張旭，趙芳園

（黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院 中醫(yī)內(nèi)科，黑龍江 哈爾濱 150040）

慢性腎衰竭（chronic renal failure, CRF）是指在慢性腎病基礎上，腎臟持續(xù)性損傷導致體內(nèi)代謝產(chǎn)物大量滯留，電解質與酸堿失衡，機體內(nèi)環(huán)境平衡被破壞并產(chǎn)生臨床癥狀的過程。CRF 有多種并發(fā)癥，以鈣磷代謝紊亂為主，隨著病程進展，還會引起動脈血管鈣化、腎性骨病等，嚴重危害人體健康[1-2]。臨床上常采用磷結合劑、鈣受體激動劑和血液透析等方法治療CRF，但由于均是單因素靶向治療，所以常引起高磷血癥，且磷結合劑價格較昂貴，患者難以接受[3-4]。中醫(yī)認為腎絡淤堵，脾虛風動是CRF 的主要病機，患者體內(nèi)常有淤血、痰濁與濕濁滯留[5]，因此本研究根據(jù)CRF 病機，結合《五十二病方》中活血化瘀方劑進行調整，將黃芪、茯苓、黨參、忍冬藤、白術、澤瀉、當歸、紅花、陳皮、黃柏、丹參配伍成益氣活血化瘀湯，用于治療CRF 模型大鼠，探究其對鈣磷代謝紊亂和血管鈣化的影響及機制，為中醫(yī)臨床治療CRF 提供新思路。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

4 周齡健康雄性SD 大鼠50 只，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，正常飼喂，適應性飼養(yǎng)1 周。實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（京）2016-0011，實驗動物使用許可證號：SYXK（京）2017-0033。

1.2 主要試劑及儀器

1.2.1試劑黃芪、茯苓、黨參、忍冬藤、白術、澤瀉、當歸、紅花、陳皮、黃柏、丹參（北京同仁堂大藥房），骨化三醇膠丸（羅蓋全，0.25 μg/粒，國藥準字J20050021，德國羅氏制藥有限公司），血鈣濃度檢測試劑盒、血磷濃度檢測試劑盒（北京索萊寶生物科技有限公司），血尿素氮（blood urea nitrogen, BUN）試劑盒、血甲狀旁腺激素（甲狀旁腺激素（parathyroid hormone, PTH）檢測試劑盒、成纖維細胞生長因子23（fibroblast growth factor-23,FGF-23）檢測試劑盒與25-羥維生素D325（OH）D3檢測試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司），尿蛋白（urinary protein,UP）檢測試劑盒、血清肌酐（serum creatinine, Scr）檢測試劑盒（上海紀寧實業(yè)有限公司），兔抗大鼠Wnt、β-catenin 和β-actin 一抗、HRP 標記羊抗兔二抗（北京康為試劑有限公司），MolPure?TRIeasy Plus Total RNA Kit 總RNA 提取試劑盒、Hifair?ⅢOne Step qRT-PCR SYBR Green Kit（一步法反轉定量）試劑盒（上海翌圣生物科技有限公司），PCR 引物（北京擎科生物有限公司），Minute（TM）動物組織總蛋白提取試劑盒（上海西寶生物科技股份有限公司）。

1.2.2儀器SD1 全自動生化分析儀（成都斯馬特科技有限公司），UV759CRT 型掃描型紫外可見分光光度計（青島聚創(chuàng)環(huán)保集團有限公司），JC-MB36 酶標儀（青島聚創(chuàng)嘉恒分析儀器有限公司），HOG-24組織均質器（上海輔光精密儀器有限公司），NanoDrop 2000 超微量分光光度計（美國賽默飛世爾科技有限公司）。

1.3 方法

1.3.1益氣活血化瘀湯準確稱取黃芪、茯苓、黨參、忍冬藤、白術各12 g，澤瀉、當歸、紅花各8 g，陳皮、黃柏各、丹參各5 g，浸泡1 h 后加水煎煮2 次，過濾后將2 次濾液混合均勻，濃縮至生藥含量為62.4 g/mL 的濃縮液，置于4℃冰箱保存。

