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        外周血CCL26、CCR3表達與變應性鼻炎患者疾病嚴重程度的關系

        2022-06-30 03:33:24熊洪斌楊茜石潤杰
        海南醫(yī)學 2022年12期
        關鍵詞:趨化因子外周血受試者

        熊洪斌,楊茜,石潤杰

        1.上海市奉賢區(qū)奉城醫(yī)院耳鼻喉科,上海 201411;2.上海交通大學醫(yī)學院附屬第九人民醫(yī)院耳鼻喉科,上海 200011

        變應性鼻炎(allergic rhinitis,AR)又被稱為變態(tài)反應性鼻炎或過敏性鼻炎,是指患者接觸到的過敏物質與機體免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)抗體結合發(fā)生橋聯(lián)反應作用于鼻黏膜從而引起患者發(fā)生血管通透性增加、毛細血管擴張等過敏反應[1-2]。AR主要臨床癥狀為連續(xù)性或間歇性打噴嚏、流清水鼻涕、鼻塞、嗅覺暫時性減退等,雖然不會危及患者的生命安全,但嚴重影響患者的生活質量。目前,關于AR的診斷主要依賴于臨床癥狀評分,但可能存在患者過度描述臨床癥狀,無法準確判斷AR,因此,尋找與AR有關的生物標志物成為目前研究的熱點[3-4]。趨化因子配體26(chemokine C-C motif ligand 26,CCL26)又叫嗜酸性粒細胞趨化因子3(eosinophil chemotactic factor-3,eotaxin-3),屬于CC家族重要成員之一。有研究表明,CCL26在炎癥反應、過敏反應等發(fā)揮重要作用[5],其與CC趨化因子受體-3(C-C chemokine receptor-3,CCR3)結合后,特異性激活嗜酸性粒細胞向炎癥趨化,釋放組織胺等炎性介質從而參與炎癥反應和過敏性反應。CCR3是一種非特異性受體蛋白,除了作為CCL26的受體發(fā)揮作用之外,也可作為嗜酸性粒細胞趨化因子1(eosinophil chemotactic factor-1,eotaxin-1)、嗜酸性粒細胞趨化因子2(eosinophil chemotactic factor-2,eotaxin-2)等其他CC趨化因子的受體來發(fā)揮不同生物學功能[6]。本研究通過檢測AR患者CCL26、CCR3表達水平,探討其與AR疾病嚴重程度的關系。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 選取2018年1月至2020年1月在上海市奉賢區(qū)奉城醫(yī)院耳鼻喉科收治的86例AR患者作為研究對象(研究組)。納入標準:①符合《AR診斷和治療指南》中關于AR的診斷標準[7];②入院前未接受抗組胺、免疫等治療;③知情同意并簽署同意書;④臨床資料完整。排除標準:①伴有肝臟、肺腎等重要器官疾?。虎诤喜⒈歉]炎、哮喘等過敏性疾病;③合并自身免疫性疾病;④合并精神疾病。86例患者中男性45例,女性41例;年齡24~57歲,平均(34.49±4.71)歲。根據《變應性鼻炎及其對哮喘的影響》中的分類標準[8]將所有AR患者分為輕度AR組(30例)、中度AR組(27例)和重度AR組(29例)。另選取同時期在我院保健科體檢的91例健康志愿者作為對照組,其中男性46例,女性45例;年齡22~53歲,平均(35.91±4.66)歲。評價所有受試者的過敏性鼻炎評分量表(Score for Allergic Rhinitis,SFAR)評分。研究組和對照組受檢者的性別和年齡比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本研究經上海市奉賢區(qū)奉城醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準。

        1.2 檢測方法

        1.2.1 樣本采集 采集所有受試者空腹靜脈血4 mL,以3 000 r/min離心15 min后分離血清,并置于-80℃環(huán)境中保存待測。清晨空腹肘靜脈血置于乙二胺四乙酸抗凝管中,2 000 r/min離心15 min分離出血漿。

        1.2.2 檢測外周血CCL26、CCR3表達水平 采用ELISA法測定各組受試者外周血CCL26的表達水平,嚴格按照試劑盒說明書進行操作,CCL26試劑盒購自上海瓦蘭生物科技有限公司。采用流式細胞分析儀檢測外周血CCR3相對表達量,首先加入CCR3-FITC(10 mL)試劑至指標試管中,隨后將血漿100 mL加入至試驗檢測試管中,設有同型號對照試管,搖勻后,25℃避光孵育20 min,隨后加入溶血素2 mL,25℃避光放置5 min,離心后(1 000 r/min離心5 min)丟掉上清液,加磷酸鹽緩沖溶液(PBS)2 mL,再一次離心丟掉上清液,添加300 mL PBS溶液,搖勻,采用流式細胞儀(型號:BD FACSCalibur)上機檢測分析外周血CCR3在血漿中的表達。流式細胞分析儀(型號:BD FACSCalibur)購自美國BD公司。

