巫翠云，魏小斌，杜梅英，范維麗，趙慶珠，翁雪燕

（1.中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬海口醫(yī)院檢驗(yàn)科；2.中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬?？卺t(yī)院內(nèi)分泌科，海南海口 570208）

糖尿病是由遺傳、環(huán)境、行為等多種因素誘發(fā)的代謝性疾病，臨床以胰島素分泌不足或胰島作用障礙為特征，導(dǎo)致血糖水平異常升高。糖尿病呈進(jìn)行性發(fā)展，最終可累及微血管和周圍神經(jīng)，導(dǎo)致不良預(yù)后的發(fā)生[1]。而糖尿病的分型診斷是開(kāi)展精準(zhǔn)治療的前提，我國(guó)糖尿病以2型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus，T2DM）最為常見(jiàn)，該病起病緩慢，臨床具有較大異質(zhì)性[2]。但臨床偶見(jiàn)1型糖尿?。╰ype 1 diabetes mellitus，T1DM）和成人隱匿性自身免疫性糖尿?。╨atent autoimmune diabetes in adults，LADA）。不同分型糖尿病臨床癥狀相似[3]，既往報(bào)道顯示，抗體檢測(cè)有助于不同糖尿病分型的鑒別診斷[4]。鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白8抗體（ZnT8A）自2007年被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，有關(guān)其在糖尿病發(fā)病機(jī)制中的認(rèn)識(shí)不斷深入[5]，酪氨酸磷酸酶抗體（IA-2A）屬Ⅰ型跨膜黏蛋白，有報(bào)道顯示，其在LADA患者中呈異常高表達(dá)[6]。推測(cè)ZnT8A、IA-2A可能有助于糖尿病分型的鑒別診斷。為驗(yàn)證這一結(jié)果，本研究探討兩者在糖尿病分型鑒別診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020年3月至2022年1月中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬海口醫(yī)院收治的314例糖尿病患者，根據(jù)不同分型將患者分為T1DM組（23例，1型糖尿病）、T2DM組（279例，2型糖尿病）和LADA組（12例，成人隱匿性自身免疫性糖尿?。磉x取同期院內(nèi)30例健康體檢者作為對(duì)照組進(jìn)行回顧性分析。T1DM組患者中男性9例，女性14例；年齡12～81歲，平均年齡（53.92±17.64）歲；體質(zhì)量指數(shù)（BMI）20.80～26.50 kg/m2，平均BMI（22.96±1.79）kg/m2；糖尿 病 家族 史7例。T2DM組患者中男性161例，女性118例；年齡15～83歲，平均年齡（52.08±15.72）歲；BMI 21.00～26.20 kg/m2，平均BMI（23.02±1.84）kg/m2；糖尿病家族史72例。LADA組患者中男性8例，女性4例；年齡24～75歲，平均年齡（52.20±15.23）歲；BMI 21.10～26.45 kg/m2,平均BMI（23.34±1.80）kg/m2；糖尿病家族史4例。對(duì)照組研究對(duì)象中男性17例，女性13例；年齡21～75歲，平均年齡（53.16± 14.84）歲；BMI 20.50～26.00 kg/m2，平均BMI（23.12±1.77）kg/m2；空腹血糖在參考范圍內(nèi)，無(wú)自身免疫性疾病。4組研究對(duì)象性別、年齡、BMI及糖尿病家族史等一般資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），組間具有可比性。本研究經(jīng)中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)附屬?？卺t(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者均符合《中國(guó)2型糖尿病防治指南(2017年版)》[7]中糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②臨床病例資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①繼發(fā)性糖尿病者；②合并惡性腫瘤者；③妊娠或哺乳期患者；④肝、腎功能嚴(yán)重不全或有嚴(yán)重心、肺基礎(chǔ)疾病者。