1.3.2腎衰竭模型的復制采用5/6 腎切除法復制CRF 大鼠[6]。腹腔注射2%戊巴比妥鈉麻醉大鼠，固定于手術臺上，使大鼠背部左腎區(qū)朝上，距左脊肋骨約1.5 cm 處做斜向外方切口，打開腹腔暴露腎臟，切除2/3 腎組織并用明膠海綿壓迫止血30 s，滴加纖維蛋白原和凝血酶溶液，等待60 s 后觀察切面無活動性出血后將左腎復位、縫合。大鼠恢復1 周后，打開腹腔，切除整個右腎，2 次手術共切除約80%腎臟。假手術組打開腹腔，切除腎臟周圍部分脂肪組織，然后縫合傷口。

1.3.3分組與給藥50 只大鼠隨機分為假手術組、腎衰組、低劑量組、高劑量組、骨化三醇組，每組10 只。模型復制成功后2 周后開始給藥，按照人與大鼠體表面積換算出給藥劑量作為最低給藥劑量。高、低劑量組大鼠分別按35.2 g/kg、8.8 g/kg 灌胃益氣活血化瘀湯；骨化三醇組將骨化三醇在溫水中搗碎溶成懸液，按25 ng/kg 灌胃；假手術組灌胃等體積溫水，均1 次/d，連續(xù)8 周。腎衰組模型復制成功后未做任何處理。給藥結束后，用代謝籠收集大鼠24 h尿液，3 000 r/min 離心10 min，取上清液于4℃待測。實驗前12 h 禁水、禁食。治療期間，觀察大鼠體重、精神狀態(tài)、行為、中毒及死亡情況。

1.3.4酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）檢測血液礦物質與生化指標大鼠腹腔注射2%戊巴比妥鈉溶液，麻醉后固定于手術臺上，切開腹腔，腹主動脈采血5 mL，4 000 r/min 離心20 min，分離上清液，采用全自動生化分析儀檢測大鼠血清鈣和磷；ELISA 測定大鼠血清PTH、FGF-23、25（OH）D3。酶標儀測定各個血標本在450 nm 波長處的光密度（optical density, OD）值，以試劑盒中標準品為橫坐標（X），對應OD 值為縱坐標（Y）繪制標準曲線，根據(jù)血標本的OD 值計算相應濃度。

1.3.5腎臟功能指標檢測取離心后血清，采用ELISA 試劑盒檢測大鼠血清Scr 含量。在氯化高鐵一磷酸中加入含有BUN 的血清、二乙酰一肟和硫胺脲，加熱生成紅色的二嗪化合物，顏色深淺與血BUN 呈正比，取加熱煮沸的混合液，待其冷卻后利用分光光度計測量540 nm 處的OD 值。取離心后尿液上清，采用ELISA 試劑盒檢測大鼠尿液UP 含量，按照說明書進行操作，濃度計算方法同方法1.3.4。

1.3.6主動脈茜素紅法鈣鹽染色參照ZHANG等[7]的方法，腹主動脈采血后，剪開胸腔，剝離出胸主動脈，剪取長約5 cm 動脈，用含肝素鈉的生理鹽水沖洗動脈，將動脈外部和管腔中的血液完全沖除干凈，浸泡于PBS 緩沖液中。①血管大體染色：隨機取出5 只大鼠的主動脈，用吸水紙吸干水分，浸泡于95%乙醇12 h 脫水處理，用茜素紅染料（0.004%茜素紅+1%氫氧化鉀）室溫下染色12 h，取出動脈血管，2%氫氧化鉀沖洗干凈（時間不宜過長），4%多聚甲醛固定，拍照觀察染色情況。②血管切片染色：將剩余5 只大鼠的主動脈取出，每根剪取1 cm，吸干水分，用4%多聚甲醛在常溫下固定24 h，不同濃度乙醇梯度脫水，加入二甲苯透明處理10 min，石蠟包埋，切片厚約5 μm，放于載玻片上，60℃烘烤，二甲苯脫蠟，水中浸泡2 min，0.2% 茜素紅染液染色6 min，用水洗去多余染液并加入二甲苯脫水，中性樹膠封片，置于顯微鏡下觀察血管鈣化情況。

1.2.1 水資源量 2016年河套灌區(qū)各旗（縣、區(qū)）水資源總量合計為46.277億m3，其中，地表水資源量42.483億m3，地下水資源量為16.993億m3，地表與地下水重復計算量13.199億m3。降水量27.794億m3，引用黃河水量和地表水徑流量分別為41.976，0.507億m3，分別占地表水資源量的98.8%，1.2%。河套灌區(qū)地下水年平均埋深2.13 m。