        1.3 觀察指標 比較兩組受試者外周血CCL26、CCR3表達水平、不同臨床參數(shù)AR患者外周血CCL26、CCR3表達水平以及不同程度AR患者外周血CCL26、CCR3表達水平;分析AR患者外周血CCL26、CCR3表達水平與SFAR評分的相關性;分析CCL26、CCR3對AR的診斷價值;分析影響AR的危險因素。

        1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS25.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據。計量資料符合正態(tài)分布,以均數(shù)±標準差(±s)表示,組間兩兩比較采用t檢驗,多組間比較采用單因素方差分析;AR患者外周血CCL26、CCR3表達水平與SFAR評分的相關性采用Pearson相關分析法分析;CCL26、CCR3對AR的診斷價值采用受試者工作特征曲線(ROC)曲線分析;影響AR發(fā)生的危險因素采用多因素Logistic回歸分析。檢驗水準取α=0.05,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

        2 結果

        2.1 兩組受試者的外周血的CCL26、CCR3表達水平比較 與對照組比較,研究組患者外周血CCL26、CCR3表達水平明顯升高,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表1。

        表1 兩組受試者的外周血CCL26、CCR3表達水平比較(±s)

        表1 兩組受試者的外周血CCL26、CCR3表達水平比較(±s)

        組別對照組研究組t值P值例數(shù)91 86 CCL26(ng/L)2.44±0.39 4.83±1.07 19.954 0.001 CCR3(%)20.41±5.39 40.63±9.25 17.887 0.001

        2.2 不同臨床參數(shù)AR患者外周血CCL26、CCR3表達水平比較 不同性別、年齡、變應原、癥狀發(fā)作時間的AR患者外周血CCL26、CCR3表達水平比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05);IgE陽性者外周血CCL26、CCR3表達水平明顯低于IgE陰性者,SFAR<7者外周血CCL26、CCR3表達水平明顯低于SFAR≥7者,差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表2。

        表2 不同臨床參數(shù)AR患者外周血CCL26、CCR3表達水平比較(n=86,±s)

        表2 不同臨床參數(shù)AR患者外周血CCL26、CCR3表達水平比較(n=86,±s)

        項目性別(例)男女年齡(歲)<36≥36變應原季節(jié)性常年性有無癥狀發(fā)作時間間接性持續(xù)性IgE陽性陰性SFAR<7≥7例數(shù)45 41 40 46 51 35 48 38 33 53 55 31 30 56 CCL26(ng/L)3.12±0.99 3.25±1.01 3.33±1.05 3.32±1.02 3.11±0.89 3.51±1.25 4.19±1.86 3.41±1.30 4.02±1.56 4.21±1.64 4.96±1.42 3.87±1.49 3.16±0.87 4.13±1.55 t值0.602 0.045 0.946 1.734 0.087 0.532 0.596 3.358 0.001 3.165 0.002 P值0.549 CCR3(%)41.52±8.31 40.91±9.04 39.69±8.07 40.12±8.81 40.32±8.97 41.01±9.11 41.98±9.64 33.21±8.99 42.35±8.91 42.12±8.77 50.94±9.98 42.56±9.74 35.44±8.78 49.96±9.67 t值0.326 0.235 0.815 0.348 0.729 0.118 0.907 3.771 0.001 6.847 0.001 P值0.745

        2.3 不同程度AR患者外周血CCL26、CCR3表達水平比較 與輕度AR組比較,中度AR組、重度AR組患者外周血CCL26、CCR3表達水平升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),與中度AR組比較,重度AR組患者外周血CCL26、CCR3表達水平升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表3。

        表3 不同程度AR患者外周血CCL26、CCR3表達水平比較(±s)

        表3 不同程度AR患者外周血CCL26、CCR3表達水平比較(±s)

        注:與輕度AR組比較,a P<0.05;與中度AR組比較,b P<0.05。

        組別輕度AR組中度AR組重度AR組F值P值例數(shù)30 27 29 CCL26(ng/L)3.86±0.97 4.99±1.02a 5.69±1.23ab 21.616 0.001 CCR3(%)35.44±8.66 40.21±9.45a 46.38±9.68ab 10.326 0.001

        2.4 AR患者外周血CCL26、CCR3表達水平與SFAR評分的相關性 經Pearson相關分析法分析結果顯示,CCL26、CCR3表達水平與SFAR評分均呈正相關(r=0.657、0.686,P<0.01),見圖1。

        圖1 CCL26、CCR3與SFAR評分的相關性

        2.5 CCL26、CCR3對AR發(fā)生的診斷價值 ROC曲線結果顯示,外周血CCL26診斷AR發(fā)生的ROC曲線下面積(area under the curve,AUC)為0.697(0.618~0.777),敏感度為51.2%,特異性為87.9%,截斷值為2.914 ng/L;CCR3診斷AR發(fā)生的AUC為0.752(0.678~0.827),敏感度為62.8%,特異性為84.6%,截斷值為31.197;兩者聯(lián)合檢測的AUC為0.833(0.769~0.897),敏感度為73.3%,特異性為86.8%,見圖2。

