期無(wú)典型臨床癥狀表現(xiàn)，早期診斷難度較大，多數(shù)患者確診已處于晚期。血清腫瘤標(biāo)志物已在鼻咽癌診療中不斷應(yīng)用，具有無(wú)創(chuàng)、簡(jiǎn)便及便于連續(xù)監(jiān)測(cè)等優(yōu)點(diǎn)。血清長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)SNHG3屬于SNHGs家族成員，與多種癌癥發(fā)生具有密切聯(lián)系，但目前關(guān)于lncRNA SNHG3在鼻咽癌中的臨床意義尚未明確[2-3]。本研究探討鼻咽癌患者血清lncRNA SNHG3表達(dá)水平及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料：選擇2019年3月～2021年3月于廣寧縣中醫(yī)院治療的200例鼻咽癌患者作為鼻咽癌組，同時(shí)選取同期于本院體檢健康者200例作為對(duì)照組，本研究獲本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。鼻咽癌組男128例，女72例；年齡28～74歲，平均年齡(48.91±5.68)歲；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期86例，Ⅲ～Ⅳ期114例。對(duì)照組男124例，女76例；年齡25～76歲，平均年齡(48.85±5.71)歲。兩組性別、年齡相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，有可比性。

1.2入選及排除標(biāo)準(zhǔn)：納入標(biāo)準(zhǔn)： ①患者簽署知情同意書；②年齡≥18歲；③鼻咽癌均經(jīng)病理穿刺檢查確診；④精神狀態(tài)良好。排除標(biāo)準(zhǔn)： ①鼻咽癌組接受過(guò)放、化療或手術(shù)治療；②合并其他惡性腫瘤；③嚴(yán)重肝、腎功能損傷；④鼻咽癌組患者近1個(gè)月內(nèi)有藥物服用史，對(duì)照組近3個(gè)月內(nèi)有藥物服用史。

1.3方法

1.3.1樣本采集：采集兩組空腹靜脈血3 ml，3 000 r/min離心10 min分離血清，并置于-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2血清LncRNA SNHG3檢測(cè)：①總RNA提取：總RNA采用TRIzol法提取，用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)A260和A280，計(jì)算兩者比值，當(dāng)A260/A280為1.8～2.0時(shí)表明RNA質(zhì)量較好。②逆轉(zhuǎn)錄合成：逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA采用二步法，冰上解凍模板RNA，反應(yīng)體系：RNA模板2 μl，dNTP 1 μl，Oligo 1 μl，RNase-free ddH2O 14 μl，混勻后放入金屬浴中65℃預(yù)熱5 min，冰上冷卻加入：5×PrimeScirpt緩沖液4 μl，反轉(zhuǎn)錄酶1 μl，RNase抑制劑0.5 μl，RNase-free ddH2O 0.5 μl；PCR反應(yīng)條件：30℃ 10 min，42℃ 60 min，85℃ 5 min；將RNA逆轉(zhuǎn)成cDNA。③實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)：GAPDH為內(nèi)參基因，以逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA為模板，反應(yīng)體系：cDNA 2 μl，2×SYBR Green qPCR Mix 10 μl；正向引物1 μl，反向引物1 μl，DEPC水6 μl，反應(yīng)總體積20 μl，每個(gè)目的基因做3個(gè)重復(fù)；反應(yīng)條件：95℃ 10 min，95℃ 15 min，60℃ 1 min 40個(gè)循環(huán)；72℃ 30 s，啟動(dòng)qRT PCR儀進(jìn)行PCR擴(kuò)增，計(jì)算lncRNA SNHG3相對(duì)定量；以U6為內(nèi)參。

1.4評(píng)價(jià)指標(biāo)：①比較兩組血清lncRNA SNHG3表達(dá)水平。②血清lncRNA SNHG3表達(dá)水平與鼻咽癌患者臨床病理特征關(guān)系。③治療后隨訪2年，依據(jù)患者是否復(fù)發(fā)分為復(fù)發(fā)組、未復(fù)發(fā)組，比較兩組血清lncRNA SNHG3表達(dá)水平。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS22.0軟件進(jìn)行χ2及t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1鼻咽癌組與對(duì)照組血清lncRNA SNHG3表達(dá)水平對(duì)比：鼻咽癌組血清lncRNA SNHG3表達(dá)水平(126.58±30.16)高于對(duì)照組(19.85±5.34)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=49.280,P=0.000)。