1.3.7實時熒光定量聚合酶鏈反應（quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR）檢測Wnt/β-catenin 通路mRNA 的表達大鼠腹主動脈采血后，取出腎臟，生理鹽水沖洗干凈。加入適量生理鹽水，用組織勻漿器研磨腎臟組織，采用TRIzol法提取RNA（總RNA 提取試劑盒），用Nano Drop 測量濃度。采用Primer 5 軟件設計qRT-PCR 擴增引物（見表1）。取0.1 μg RNA，使用Hifair?ⅢOne Step qRT-PCR SYBR Green Kit（一步法反轉定量）試劑盒進行逆轉錄和定量，40℃、10 min 將RNA 逆轉錄為cDNA。在ABI PRISM 7500 實時PCR 系統(tǒng)（ABI）中進行反應，qRT-PCR 反應條件：95℃預變性3 min，95℃變性10 s，60℃退火30 s，共38 個循環(huán)。以β-actin為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計算Wnt/β-catenin 通路[結腸腺瘤樣息肉蛋白（adenomatous polyposis coli, APC）、T 細胞因子4（T-cell factor, TCF4）、β-catenin] mRNA相對表達量，實驗重復3 次獲得平均值。

表1 qRT-PCR引物序列

1.3.8Western blotting 檢測Wnt/β-catenin 通路蛋白的表達取研磨好的腎臟組織勻漿液，提取總蛋白，利用BCA 試劑盒測定濃度。添加緩沖液，將蛋白質樣本在95℃條件下加熱10 min，10%聚丙烯酰胺凝膠電泳，電壓80 V 用于濃縮，120 V 用于分離。恒壓100 mV 條件下濕轉移120 min，將蛋白質轉移到聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluoride, PVDF）膜上。室溫下將PVDF 膜置于5%牛血清白蛋白中封閉1 h，與一抗（兔抗大鼠Wnt、β-catenin 和β-actin一抗，均1∶1 000 稀釋）在4℃條件下孵育一晚。TBST 沖洗膜3 次，5 min/次，加入二抗孵育1 h，TBST再洗膜3 次，5 min/次。使用發(fā)光液ECL 底物對每個條帶進行可視化處理，以β-actin 為內(nèi)參計算APC、TCF4、β-catenin 灰度值作為蛋白相對表達量。

1.4 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 21.0 統(tǒng)計軟件。計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，比較用方差分析，進一步兩兩比較用LSD-t檢驗。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 大鼠一般情況

治療期間，大鼠精神狀態(tài)良好，飲食與行為正常，毛色正常，未出現(xiàn)中毒與死亡情況。

2.2 各組大鼠血液礦物質與生化指標比較

假手術組、腎衰組、低劑量組、高劑量組、骨化三醇組大鼠血鈣、血磷、PTH、FGF-23、25（OH）D3比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。進一步兩兩比較結果：腎衰組血鈣、25（OH）D3低于假手術組（P＜0.05）；與腎衰組比較，低劑量組、高劑量組和骨化三醇組血鈣、25（OH）D3升高（P＜0.05）；高劑量組和骨化三醇組血鈣、25（OH）D3高于低劑量組（P＜0.05）；骨化三醇組血鈣、25（OH）D3高于高劑量組（P＜0.05）；腎衰組血磷、PTH、FGF-23 高于假手術組（P＜0.05）；與腎衰組比較，低劑量組、高劑量組和骨化三醇組血磷、PTH、FGF-23 降低（P＜0.05）；高劑量組和骨化三醇組血磷、PTH、FGF-23 低于低劑量組（P＜0.05）；骨化三醇組血磷、PTH、FGF-23 低于高劑量組（P＜0.05）。見表2。

