張少毅，鐘國(guó)偉，桑楊

陜西省結(jié)核病防治院結(jié)核內(nèi)科，陜西 西安 710100

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌(MTB)感染所致傳染病，對(duì)人類(lèi)健康造成嚴(yán)重威脅。既往調(diào)查顯示，每年新發(fā)結(jié)核病高達(dá)800萬(wàn)～1 000萬(wàn)，并且死亡病例數(shù)達(dá)300萬(wàn)[1]。當(dāng)前，臨床尚未明確結(jié)核病具體分子機(jī)制，一般認(rèn)為其和細(xì)胞因子以及免疫調(diào)節(jié)有關(guān)。有研究表明，Th1細(xì)胞分泌白介素-2(IL-2)、γ干擾素(IFN-γ)等因子參與機(jī)體細(xì)胞免疫，白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)屬于前炎細(xì)胞因子，亦可參與結(jié)核病患者免疫病理過(guò)程[2-3]。因?yàn)槿祟?lèi)易感MTB，其一般在宿主體內(nèi)能夠長(zhǎng)時(shí)間潛伏，如果機(jī)體免疫功能減弱，潛伏期肺結(jié)核會(huì)進(jìn)展為活動(dòng)期肺結(jié)核[4-5]。既往研究一般通過(guò)與健康體檢者之間的比較，探究肺結(jié)核病人T細(xì)胞亞群與有關(guān)炎性細(xì)胞因子表達(dá)水平的變化，但鮮少有報(bào)道專(zhuān)門(mén)研究潛伏期和活動(dòng)期肺結(jié)核患者細(xì)胞因子表達(dá)的差異。因此，本文比較了肺結(jié)核潛伏期和活動(dòng)期患者外周血可溶性白介素-2受體(sIL-2R)、IL-6、IFN-γ水平，并分析其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年1月至2020年2月陜西省結(jié)核病防治院收治的82例活動(dòng)期肺結(jié)核患者(活動(dòng)期組)進(jìn)行前瞻性研究。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)與《肺結(jié)核診斷和治療指南》[6]中有關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)相符：①X線胸片發(fā)現(xiàn)活動(dòng)性病灶；②產(chǎn)生結(jié)核中毒癥狀；③痰液檢測(cè)顯示抗酸染色陽(yáng)性至少1次；滿足上述至少2項(xiàng)則確診；(2)具有正常智力與溝通能力。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)伴隨自身免疫性疾病，如艾滋病或者甲狀腺功能亢進(jìn)等；(2)惡性腫瘤患者；(3)合并心肝腎等嚴(yán)重器質(zhì)性病變者；(4)入組前近4個(gè)月內(nèi)接受過(guò)激素、免疫調(diào)節(jié)劑或者抗生素等治療者。選取同期我院收治的82例肺結(jié)核潛伏期患者作為潛伏期組，82例健康體檢正常者作為對(duì)照組。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有受檢者均簽署研究知情同意書(shū)。

1.2 治療方法 對(duì)活動(dòng)期肺結(jié)核患者采取2HREZ/4HR化療方案治療。具體方法：服用異煙肼(國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)：H62020237，生產(chǎn)廠家：甘肅扶正藥業(yè)科技股份有限公司)0.3 g/次，1次/d；服用利福平(國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)：H21020837，生產(chǎn)廠家：沈陽(yáng)抗生素廠)0.6 g/次，1次/d；服用吡嗪酰胺(國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)：H51020877，生產(chǎn)廠家：成都錦華藥業(yè)有限責(zé)任公司)0.75 g/次，2次/d；服用乙胺丁醇(國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)：H21022349，生產(chǎn)廠家：沈陽(yáng)紅旗制藥有限公司)1.0 g/次，1次/d。干預(yù)6個(gè)月，包括強(qiáng)化治療2個(gè)月以及鞏固治療4個(gè)月。

1.3 檢測(cè)方法 潛伏期、活動(dòng)期肺結(jié)核患者初診時(shí)與對(duì)照組體檢當(dāng)天，采集外周靜脈血5 mL，予以離心(3 000 r/min)處理10 min，然后取上清液置于-20℃冰箱里面保存待測(cè)。采取酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行sIL-2R、IL-6、IFN-γ水平檢測(cè)，檢測(cè)試劑盒來(lái)自美國(guó)羅氏公司，嚴(yán)格依據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)完成操作過(guò)程。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS22.0軟件完成數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，多組比較使用單因素方差分析，多組兩兩比較使用LSD-t法，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，治療前后采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組受檢者的一般資料比較 三組受檢者的性別、年齡及身體質(zhì)量指數(shù)(BMI)等一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表1。

表1 三組受檢者的一般資料比較

2.2 三組受檢者的血清sIL-2R、IL-6、IFN-γ水平比較 活動(dòng)期組患者的血清sIL-2R、IL-6、IFN-γ水平明顯高于潛伏期組與對(duì)照組，且潛伏期組明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

