廖趙妹， 蔡思銘， 陳劍標(biāo)， 呂華龍， 雷智賢

(1.海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院兒科一區(qū)， 海南 海口 5701002.海南醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院兒科， 海南 海口 570100)

癲癇(epilepsy)是一種受到多種因素影響造成的腦內(nèi)異常過度神經(jīng)元活動(dòng)所引發(fā)的短暫性放電癥狀疾病，由于異常放電部位不同，擴(kuò)散網(wǎng)絡(luò)堵塞息息相關(guān)，因而患者疾病發(fā)作時(shí)的表現(xiàn)形態(tài)、感覺知覺、精神狀態(tài)和行為意識(shí)均有不同[1,2]。早發(fā)性癲癇腦病(EOEE)是在患兒出生后幾個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)的癲癇疾病，由于患兒腦部及機(jī)體功能發(fā)育尚不完全，疾病發(fā)作時(shí)的頻繁放電異常將導(dǎo)致腦部發(fā)育遲緩或感知覺、認(rèn)知功能、運(yùn)動(dòng)功能障礙。癲癇類疾病大多存在多種病因，在目前已知的癲癇類疾病中，大田原綜合征、早期肌陣攣腦病、嬰兒痙攣癥、Dravet綜合征以及各類尚未命名的非特異性癲癇腦病，其發(fā)病機(jī)制除了特定狀態(tài)下出現(xiàn)的遺傳、腦損傷、感染等因素，其他較為復(fù)雜的臨床癥狀原因尚且不明[3]?；诖耍緦?shí)驗(yàn)選取我院2018年4月至2019年4月期間收治的40例早發(fā)性癲癇腦病患兒臨床資料作為研究對(duì)象，采用基因篩選技術(shù)檢查EOEE患兒出現(xiàn)SCN1A、CDKL5基因突變的臨床特征，旨在為EOEE患兒臨床診療提供參考依據(jù)。具體研究報(bào)告如下：

1 資料與方法

1.1一般資料:選取我院2018年4月至2019年4月期間收治的40例早發(fā)性癲癇腦病患兒臨床資料作為研究對(duì)象，采集患兒父母外周血進(jìn)行sanger測(cè)序排查。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患兒出生1年半內(nèi)出現(xiàn)驚厥現(xiàn)象；②可合并有多類型癲癇發(fā)作情況，在常規(guī)癲癇疾病藥物作用下疾病未好轉(zhuǎn)；③表現(xiàn)為腦智力落后或運(yùn)動(dòng)功能停滯等。排除標(biāo)準(zhǔn)：①遺傳性代謝障礙；②圍生期內(nèi)發(fā)生的腦部損傷；③孕期內(nèi)出現(xiàn)宮內(nèi)感染；④經(jīng)腦部影像學(xué)診斷為腦部結(jié)構(gòu)異常所引發(fā)的新生兒癲癇。本次實(shí)驗(yàn)已征得本院醫(yī)學(xué)倫理會(huì)批準(zhǔn)同意，所有患兒家屬均對(duì)本實(shí)驗(yàn)?zāi)康募跋嚓P(guān)內(nèi)容知情，并自愿簽署知情同意書。

1.2方法:在家屬積極配合下采集患兒以及父母外周血各3mL，采集完成后用二胺四乙酸(EDTA)抗凝試管保存送往基因檢測(cè)中心進(jìn)行癲癇基因包檢測(cè)?；純和庵苎捎冒邢蚨鷾y(cè)序技術(shù)分析患兒癲癇基因，父母外周血采用sanger測(cè)序排查，根據(jù)現(xiàn)有人類基因突變數(shù)據(jù)庫等數(shù)據(jù)對(duì)比分析，確定患兒存在致病可以和疑似致病可能的基因突變。此外，檢測(cè)為基因突變陰性的患兒采用多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)(MLPA)行大片基因段變異檢查，以此排除單核苷酸多態(tài)性存在。采用TIANGEN DNA提取試劑盒(北京天根生化科技有限公司)檢測(cè)患兒外周血所提取的全基因組DNA，具體步驟按照試劑盒說明書嚴(yán)格執(zhí)行。獲取截至本實(shí)驗(yàn)時(shí)間的最新文獻(xiàn)資料和數(shù)據(jù)庫資料，將本實(shí)驗(yàn)中靶向二代測(cè)序技術(shù)分析所得的人類癲癇相關(guān)基因，轉(zhuǎn)入基因測(cè)序包(京德易東方轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中心有限公司)，對(duì)所有癲癇相關(guān)基因進(jìn)行文庫整理和編碼測(cè)序[4,5]。