1.2 檢測(cè)方法 ①標(biāo)本采集：抽取研究對(duì)象清晨空腹肘靜脈血3 mL，采用離心機(jī)（科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司，型號(hào)：KDC-40型）對(duì)血液標(biāo)本以2 500 r/min離心5 min，取上清液，冷凍保存?zhèn)溆谩＂诿庖哂≯E檢測(cè)：取出試劑盒，將抗原膜條置于孵育槽內(nèi)，每槽加1.5 mL樣本緩沖液，均勻搖晃5 min后棄孵育槽內(nèi)的液體；在每槽內(nèi)加1.5 mL解凍稀釋后的血清樣品，將膜條置于搖擺床，輕微搖晃孵育30 min；棄孵育槽內(nèi)液體，在每槽內(nèi)加1.5 mL清洗緩沖液，將膜條置于搖擺床上，輕微搖晃5 min，去孵育槽內(nèi)液體，重復(fù)洗滌2次；棄孵育槽內(nèi)液體，每槽加1.5 mL稀釋后的酶結(jié)合物，將膜條置于搖擺床上輕微搖晃，孵育30 min；棄孵育槽內(nèi)液體，每槽加1.5mL底物液，在室溫下將膜條置于搖擺床上孵育10 min；棄孵育槽內(nèi)液體，每槽加1.5 mL蒸餾水，室溫下將膜條置于搖擺床上輕微搖晃1 min，棄孵育槽內(nèi)液體，重復(fù)洗滌2次。待膜條干燥后將膜條檢測(cè)帶與標(biāo)準(zhǔn)帶結(jié)果進(jìn)行對(duì)照，記錄檢測(cè)結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo) ①比較4組研究對(duì)象ZnT8A和IA-2A陽(yáng)性率。②分析ZnT8A和IA-2A在鑒別診斷不同糖尿病分型中的價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料以（x）表示，多組間比較行方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以[例(%)]表示，組間比較行χ2檢驗(yàn)。ZnT8A和IA-2A的診斷價(jià)值采用受試者工作曲線（ROC）分析，結(jié)果以曲線下面積（AUC）表示，以AUC＞0.75為準(zhǔn)確性高。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4組研究對(duì)象ZnT8A和IA-2A陽(yáng)性率比較 T1DM組研究對(duì)象ZnT8A陽(yáng)性率顯著高于其他3組，IA-2A陽(yáng)性率顯著高于T2DM組和對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。T1DM組與LADA組研究對(duì)象IA-2A陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 4組研究對(duì)象ZnT8A和IA-2A陽(yáng)性率比較[例(%)]

2.2 ZnT8A和IA-2A判斷T1DM價(jià)值分析 分別以ZnT8A、IA-2A及二者聯(lián)合預(yù)測(cè)概率為檢驗(yàn)變量，以是否為T1DM為狀態(tài)變量，繪制ROC曲線，見(jiàn)圖1。ROC分析結(jié)果顯示，ZnT8A與IA-2A單項(xiàng)指標(biāo)對(duì)判斷T1DM具有一定價(jià)值（P＜0.05），二者聯(lián)合預(yù)測(cè)概率對(duì)診斷T1DM具有較高準(zhǔn)確性（AUC＞0.75，P＜0.05），ZnT8A與IA-2A聯(lián)合預(yù)測(cè)概率判斷T1DM的AUC值顯著高于ZnT8A、IA-2A單一指標(biāo)（z=-2.291，1.978；P=0.008，0.014），見(jiàn)表2。