2.2血清lncRNA SNHG3表達(dá)水平與鼻咽癌患者臨床病理特征關(guān)系：TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵犯頸動(dòng)脈鞘、侵犯顱底患者的lncRNA SNHG3表達(dá)水平高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、無(wú)侵犯頸動(dòng)脈鞘、無(wú)侵犯顱底患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；不同性別及年齡患者lncRNA SNHG3表達(dá)水平對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 血清lncRNA SNHG3表達(dá)水平與鼻咽癌患者臨床病理特征關(guān)系

2.3復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組lncRNA SNHG3表達(dá)水平比較：治療后隨訪2年，200例鼻咽癌患者中復(fù)發(fā)32例，復(fù)發(fā)率為16.00%(32/200)；復(fù)發(fā)組lncRNA SNHG3表達(dá)水平(137.25±26.92)高于未復(fù)發(fā)組(74.91±13.68)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=19.623，P=0.000)。

3 討論

鼻咽癌是我國(guó)常見惡性腫瘤，其發(fā)生與環(huán)境、病毒及遺傳等因素有關(guān)。多數(shù)鼻咽癌患者在確診時(shí)已處于晚期且預(yù)后較差，采用已知的EBERs、p16、SPLUNC1等標(biāo)志物診斷效能較低，故尋求一種準(zhǔn)確的分子標(biāo)志物對(duì)鼻咽癌進(jìn)行早期診斷、病情評(píng)估、指導(dǎo)治療尤為重要[4]。依據(jù)lncRNA從基因組中被轉(zhuǎn)錄位置的不同，可將其分為5大類，lncRNA能夠于多個(gè)層面上調(diào)控表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄及基因表達(dá)，在腫瘤發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮重要作用[5]。SNHG3為新發(fā)現(xiàn)的一類lncRNA，位于人1號(hào)染色體短臂3區(qū)6號(hào)帶，包含snoRNA-U17a、U17b兩個(gè)內(nèi)含子[6]。

羅濤等[7]研究中觀察lncRNA SNHG3在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及臨床意義，研究結(jié)果顯示，在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中l(wèi)ncRNA SNHG3表達(dá)水平明顯上調(diào)，且lncRNA SNHG3表達(dá)水平與患者不良臨床預(yù)后具有密切聯(lián)系。谷建斌等[8]研究中指出，胃癌組織中l(wèi)ncRNA SNHG3表達(dá)顯著增高，且lncRNA SNHG3表達(dá)水平與腫瘤TNM分期、浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有關(guān)，故可見lncRNA SNHG3參與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展，且可對(duì)腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移進(jìn)行評(píng)估。本研究中研究鼻咽癌患者血清lncRNA SNHG3表達(dá)水平及其臨床意義，研究結(jié)果顯示，鼻咽癌組患者血清lncRNA SNHG3表達(dá)水平高于對(duì)照組；TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵犯頸動(dòng)脈鞘、侵犯顱底患者的lncRNA SNHG3表達(dá)水平高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、無(wú)侵犯頸動(dòng)脈鞘、無(wú)侵犯顱底患者；復(fù)發(fā)組lncRNA SNHG3表達(dá)水平高于未復(fù)發(fā)組。提示出lncRNA SNHG3能夠促進(jìn)鼻咽癌發(fā)生及侵襲、轉(zhuǎn)移，鼻咽癌患者血清lncRNA SNHG3呈高表達(dá)，且與患者臨床分期、是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有關(guān)，且可對(duì)患者預(yù)后進(jìn)行判斷。

綜上所述，鼻咽癌患者血清lncRNA SNHG3表達(dá)水平較高，且與TNM分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理特征有關(guān)，能夠?qū)Ρ茄拾┑脑\斷及治療、預(yù)后判斷提供依據(jù)。