沈海濤，焦榮紅，姚曉陽(yáng)

1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬第七人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 200137；2.上海市浦東新區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 201299

垂體腺瘤是顱內(nèi)最常見的良性腫瘤之一，可分泌包括催乳素、生長(zhǎng)激素(GH)、促甲狀腺素等多種激素，造成患者內(nèi)分泌功能的紊亂[1]。其中，GH型垂體腺瘤是垂體腺瘤中的常見類型，可分泌過多的GH，造成患者肢端肥大癥等綜合征[2]。目前，GH型垂體腺瘤的發(fā)病機(jī)制及預(yù)后的影響因素尚不明確，因此，探尋可早期預(yù)測(cè)GH型垂體腺瘤的生理指標(biāo)具有重要意義[3]。既往研究表明，微小RNA(miR)-423-5P能夠抑制垂體腺瘤細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡，在GH3細(xì)胞中發(fā)揮重要作用[4]；miR-212是近期發(fā)現(xiàn)的一種miRNA，在腫瘤細(xì)胞凋亡、免疫應(yīng)答及惡性膠質(zhì)瘤的抗輻射特性中具有重要作用[5]。因此，推測(cè)miR-423-5p、miR-212與GH型垂體腺瘤細(xì)胞的增殖與治療效果有關(guān)，但二者與GH型垂體腺瘤患者的預(yù)后關(guān)系尚不明確。因此，本研究通過檢測(cè)GH型垂體腺瘤患者血清中miR-423-5p、miR-212表達(dá)水平并分析二者與其預(yù)后的關(guān)系，旨在為今后臨床工作中評(píng)估GH型垂體腺瘤患者預(yù)后提供一定的參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2018年1月至2020年1月收治的GH型垂體腺瘤患者為研究對(duì)象，以中國(guó)垂體腺瘤協(xié)作組牽頭制定的《肢端肥大癥診治中國(guó)專家共識(shí)(2020版)》為診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷[6]。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)過術(shù)后病理證實(shí)；(2)所有患者對(duì)本研究知情，自愿參加本研究并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并肝、腎、心等重要臟器功能不全；(2)合并其他良、惡性腫瘤的患者；(3)合并其他內(nèi)分泌疾??；(4)嚴(yán)重傳染性疾病，不適宜參加本研究的患者。隨訪結(jié)束后，共有108例患者納入本研究，根據(jù)患者血清中GH水平與MRI影像學(xué)資料，64例患者評(píng)價(jià)為緩解，44例患者評(píng)價(jià)為未緩解。其中，緩解組患者中男38例、女26例，平均年齡(31.36±8.72)歲；對(duì)照組中男20例、女24例，平均年齡(29.43±7.88)歲。兩組患者性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2主要試劑 miRNeasy Serum/Plasma Kit(德國(guó)QIAGEN公司)；SYBR PrimeScriptTMmiRNA RT-PCR Kit(德國(guó)QIAGEN公司)。

1.3方法

1.3.1樣本收集 采集觀察組及對(duì)照組清晨空腹肘正中靜脈血5 mL置于EDTA抗凝管中，室溫靜置并離心后吸取血清并立即存放于-80 ℃冰箱中保存以備后續(xù)試驗(yàn)。

1.3.2血清總RNA提取、反轉(zhuǎn)錄及PCR 使用miRNeasy Serum/Plasma Kit血液RNA提取試劑盒提取各組血清，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，通過分光光度儀檢測(cè)所提取RNA的A260/A280值，當(dāng)該值為1.9～2.1時(shí)逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。根據(jù)SYBR PrimeScriptTMmiRNA RT-PCR Kit試劑盒說明書配制反應(yīng)體系，以95 ℃ 10 min、62 ℃ 30 s、72 ℃ 30 s為反應(yīng)體系，共反應(yīng)45個(gè)循環(huán)，以U6作為內(nèi)參照，采用2-ΔΔCt方法計(jì)算miR-423-5p與miR-212相對(duì)表達(dá)水平，反應(yīng)體系所使用引物序列見表1。

表1 引物序列

1.4治療 本研究患者均采用內(nèi)鏡下經(jīng)鼻蝶垂體腺瘤切除術(shù)進(jìn)行治療，手術(shù)由本科室主任醫(yī)師完成，術(shù)后常規(guī)止痛等對(duì)癥支持治療。

1.5隨訪方法及評(píng)估標(biāo)準(zhǔn) 以術(shù)后次日為隨訪起點(diǎn)，通過電話、短信及門診復(fù)查方式進(jìn)行隨訪，隨訪周期為6個(gè)月，并根據(jù)患者預(yù)后，分為緩解組(即預(yù)后良好)與未緩解組(即預(yù)后不良)。所有患者評(píng)價(jià)預(yù)后為緩解的標(biāo)準(zhǔn)如下：(1)隨訪期內(nèi)患者空腹GH<10 μg/L；(2)隨訪期內(nèi)患者頭顱MRI未見復(fù)發(fā)。根據(jù)隨訪結(jié)果，將患者分為緩解組與未緩解組。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者血清miR-423-5p與miR-212表達(dá)水平比較 PCR結(jié)果顯示，與緩解組相比，未緩解組患者血清miR-212與miR-423-5p表達(dá)水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者血清miR-423-5p與miR-212表達(dá)水平比較