表2 ZnT8A和IA-2A判斷T1DM價(jià)值分析

圖1 ZnT8A和IA-2A判斷T1DM的ROC曲線

3 討論

近年來(lái)，隨著人們物質(zhì)生活水平的不斷提高和生活方式的日益多樣化，糖尿病發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，糖尿病已成為威脅人們生命健康的嚴(yán)重公共衛(wèi)生問(wèn)題[8]。本研究共選取314例糖尿病患者為研究對(duì)象，其中T2DM患者例數(shù)最多，有279例，占88.85%，與既往報(bào)道一致[9]。隨著人們對(duì)糖尿病認(rèn)知的不斷深入，糖尿病分型也不斷地更新。既往糖尿病分型主要基于患者臨床癥狀和血清胰島素含量，而LADA像是從T2DM向T1DM的過(guò)渡[10]。隨著臨床經(jīng)驗(yàn)的積累和檢測(cè)技術(shù)進(jìn)步，糖尿病自身抗體譜試劑盒出現(xiàn)和推廣，臨床分型傾向于檢測(cè)血清免疫標(biāo)記物表達(dá)情況。患者血清存在糖尿病自身抗體是T1DM和LADA的特點(diǎn)之一。自身抗體免疫學(xué)檢測(cè)被認(rèn)為具有自身免疫性疾病預(yù)測(cè)作用。因而，及時(shí)、準(zhǔn)確地發(fā)現(xiàn)體內(nèi)糖尿病自身抗體將有助于糖尿病分型診斷，以最大程度地保護(hù)胰島細(xì)胞功能，延緩病情進(jìn)展。

ZnT8A主要分布在胰島β細(xì)胞內(nèi)含有胰島素顆粒的囊泡膜上，胰島素顆粒中的Zn2+累積會(huì)影響胰島素的正常分泌、儲(chǔ)存。研究顯示，Zn2+與糖尿病早期發(fā)病的關(guān)系密切，而鋅的轉(zhuǎn)運(yùn)需要大量高效的鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體來(lái)完成[11]。ZnT8A通過(guò)影響胰島素中Zn2+聚集，調(diào)節(jié)胰高血糖素和胰島素旁分泌。低鋅血癥在糖尿病患者中較為常見(jiàn)，而鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體高表達(dá)多提示鋅含量及顆粒細(xì)胞儲(chǔ)存能力增強(qiáng)。在胰島β細(xì)胞自身免疫反應(yīng)中，ZnT8A屬典型自身抗原，ZnT8A作為異常體液免疫應(yīng)答對(duì)胰島β細(xì)胞進(jìn)行攻擊的重要標(biāo)志[12]，可作為其診斷的預(yù)警信息，在T1DM患者出現(xiàn)臨床癥狀之前，可以早期預(yù)測(cè)并指導(dǎo)臨床治療。

IA -2A代表胰島β細(xì)胞的特異性免疫。這種抗體是自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞的靶分子，主要在腦和胰腺中發(fā)揮作用，能以較高敏感度和特異度反映β細(xì)胞損傷引起的早期發(fā)病[13-14]。LADA早期臨床特點(diǎn)與T2DM類似，成為誤診、漏診的原因[15]。因LADA病程長(zhǎng)、臨床癥狀出現(xiàn)晚，多數(shù)患者在檢測(cè)糖尿病自身抗體時(shí)才發(fā)現(xiàn)體內(nèi)存在自身抗體，此時(shí)患者胰島細(xì)胞已被破壞[16]。

本研究結(jié)果也顯示，T1DM組研究對(duì)象ZnT8A陽(yáng)性率顯著高于其他3組，IA-2A陽(yáng)性率顯著高于T2DM組和對(duì)照組，提示檢測(cè)ZnT8A與IA-2A可能有助于糖尿病的分型診斷；而進(jìn)一步ROC分析顯示，ZnT8A與IA-2A聯(lián)合預(yù)測(cè)判斷T1DM的敏感度達(dá)0.867，提示兩者聯(lián)合檢測(cè)可彌補(bǔ)IA-2A單項(xiàng)檢測(cè)難以鑒別LADA與T1DM的不足，這對(duì)于糖尿病分型診斷具有重要價(jià)值。

綜上，ZnT8A與IA-2A與糖尿病發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，兩者聯(lián)合檢測(cè)有助于糖尿病分型的診斷和鑒別診斷，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。