1.3臨床表現(xiàn):對(duì)所有癲癇陽性基因突變患兒的臨床表型資料進(jìn)行分析，包括患兒的首次癲癇發(fā)作時(shí)間、癲癇發(fā)作類型、用藥情況、智力發(fā)育和運(yùn)動(dòng)情況等。

2 結(jié) 果

2.1一般資料:本研究中，患兒男12例，女28例，疾病發(fā)作并接受診療時(shí)間為出生6d至18個(gè)月(10.11±4.29)個(gè)月。經(jīng)診斷，出現(xiàn)嬰兒痙攣癥患兒23例，非特異性EOEE患兒10例，Dravet綜合征4例，大田原綜合征患兒3例。所有患兒父母均排除近親婚配生育，且家族內(nèi)未發(fā)現(xiàn)癲癇或神經(jīng)疾病史。

2.2SCNIA、CDKL5基因突變特點(diǎn):本研究發(fā)現(xiàn)32例(80.00%)SCNIA、CDKL5基因突變，有17例(42.50%)患兒SCNIA基因突變，15例(37.50%)患兒CDKL5基因突變，其中男11例(SCNIA基因突變5例，CDKL5基因突變6例)，女21例(SCNIA突變12例，CDKL5突變9例)。采用Sanger測(cè)序法檢測(cè)基因突變的類型，發(fā)現(xiàn)17例(42.50%)錯(cuò)義突變，3例(7.50%)插入突變，3例(7.50%)無義突變，3例(7.50%)剪切位點(diǎn)突變，6例(15.00%)微小缺失突變，未發(fā)現(xiàn)大片基因段缺失，見表1。所有患兒父母外周血基因檢測(cè)均未發(fā)現(xiàn)SCNIA、CDKL5基因突變，表明患兒SCNIA、CDKL5基因?yàn)樾律蛔儭?/p>

表1 SCNIA CDKL5基因突變特點(diǎn)n(%)

2.3SCNIA、CDKL5基因突變患兒臨床特征:32例SCNIA、CDKL5基因突變的患兒中，患兒均在10d至3個(gè)月內(nèi)第一次發(fā)病，且患兒發(fā)病時(shí)可出現(xiàn)兩種以上癲癇發(fā)作類型。有27例(84.38%)患兒首次發(fā)病出現(xiàn)無熱驚厥，6例(18.75%)患兒伴有強(qiáng)直陣攣，3例(9.38%)患兒伴有全身痙攣，隨著病情發(fā)展有5例(15.63%)患兒出現(xiàn)痙攣。在藥物方面，根據(jù)患兒具體情況對(duì)患兒施以2～8種抗癲癇類藥物治療，其中疾病發(fā)作低于50%并被認(rèn)定為有效藥物治療的有：托吡酯27例(67.50%)，丙戊酸鈉19例(47.50%)，氯硝西泮17例(42.50%)。此外，有2例(5.00%)患兒經(jīng)生酮食療，但臨床療效不明顯。32例SCNIA、CDKL5基因突變患者存在不同程度的智力發(fā)育落后情況，尚無患兒具備有意義語言和獨(dú)立行走能力，21例(65.63%)患兒獨(dú)坐時(shí)間明顯低于同年齡正常兒童，28例(87.50%)患兒具有孤獨(dú)癥征兆，11例(34.38%)存在手足功能低和身體發(fā)育緩慢現(xiàn)象。見表2。

表2 SCNIA CDKL5基因突變患兒臨床特征

3 討 論

早發(fā)性癲癇腦病(EOEE)是一類癲癇疾病的綜合，除了非特異性癲癇腦病，目前已確定的有Dravet綜合征、嬰兒痙攣癥、大田原綜合征和陣攣性腦病等癲癇疾病。臨床研究發(fā)現(xiàn)，基因突變是導(dǎo)致癲癇的重要原因，EOEE疾病發(fā)作時(shí)腦部異常放電現(xiàn)象與腦神經(jīng)元的分化遷移、神經(jīng)遞質(zhì)的合成釋放過程、突觸的產(chǎn)生修剪以及細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)等多種基因有關(guān)，因而檢測(cè)相關(guān)基因異常尤為重要[6,7]?？祽c云[8]等在研究癲癇疾病患兒SCNIA基因突變時(shí)發(fā)現(xiàn)，鈉通道蛋白編碼基因(Sodium Voltage-Gated Channel Alpha Subunit 1，SCN1A )與Dravet綜合征發(fā)作有關(guān)，可通過細(xì)胞內(nèi)外物質(zhì)交換過程干擾基因編碼鈉通道α亞基，致使患兒全身癲癇發(fā)作，因而需對(duì)尚未明確基因缺陷的EOEE患兒進(jìn)行SCNlA基因檢測(cè)。此外，細(xì)胞周期依賴激酶樣5(cyclin-dependent kinase-like 5，CDKL5)被認(rèn)為與EOEE患兒早發(fā)性驚厥有關(guān)，主要表型為嬰兒痙攣癥、Hanefeld型不典型Rett綜合征和孤獨(dú)癥障礙，可通過影響遺傳基因表達(dá)致使患者發(fā)育阻滯和智力損傷[9]。