表2 三組受檢者的血清sIL-2R、IL-6、IFN-γ水平比較(±s)

表2 三組受檢者的血清sIL-2R、IL-6、IFN-γ水平比較(±s)

注：與對(duì)照組比較，a P＜0.05；與潛伏期組比較，b P＜0.05。

組別活動(dòng)期組潛伏期組對(duì)照組F值P值例數(shù)82 82 82 sIL-2R(pmol/L)186.73±30.25ab 121.60±18.64a 67.84±10.59 634.297 0.001 IFN-γ(ng/L)39.53±7.04ab 18.62±2.56a 10.14±1.65 956.688 0.001 IL-6(ng/L)47.05±6.12ab 9.17±1.35a 2.08±0.37 3648.621 0.001

2.3 不同病灶范圍活動(dòng)期肺結(jié)核患者的血清sIL-2R、IL-6、IFN-γ水平比較 血清sIL-2R為1～2肺野＜3～4肺野＜5～6肺野，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；5～6肺野IFN-γ水平高于1～2肺野與3～4肺野，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而1～2肺野與3～4肺野比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；1～2肺野、3～4肺野與5～6肺野患者IL-6水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表3。

表3 不同病灶范圍活動(dòng)期肺結(jié)核患者的血清sIL-2R、IL-6、IFN-γ水平比較(±s)

表3 不同病灶范圍活動(dòng)期肺結(jié)核患者的血清sIL-2R、IL-6、IFN-γ水平比較(±s)

注：與5～6肺野比較，a P＜0.05；與3～4肺野比較，b P＜0.05。

病灶范圍1～2肺野3～4肺野5～6肺野F值P值例數(shù)34 28 20 sIL-2R(pmol/L)134.05±24.68ab 206.78±35.61a 226.35±40.16 62.597 0.001 IIFN-γ(ng/L)35.62±6.18a 34.53±6.23a 45.89±8.05 19.750 0.001 IL-6(ng/L)46.72±6.08 47.93±6.10 48.07±6.15 0.433 0.650

2.4 有無(wú)空洞活動(dòng)期肺結(jié)核患者的血清sIL-2R、IL-6、IFN-γ水平比較 有空洞與無(wú)空洞患者sIL-2R、IL-6比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；有空洞患者的IFN-γ水平明顯高于無(wú)空洞患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表4。

表4 有無(wú)空洞活動(dòng)期肺結(jié)核患者的血清sIL-2R、IL-6、IFN-γ水平比較(±s)

表4 有無(wú)空洞活動(dòng)期肺結(jié)核患者的血清sIL-2R、IL-6、IFN-γ水平比較(±s)

病情有空洞無(wú)空洞t值P值例數(shù)45 37 sIL-2R(pmol/L)183.64±38.62 185.07±36.48 0.171 0.865 IFN-γ(ng/L)45.12±8.01 36.27±6.25 5.485 0.001 IL-6(ng/L)48.02±6.13 47.18±6.05 0.621 0.536

2.5 活動(dòng)期肺結(jié)核患者治療前后的血清sIL-2R、IL-6、IFN-γ水平比較 活動(dòng)期肺結(jié)核患者治療后的血清sIL-2R、IL-6、IFN-γ水平較治療前明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表5。

表5 活動(dòng)期肺結(jié)核患者治療前后的血清sIL-2R、IL-6、IFN-γ水平比較(±s)

表5 活動(dòng)期肺結(jié)核患者治療前后的血清sIL-2R、IL-6、IFN-γ水平比較(±s)

時(shí)間治療前治療后t值P值例數(shù)82 82 sIL-2R(pmol/L)186.73±30.25 102.46±18.72 31.166 0.001 IFN-γ(ng/L)39.53±7.04 28.15±4.82 17.378 0.001 IL-6(ng/L)47.05±6.12 5.27±0.96 106.874 0.001

3 討論

臨床普遍認(rèn)為，人體免疫系統(tǒng)參與結(jié)核病發(fā)生、進(jìn)一步發(fā)展與轉(zhuǎn)歸，其中IL-6等細(xì)胞因子不僅可啟動(dòng)免疫應(yīng)答，加快感染發(fā)生，同時(shí)在疾病發(fā)展期間還起到調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)作用[7-8]。肺結(jié)核免疫機(jī)制中，以CD4+T淋巴細(xì)胞最關(guān)鍵，當(dāng)其被結(jié)核菌活化，將形成Th1以及Th2細(xì)胞因子，Th1主要合成TNF-α、IL-2等，Th2則主要合成白介素-10(IL-10)與IL-6等。IL-6主要來(lái)自CD4+T淋巴細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞等，其具有多種功能，能夠誘導(dǎo)B細(xì)胞增殖以及分化，同時(shí)在一定程度上激活巨噬細(xì)胞，與人體多種免疫疾病的出現(xiàn)有關(guān)[9]。本研究中，血清IL-6為：活動(dòng)期組＞潛伏期組＞對(duì)照組，表明IL-6可能參與肺結(jié)核的產(chǎn)生?？紤]與結(jié)核感染可損傷到機(jī)體局部，尤其是活動(dòng)期肺結(jié)核，可能過(guò)度激活人體單核巨噬細(xì)胞以及淋巴細(xì)胞，從而分泌大量IL-6進(jìn)行免疫細(xì)胞調(diào)節(jié)有關(guān)[10-11]。