表2 各組大鼠血鈣、血磷、PTH、FGF-23、25（OH）D3比較 （n=10，±s）

表2 各組大鼠血鈣、血磷、PTH、FGF-23、25（OH）D3比較 （n=10，±s）

注：①與假手術組比較，P ＜0.05；②與腎衰組比較，P ＜0.05；③與低劑量組比較，P ＜0.05；④與高劑量組比較，P ＜0.05。

?組別25（OH）D3/（ng/mL）血鈣/（mmol/L）血磷/（mmol/L）PTH/（pg/mL）FGF-23/（pg/L）假手術組腎衰組低劑量組高劑量組骨化三醇組F 值P 值13.85±2.73 6.27±1.12①9.54±1.61②12.76±2.01②③14.17±2.32②③④27.307 0.000 2.97±0.69 1.87±0.41①2.18±0.27②2.67±0.74②③2.84±0.68②③④6.257 0.000 2.01±0.41 4.17±1.01①3.92±0.87②2.93±0.51②③2.51±0.52②③④35.315 0.000 0.71±0.17 19.32±4.18①14.31±3.27②12.79±2.88②③9.17±1.53②③④61.898 0.000 0.48±0.11 1.17±0.26①0.92±0.18②0.62±0.12②③0.54±0.11②③④38.189 0.000

2.3 各組大鼠腎功能指標比較

假手術組、腎衰組、低劑量組、高劑量組和骨化三醇組大鼠BUN、Scr、24 h UP 比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。進一步兩兩比較結果：假手術組BUN、Scr、24 h UP 低于其余4 組（P＜0.05）；與腎衰組比較，低劑量組、高劑量組和骨化三醇組BUN、Scr、24 h UP 降低（P＜0.05）；高劑量組和骨化三醇組BUN、Scr、24 h UP 低于低劑量組（P＜0.05）；骨化三醇組BUN、Scr、24 h UP 低于高劑量組（P＜0.05）。見表3。

表3 各組大鼠血清BUN、Scr、24 h UP比較（n=10，±s）

表3 各組大鼠血清BUN、Scr、24 h UP比較（n=10，±s）

注：①與假手術組比較，P ＜0.05；②與腎衰組比較，P ＜0.05；③與低劑量組比較，P ＜0.05；④與高劑量組比較，P ＜0.05。

24 h UP/（mg/d）組別BUN/（mmol/L）Scr/（μmol/L）0.41±0.11 13.21±3.46①11.02±2.98①②10.77±2.35①②③9.14±1.57①②③④42.764 0.000假手術組腎衰組低劑量組高劑量組骨化三醇組F 值P 值7.58±2.04 18.96±4.27①16.87±3.17①②13.77±3.02①②③11.48±2.36①②③④21.243 0.000 36.52±9.32 95.74±21.71①75.31±18.14①②61.27±18.01①②③56.33±12.87①②③④17.711 0.000

2.4 各組大鼠主動脈血管鈣化情況

血管整體茜素紅染色可見假手術組主動脈呈白色，無紅色鈣化點；腎衰組主動脈則鈣化嚴重，呈紅色；低劑量組主動脈呈淺紅色，鈣化程度略輕；高劑量組主動脈紅色更淡，鈣化程度緩解；骨化三醇組主動脈部分呈白色，部分呈淺紅色，鈣化程度減輕。

茜素紅切片染色中，假手術組切片未觀察到鈣化點；腎衰組切片觀察到大面積紅色鈣化點，呈彌散性分布；與腎衰組比較，可見低劑量組紅色鈣化點減少，高劑量組紅色鈣化點明顯減少；骨化三醇組紅色鈣化點也明顯減少。見圖1。

圖1 大鼠主動脈截面切片 （茜素紅染色×50）

2.5 各組大鼠腎臟APC、TCF4、β-catenin mRNA相對表達量比較

假手術組、腎衰組、低劑量組、高劑量組和骨化三醇組大鼠APC、TCF4、β-catenin mRNA 相對表達量比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。進一步兩兩比較結果：腎衰組APC mRNA 相對表達量低于假手術組（P＜0.05）；與腎衰組比較，低劑量組、高劑量組和骨化三醇組APC mRNA 相對表達量升高（P＜0.05）；高劑量組和骨化三醇組APC mRNA相對表達量高于低劑量組（P＜0.05）；骨化三醇組APC mRNA 相對表達量高于高劑量組（P＜0.05）；腎衰組TCF4、β-catenin mRNA 相對表達量高于假手術組（P＜0.05）；與腎衰組比較，低劑量組、高劑量組和骨化三醇組TCF4、β-catenin mRNA 相對表達量降低（P＜0.05）；高劑量組和骨化三醇組TCF4、β-catenin mRNA 相對表達量低于低劑量組（P＜0.05）；骨化三醇組TCF4、β-catenin mRNA 相對表達量低于高劑量組（P＜0.05）。見表4。