本實(shí)驗(yàn)研究已在我院確診并接受治療的40例早發(fā)性癲癇腦病患兒，共發(fā)現(xiàn)32例(80.00%)SCNIA、CDKL5基因突變，其中男12例，女28例，疾病發(fā)作并接受診療時(shí)間分別為出生6d至18個(gè)月(10.11±4.29)個(gè)月。在32例基因突變患兒中，嬰兒痙攣癥患兒有23例，非特異性EOEE患兒10例，Dravet綜合征4例，大田原綜合征患兒3例，在發(fā)現(xiàn)的突變類型中，有17例(42.50%)錯(cuò)義突變，3例(7.50%)插入突變，3例(7.50%)無義突變，3例(7.50%)剪切位點(diǎn)突變，6例(15.00%)微小缺失突變。經(jīng)排查發(fā)現(xiàn)，所有患兒的父母均非近親婚配生育，且家族內(nèi)未發(fā)現(xiàn)癲癇或神經(jīng)疾病史。這說明，該32例患兒的SCNIA、CDKL5基因突變均為新生突變，且EOEE患兒癲癇發(fā)作類型多樣,發(fā)育落后,需及早完善基因篩查[10]。在王翠[11]等對(duì)Dravet綜合征患兒SCNIA基因突變特點(diǎn)的研究結(jié)論中，患兒大多出現(xiàn)無熱驚厥、肌陣攣和行為運(yùn)動(dòng)障礙，與梅道啟[12]等研究CDKL5基因突變出現(xiàn)的驚厥、目光對(duì)視無神、身體生長緩慢、手足動(dòng)作刻板等臨床癥狀相似。在本實(shí)驗(yàn)中，32例SCNIA、CDKL5基因突變患者存在不同程度的智力發(fā)育落后情況，尚無患兒具備有意義語言和獨(dú)立行走能力，21例(65.63%)患兒獨(dú)坐時(shí)間明顯低于同年齡正常兒童，28例(87.50%)患兒具有孤獨(dú)癥征兆，11例(34.38%)存在手足功能低刻板和身體發(fā)育緩慢兩組基因突變類型患兒均出現(xiàn)不同程度的驚厥、強(qiáng)直陣和全身痙攣，與上述研究結(jié)果一致。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，患兒在發(fā)病階段可出現(xiàn)兩種以上癲癇發(fā)作類型，且可能由兩個(gè)或兩個(gè)以上基因突變?cè)斐?。此外，本?shí)驗(yàn)32例SCNIA、CDKL5基因突變患兒中，SCNIA基因突變17例(42.50%)，1CDKL5基因突變5例(37.50%)，其中男11例(SCNIA基因突變5例，CDKL5基因突變6例)，女21例(SCNIA突變12例，CDKL5突變9例)。從該結(jié)果中可發(fā)現(xiàn)，SCNIA、CDKL5基因突變中女性患兒數(shù)量要多于男性，且女性CDKL5基因突變?cè)趦煞N基因突變中的比例要大于男性。初步分析，女性CDKL5突變率大于男性可能是受到染色體影響，與男性的一條X染色體相比，女性具有兩條。當(dāng)其中一條X染色體基因突變時(shí)，另一X染色體基因起到起代償作用，使得女性僅發(fā)生錯(cuò)義突變而不致病。但是，本實(shí)驗(yàn)主要目的是探究EOEE患兒SCN1A、CDKL5基因突變的臨床特征，為獲取不同性別之間的SCN1A、CDKL5基因突變差異，還需擴(kuò)大樣本做進(jìn)一步分析。

綜上所述，SCN1A、CDKL5基因突變相關(guān)的EOEE疾病在患兒群體中發(fā)病形式多樣，嚴(yán)重影響患兒的生長發(fā)育過程，需在早期抗癲癇藥物和食療基礎(chǔ)上探索更加針對(duì)性的治療方法，以此對(duì)癥治療。此外，男女不同性別所導(dǎo)致的SCN1A、CDKL5基因突變致病機(jī)制有可能存在差異，為獲取更加具體、真實(shí)的研究數(shù)據(jù)還需大樣本做進(jìn)一步分析。