sIL-2R來(lái)自活化淋巴細(xì)胞與相應(yīng)單核細(xì)胞，屬于活化淋巴細(xì)胞膜上的IL-2Rα鏈成分，其從細(xì)胞膜脫落之后進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)，表達(dá)水平的提升會(huì)降低IL-2保護(hù)作用。本研究中，活動(dòng)期組血清sIL-2R明顯高于其余兩組，且潛伏期組明顯高于正常對(duì)照組，提示肺結(jié)核發(fā)展可能與sIL-2R過(guò)度表達(dá)有關(guān)。sIL-2R可能通過(guò)影響IL-2的機(jī)制參與肺結(jié)核發(fā)展：①sIL-2R由細(xì)胞膜表面脫落后，使得膜白介素-2受體減少，IL-2作用的目標(biāo)細(xì)胞隨之減少，以此對(duì)IL-2功能進(jìn)行間接調(diào)節(jié)；②sIL-2R與膜白介素-2受體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合IL-2，促使IL-2廓清加速，降低人體自分泌效應(yīng)，有效抑制T細(xì)胞增殖過(guò)程，降低IL-2依賴的相應(yīng)免疫應(yīng)答反應(yīng)，導(dǎo)致IL-2效應(yīng)細(xì)胞(即NK細(xì)胞)無(wú)法保持原有自然殺傷活性，因此sIL-2R屬于免疫抑制物質(zhì)。有報(bào)道稱，人體血清sIL-2R表達(dá)上調(diào)時(shí)，其作為一種“封閉因子”，能有效結(jié)合IL-2，起到抑制細(xì)胞免疫作用[12]。本研究中，5～6肺野患者sIL-2R水平明顯高于1～2肺野與3～4肺野患者，3～4肺野者明顯高于1～2肺野者，與劉楠等[13]研究觀點(diǎn)一致。說(shuō)明隨病灶范圍增加，肺結(jié)核患者sIL-2R表達(dá)水平升高。分析原因：主要由于sIL-2R分泌增多導(dǎo)致IL-2表達(dá)水平降低，人體抗結(jié)核菌能力減弱，免疫抑制作用加重，病灶范圍擴(kuò)大。

IFN-γ為人體活化T淋巴細(xì)胞以及自然殺傷細(xì)胞所合成免疫調(diào)節(jié)因子，是一種Th1細(xì)胞因子，可以提高巨噬細(xì)胞殺菌能力。相關(guān)文獻(xiàn)指出，相較于健康者，結(jié)核病患者IFN-γ水平呈明顯降低趨勢(shì)[14]。亦有研究表明，肺結(jié)核患者IFN-γ表達(dá)水平較正常對(duì)照組與肺癌組更高[15]。本研究中，活動(dòng)期組與潛伏期組血清IFN-γ水平均異常升高，且活動(dòng)期組升高更顯著，與上述研究觀點(diǎn)一致，表明IFN-γ過(guò)度表達(dá)可能參與肺結(jié)核病程。本研究發(fā)現(xiàn)，IFN-γ表達(dá)水平與結(jié)核病患者病情有關(guān)，當(dāng)病情加重時(shí)，會(huì)分泌更多IFN-γ參與人體抗結(jié)核免疫過(guò)程。主要因?yàn)镮FN-γ可以激活巨噬細(xì)胞有效吞噬病原體，同時(shí)將抗原呈遞給相應(yīng)T淋巴細(xì)胞，使得獲得性細(xì)胞免疫過(guò)程啟動(dòng)，促進(jìn)疾病發(fā)展。有報(bào)道稱，IL-6對(duì)結(jié)核病療效評(píng)估具有重要檢測(cè)價(jià)值[16]。本研究中活動(dòng)期結(jié)核病患者經(jīng)過(guò)治療，血清sIL-2R、IL-6、IFN-γ表達(dá)水平均明顯降低，與上述報(bào)道觀點(diǎn)相符，說(shuō)明sIL-2R、IL-6、IFN-γ屬于活動(dòng)期結(jié)核病患者療效判定重要指標(biāo)，水平降低預(yù)示著病情好轉(zhuǎn)。

綜上所述，肺結(jié)核活動(dòng)期與潛伏期患者血清sIL-2R、IL-6、IFN-γ均異常升高，活動(dòng)期升高更明顯，sIL-2R、IFN-γ、IL-6水平檢測(cè)可用于患者活動(dòng)期病情及臨床療效評(píng)估。