表4 各組大鼠腎臟APC、TCF4、β-catenin mRNA相對表達量比較 （n=10，±s）

表4 各組大鼠腎臟APC、TCF4、β-catenin mRNA相對表達量比較 （n=10，±s）

注：①與假手術組比較，P ＜0.05；②與腎衰組比較，P ＜0.05；③與低劑量組比較，P ＜0.05；④與高劑量組比較，P ＜0.05。

β-catenin mRNA 0.87±0.13 1.95±0.32①1.51±0.35②1.21±0.31②③1.07±0.27②③④10.803 0.000組別假手術組腎衰組低劑量組高劑量組骨化三醇組F 值P 值APC mRNA 0.98±0.12 0.37±0.08①0.58±0.10②0.61±0.11②③0.65±0.10②③④22.812 0.000 TCF4 mRNA 1.10±0.31 2.07±0.48①1.87±0.51②1.29±0.33②③1.03±0.21②③④7.461 0.001

2.6 各組大鼠腎臟APC、TCF4、β-catenin 蛋白相對表達量比較

表5 各組大鼠腎臟APC、TCF4、β-catenin蛋白相對表達量比較 （n=10，±s）

表5 各組大鼠腎臟APC、TCF4、β-catenin蛋白相對表達量比較 （n=10，±s）

注：①與假手術組比較，P ＜0.05；②與腎衰組比較，P ＜0.05；③與低劑量組比較，P ＜0.05；④與高劑量組比較，P ＜0.05。

β-catenin 0.36±0.09 1.12±0.29①0.98±0.21②0.56±0.11②③0.38±0.08②③④18.068 0.000組別假手術組腎衰組低劑量組高劑量組骨化三醇組F 值P 值APC 1.13±0.25 0.35±0.09①0.48±0.11②0.67±0.13②③0.78±0.15②③④18.503 0.000 TCF4 0.28±0.05 1.07±0.30①0.82±0.15②0.58±0.10②③0.36±0.08②③④20.323 0.000

圖2 各組大鼠腎臟APC、TCF4、β-catenin蛋白的表達

3 討論

鈣磷代謝紊亂是CRF 的主要并發(fā)癥之一，貫穿于腎功能損壞的全過程[8]。長期鈣磷代謝紊亂會導致各種組織器官發(fā)生繼發(fā)性損壞，主要表現(xiàn)為主動脈鈣化、軟組織鈣化和腎性骨病等，增加患心血管疾病的風險。既往研究顯示，CRF 患者血鈣、血磷、PTH 異常，誘發(fā)高磷血癥，加快血管鈣化的進展[9]。臨床上主要以控制患者飲食或使用磷結合劑來降低血磷和恢復血鈣濃度，目前已經(jīng)研制出碳酸司維拉姆、鹽酸司維拉姆等新型磷結合劑，但價格昂貴，患者接受度低[10-11]。在現(xiàn)代中醫(yī)學中，CRF 屬本虛標實癥，認為腎乃“先天之本”，腎氣虛弱，則陰陽失調，導致淤血、痰積、濁毒、風邪等實癥。腎絡淤堵，濁毒痰瘀潴留，導致鈣磷代謝紊亂；痰瘀于血脈，致血管鈣化，故應以補腎健脾，泄?jié)嵬ǜň徑獠“Y。湯水福教授[12]也在其研究中闡述治療CRF 應以通絡、活血、化瘀、益氣為主。