2.2血清miR-423-5p與miR-212對(duì)GH型垂體腺瘤患者預(yù)后評(píng)價(jià) ROC曲線顯示，血清miR-212水平預(yù)測(cè)GH型垂體腺瘤患者預(yù)后的曲線下面積為0.857，此時(shí)其靈敏度為85.2%，特異度為90.3%；血清miR-423-5p水平預(yù)測(cè)GH型垂體腺瘤患者預(yù)后的曲線下面積為0.829，此時(shí)其靈敏度為72.3%，特異度為78.4%。

3 討 論

GH型垂體腺瘤是功能性垂體腺瘤中的一類，是常見的鞍區(qū)腫瘤之一[7]。GH型垂體腺瘤不僅能夠引起鞍區(qū)占位效應(yīng)，導(dǎo)致顱內(nèi)壓增高、頭痛及視乳頭水腫，還可因?yàn)榉置谶^量的GH導(dǎo)致巨人癥與肢端肥大癥，部分患者還會(huì)引起糖耐量降低、睡眠障礙與睡眠呼吸暫停等癥狀[8]。目前，GH型垂體腺瘤的治療主要以手術(shù)治療為主，部分患者可采取生長(zhǎng)抑素類藥物治療，或手術(shù)輔助藥物治療等手段[9]。近年來，隨著神經(jīng)內(nèi)鏡技術(shù)的不斷發(fā)展，手術(shù)治療垂體腺瘤能夠獲得較為滿意的療效，但是少部分患者仍然存在GH水平過高或腫瘤易復(fù)發(fā)等問題，對(duì)GH型垂體腺瘤患者預(yù)后的預(yù)測(cè)仍然缺乏有效手段[10]。既往研究表明，miRNA在許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要的生物學(xué)作用，兩者之間具有密切關(guān)系，miRNA常常參與基因的轉(zhuǎn)錄與調(diào)控，起到類似原癌基因或抑癌基因的作用[11]。此外，miR-212可通過調(diào)控c-Met水平抑制腫瘤細(xì)胞的增殖與侵襲，從而在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起到抑癌基因的作用[12]。有研究顯示，GH型垂體腺瘤患者體內(nèi)miR-212的表達(dá)水平明顯下調(diào)，提示miR-212可能與GH型垂體腺瘤的發(fā)生與發(fā)展關(guān)系密切[13]。趙斯達(dá)等[14]通過研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)比GH型垂體腺瘤與對(duì)照組血清miRNA表達(dá)水平差異，共找到169個(gè)差異表達(dá)的miRNA，其中miR-423-5p在GH型垂體腺瘤中低表達(dá)；經(jīng)過對(duì)比后發(fā)現(xiàn)，miR-423-5p具有抑制GH型垂體腺瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)其凋亡并減少GH釋放的作用。細(xì)胞凋亡在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中具有重要作用，而研究已經(jīng)證實(shí)，miR-212與細(xì)胞凋亡關(guān)系密切[15]。既往研究表明，在前列腺癌患者中，其腫瘤組織與癌旁組織內(nèi)miR-212的表達(dá)水平不同，腫瘤組織內(nèi)miR-212水平顯著降低，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)miR-212能夠顯著提高前列腺癌細(xì)胞的凋亡水平[16]。同時(shí)有研究表明，miR-212在乳腺癌組織中表達(dá)水平顯著降低，上調(diào)其表達(dá)水平能夠顯著抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖及侵襲能力并促進(jìn)其凋亡。有研究顯示，在GH型垂體腺瘤中，miR-212同樣發(fā)揮類似“抑癌基因”作用，及機(jī)制可能與其能夠促進(jìn)垂體腺瘤細(xì)胞凋亡有關(guān)[17]，但具體機(jī)制尚不明確。本研究結(jié)果顯示，未緩解組患者血清中miR-212表達(dá)水平降低，這與既往研究結(jié)果一致。盡管miR-212在調(diào)控GH型垂體腺瘤的作用機(jī)制尚不是十分清楚，但結(jié)合既往在其他腫瘤中的研究，其分子機(jī)制可能與miR-212對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡的調(diào)控有關(guān)[18]。

既往研究表明，miR-423-5p在多種腫瘤組織中表達(dá)異常，參與多種腫瘤組織的發(fā)生及發(fā)展，且在不同腫瘤組織中發(fā)揮不同的生物學(xué)功能，例如，miR-423-5p在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中高表達(dá)，下調(diào)miR-423-5p的表達(dá)水平可抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖并抑制腫瘤增長(zhǎng)；相反，上調(diào)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的miR-423-5p表達(dá)則會(huì)增強(qiáng)細(xì)胞的增殖及侵襲能力[14-15]。外源性miR-423-5p能夠提高胃癌細(xì)胞的異型性，并能夠增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的侵襲能力[19-20]。但是，miR-423-5p在GH型垂體腺瘤組織中發(fā)揮的作用鮮有報(bào)道，miR-423-5p對(duì)GH型垂體腺瘤細(xì)胞的生物學(xué)功能尚不清楚。本研究對(duì)兩種預(yù)后結(jié)局患者血清中miR-423-5p表達(dá)水平進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)緩解組患者血清中miR-423-5p表達(dá)水平較未緩解組患者血清高，說明在GH型垂體腺瘤組織中miR-423-5p的表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞具有促進(jìn)作用，但其作用機(jī)制尚不明確，也可能與本研究的樣本量較少，術(shù)后隨訪時(shí)間較短有關(guān)。

綜上所述，GH型垂體腺瘤患者血清miR-212與miR-423-5p表達(dá)水平與患者預(yù)后有關(guān)，二者的表達(dá)水平對(duì)GH型垂體腺瘤患者的預(yù)后具有一定的診斷價(jià)值。