        圖2 ROC曲線

        2.6 影響AR發(fā)生的危險因素 將是否患有AR作為因變量(未發(fā)生為0,發(fā)生為1),以CCL26水平、CCR3表達水平作為自變量進行多因素Logistic回歸分析,結果顯示,外周血CCL26、CCR3表達水平是影響AR發(fā)生的獨立危險因素(P<0.05),見表4。

        表4 影響AR發(fā)生的多因素Logistic回歸分析

        3 討論

        AR是耳鼻咽喉頭頸外科常見的非感染性炎性疾病之一。AR嚴重影響患者的正常生活和工作。世界上約有5億人罹患AR,占全人類的10%~20%[9]。有研究表明,我國19個一線城市的AR發(fā)病率為4%~38%,且呈上升趨勢[10]。目前AR的診斷主要依賴臨床癥狀評分,然而該方法存在主觀性,AR病情無法得以準確判斷,因此尋找客觀有效的生物學指標以評估AR病情成為當前研究的熱點[11-12]。

        CCL26由77個氨基酸組成,能使炎癥細胞聚集,造成炎癥反應和過敏性反應。其主要通過與CCR3結合而發(fā)揮作用,兩者存在一定的協(xié)同作用。CCL26水平升高說明機體發(fā)生炎癥反應。研究表明,CCL26與遲發(fā)型變態(tài)反應有關,且可作為評估急、慢性炎癥嚴重程度的生物學指標[13]。劉鈺等[14]研究結果表明,急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)患者血清CCL26水平遠高于正常人,其表達水平隨ARDS病情的加重而升高,且ARDS死亡患者血清CCL26水平明顯高于存活患者。肖雷等[15]研究結果表明,支氣管哮喘急性期患兒血清CCL26水平明顯高于哮喘緩解期患兒,且其水平隨哮喘病情的加重而升高。本研究中,與對照組比較,研究組AR患者外周血CCL26水平明顯升高,隨AR病情的加重而升高。且Pearson相關分析法分析顯示AR患者外周血CCL26水平與SFAR評分呈正相關,與前述研究結果相近,提示CCL26的表達在AR的發(fā)生發(fā)展中起到一定作用,且CCL26可反映AR病情嚴重程度。此外,本研究中多因素Logistic回歸分析表明,CCL26是AR發(fā)生的獨立危險因素,提示CCL26可作為診斷AR發(fā)生的輔助指標。

        CCR3是一種含7次跨膜結構的G蛋白耦聯(lián)非特異性受體,是CC型趨化因子的唯一受體。eotaxin-1、eotaxin-2、CCL26、單核細胞趨化因子、CCL5等均通過與CCR3結合后發(fā)揮作用。研究表明,eotaxins幾乎都是通過CCR3介導而發(fā)揮對嗜酸性粒細胞的趨化作用,且CCR3還能夠激活Th2細胞亞群,使其大量釋放炎性因子從而發(fā)生炎癥反應[16]。楊艷等[17]研究結果表明,慢性自發(fā)性蕁麻疹患者CCR3表達水平明顯高于健康者。DE CAMPOS等[18]研究顯示持續(xù)性變應性鼻炎患者鼻黏膜中CCR3表達水平上調。本研究結果顯示,與對照組比較,研究組AR患者外周血CCR3表達水平明顯升高,其水平隨AR病情的加重而升高。經Pearson相關分析法分析結果顯示AR患者外周血CCR3表達水平與SFAR評分呈正相關,與前述研究結果相近,提示CCR3表達水平與AR發(fā)生發(fā)展有關。CCR3可反映AR病情嚴重程度,推測可能是CCR3介導嗜酸性粒細胞聚集,而后激活的嗜酸性粒細胞通過釋放炎性介質參與炎癥性疾病的發(fā)生。多因素Logistic回歸分析表明,CCL26是AR發(fā)生的獨立危險因素,提示CCR3可輔助診斷AR的發(fā)生。

        此外,經ROC曲線分析結果顯示,CCL26診斷AR患者的AUC為0.697,取最佳診斷界值2.914 ng/L時,相應的敏感度為51.2%,特異性為87.9%;CCR3診斷AR患者的AUC為0.752,取最佳診斷界值31.197時,相應的敏感度為62.8%,特異性為84.6%;兩者聯(lián)合檢測的AUC為0.833,敏感度為73.3%,特異性為86.8%。這說明CCL26、CCR3表達水平檢測對AR的診斷具有一定價值,但兩種方法聯(lián)合檢測優(yōu)于單獨一種方法檢測。

        綜上所述,CCL26、CCR3的表達水平與AR的發(fā)生有關,且其可判斷AR病情的嚴重程度,并為AR患者的診斷提供理論依據。

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