本研究中主動脈茜素紅染色結果表明，腎衰組大鼠主動脈完全變成暗紅色，說明血管鈣化嚴重，而相比于腎衰組，低劑量組、高劑量組和骨化三醇組的主動脈紅色依次減弱，說明益氣活血化瘀湯可以有效緩解鈣磷代謝紊亂，減少血管中鈣磷沉積，減輕血管鈣化程度。本研究結果顯示，與假手術組比較，腎衰組大鼠血鈣、25（OH）D3降低，血磷、PTH、FGF-23 升高。與腎衰組相比，各治療組大鼠血鈣、25（OH）D3升高，血磷、PTH、FGF-23 降低，并且高劑量組各指標的變化程度高于低劑量組，提示高劑量的益氣活血化瘀湯可以更好地改善CRF 大鼠鈣磷代謝紊亂。FGF-23 是調磷素之一，是調節(jié)血磷與維生素D 的主要物質。25（OH）D3是固醇類激素，與PTH、血鈣、血磷的調節(jié)有關，可以間接反映機體鈣磷紊亂程度。血鈣、血磷、PTH 可以直接反映機體鈣磷代謝紊亂程度?，F(xiàn)代藥理學研究表明，黃芪可以減緩CRF 大鼠腎損傷，調節(jié)鈣磷代謝紊亂[13]。Scr、BUN 是機體代謝產(chǎn)物，由腎臟排除，可以間接反映腎功能。本研究結果顯示，腎衰組大鼠Scr、BUN高于假手術組；而與腎衰組相比，各治療組Scr、BUN均出現(xiàn)不同程度的下降。黃芪為補氣的良藥，補氣升陽充盈脈絡之氣，補腎健脾化脾腎之虛，常配伍黨參，達到益氣固元之功效。同時有研究發(fā)現(xiàn)，黃芪的水提取物可以調節(jié)CRF 大鼠體內(nèi)Scr、BUN 水平，對CRF 癥狀有緩解作用[14]。崔龍海等[15]發(fā)現(xiàn)黨參總堿苷治療腎損傷大鼠后，腎壞死灶減小，炎癥浸潤降低，對腎損傷具有保護作用。丹參具有解毒通絡，活血化瘀的作用[16]，忍冬藤和紅花具有活血通絡的作用。中醫(yī)角度認為Scr、BUN 屬于機體的“淤濁”，而本研究中，CRF 大鼠經(jīng)益氣活血化瘀湯治療后，“淤濁”降低，提示益氣活血化瘀湯具有排濁化瘀的功效。正常情況下，由于腎小球的濾過作用，尿液中的蛋白質不會隨尿液排出體外，而在本研究中收集腎衰組大鼠處死前24 h 尿液發(fā)現(xiàn)其中含有大量UP，說明腎功能受損，經(jīng)治療后，各組尿液中UP含量出現(xiàn)不同程度降低。因此推測，益氣活血化瘀湯具有修復受損腎臟、排濁化瘀的作用，提高治療劑量則效果更佳。

本研究結果表明，腎衰組TCF4、β-catenin mRNA 和蛋白相對表達量高于假手術組；各治療組大鼠腎臟TCF4、β-catenin mRNA 和蛋白相對表達量低于腎衰組。與假手術組比較，腎衰組大鼠腎臟APC mRNA 和蛋白相對表達量下調；與腎衰組相比，各治療組大鼠腎臟APC mRNA 和蛋白相對表達量上調。說明益氣活血化瘀湯可以通過調節(jié)Wnt/βcatenin 信號通路來抑制腎臟損傷，保護腎臟組織。既往研究顯示，Wnt/β-catenin 信號通路在慢性腎病中發(fā)揮重要作用，其中β-catenin 是該通路的重要蛋白[17]。正常情況下，β-catenin 在細胞膜上與其他蛋白質一同維持細胞膜的完整性，當細胞受到刺激時，Wnt 激活β-catenin 進入細胞核，調節(jié)下游腎纖維化基因的表達。APC 則可以降解β-catenin 蛋白復合體，使細胞核內(nèi)β-catenin 轉移至細胞質，一部分APC 可以與β-catenin 結合，阻止其激活下游基因，抑制腎臟損傷的發(fā)生。β-catenin 進入細胞核后，無法直接作用于遺傳物質，作為核內(nèi)轉錄因子家族的TCF4 可以幫助β-catenin 進入細胞核，并與其結合進一步激活下游基因，引起腎臟損傷[18]。

綜上所述，益氣活血化瘀湯可以改善CRF 大鼠鈣磷代謝紊亂，緩解血管鈣化程度，適當增加益氣活血化瘀湯的劑量療效更好。其治療作用可能是通過調節(jié)Wnt/β-catenin 信號通路來實現(xiàn)的。本研究為中醫(yī)臨床治療CRF 提供了新思路，但益氣活血化瘀湯對Wnt/β-catenin 信號通路的具體調節(jié)機制尚不明確，還需后續(xù)研究進一步闡明。