劉蘭鳳， 劉海燕， 田斌， 王曉榮， 梁紅

(衡水市第五人民醫(yī)院，河北省衡水市 053000)

高敏肌鈣蛋白T(high-sensitivity cardiac troponin T，hs-cTnT)是心肌損傷標(biāo)志物，在急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome,ACS)早期診斷中具有重要價值[1]。微小RNA(miRNAs)可通過靶基因調(diào)控心肌細(xì)胞增殖和凋亡，在心血管疾病中發(fā)揮重要作用，有研究發(fā)現(xiàn)，ACS患者血清miR-208a水平升高，與cTnT水平呈正相關(guān)[2]，對ACS早期有一定診斷價值。miR-448屬于miRNA的一種，研究顯示，大鼠脊髓缺血再灌注損傷模型中miR-448表達(dá)上調(diào)[3]。然而miR-448在ACS患者中的研究尚未見報道，本文研究胸痛ACS患者血清hs-cTnT、miR-448水平的變化，進(jìn)一步探討其在ACS臨床診斷中的意義。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選擇本院2018年6月—2021年6月因胸痛入院的ACS患者206例為ACS組，其中不穩(wěn)定型心絞痛(unstable angina pectoris，UAP)31例、ST段抬高型心肌梗死(ST-segment elevation myocardial infarction，STEMI)142例、非STEMI(non-STEMI，NSTEMI)33例；根據(jù)冠狀動脈造影Gensini評分[4]將其分為輕度、中度、重度狹窄組。選擇同期因胸痛入院的非ACS患者(非冠心病患者)100例為對照組。收集所有觀察對象年齡、性別、高血壓病史、糖尿病史、吸煙史等臨床資料。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)，患者簽署知情同意書。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合歐洲心臟病協(xié)會(ESC)和美國心臟病學(xué)會(ACC)診斷標(biāo)準(zhǔn)[5-6]；②ACS均為首次發(fā)病，且經(jīng)冠狀動脈造影確診；③臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①陳舊性心肌梗死、心臟瓣膜病、心源性休克病史；②近期使用免疫抑制劑、免疫增強(qiáng)劑；③合并其他心功能不全、血液系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤及自身免疫性疾病。

1.2 qRT-PCR檢測血清miR-448水平

入院后采集空腹靜脈血5 mL，加入促凝管中，2 000 r/min離心15 min，收集血清置-80 ℃待檢。采用qRT-PCR檢測血清miR-448水平，TRIzol試劑提取血清總RNA，使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA后，使用熒光定量PCR儀(美國Bio-Rad公司)進(jìn)行qRT-PCR擴(kuò)增。miR-448上游引物(5′-3′)：TGCATATGTAGGATGTCC，下游引物(5′-3′)：GAACATGTCTGCGTATCTC；U6上游引物(5′-3′)：CTCGCTTCGGCAGCACATATACT，下游引物(5′-3′)：ACGCTTCACGAATTTGCGTGTC?？偡磻?yīng)體積為20 μL，其中上下游引物各0.5 μL，PremixTaq 12.0 μL，cDNA 2.0 μL，ddH2O 5.0 μL。反應(yīng)條件為預(yù)變性95 ℃ 60 s；變性95 ℃ 15 s；退火60 ℃ 60 s；熔化曲線95 ℃ 15 s，60 ℃ 15 s，95 ℃ 15 s，40個循環(huán)。以U6為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計算miR-448相對表達(dá)量。

1.3 hs-cTnT、cTnI、CK-MB等的檢測

入院后采集空腹靜脈血3 mL，加入促凝管中，3 000 r/min，離心15 min，收集血清置-80 ℃待檢。采用全自動化學(xué)發(fā)光分析儀(型號Cobas e602、CobasC502，羅氏公司)檢測血清hs-cTnT和血清心肌肌鈣蛋白I(cardiac troponin I，cTnI)，采用免疫抑制法測定肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme，CK-MB)，血清總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDLC)、高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoproteins cholesterol,HDLC)水平按照相應(yīng)試劑盒檢測。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 各組臨床特征和血清指標(biāo)的比較

ACS組血清hs-cTnT、cTnI、CK-MB、TC、TG、LDLC、miR-448水平高于對照組，HDLC水平低于對照組(P<0.05；表1)，其他指標(biāo)兩組間比較差異無顯著性(P>0.05)。

表1 各組臨床特征和血清指標(biāo)的比較

2.2 各組血清miR-448水平的比較

UAP、NSTEMI、STEMI患者間血清miR-448水平差異無顯著性(P>0.05；表2)。中度和重度狹窄組miR-448水平高于輕度狹窄組；重度狹窄組miR-448高于中度狹窄組(P<0.05；表2)。

表2 各組血清miR-448水平的比較

2.3 ACS影響因素分析

以是否ACS為因變量，以有統(tǒng)計學(xué)差異的指標(biāo)為協(xié)變量進(jìn)行Logistic回歸分析顯示，miR-448、hs-cTnT、cTnI、CK-MB、LDLC是ACS的危險因素(P<0.05；表3)。

表3 ACS的影響因素分析

2.4 miR-448與血清指標(biāo)及Gensini評分的相關(guān)性

ACS患者血清miR-448水平與血清hs-cTnT(r=0.473，P<0.001)、cTnI(r=0.523，P<0.001)、CK-MB(r=0.501，P<0.001)、TG(r=0.401，P<0.001)、TC(r=0.415，P<0.001)、LDLC(r=0.497，P<0.001)、Gensini評分(r=0.505，P<0.001)呈正相關(guān)，與HDLC(r=-0.395，P<0.001)呈負(fù)相關(guān)。

2.5 血清miR-448、hs-cTnT對ACS的診斷價值

血清miR-448和hs-cTnT診斷ACS的AUC、靈敏度、特異度均高于cTnI、CK-MB，且二者聯(lián)合cTnI和CK-MB診斷效能最高(表4和圖1)。

圖1 血清miR-448、hs-cTnT對ACS的診斷價值

表4 血清miR-448、hs-cTnT、cTnI、CK-MB對ACS的診斷價值

3 討 論

miRNAs在心血管疾病如高血壓、心肌梗死、心力衰竭等中發(fā)揮重要作用，其異常表達(dá)與多種疾病有關(guān)[7]，miRNAs可參與調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)、血管內(nèi)皮細(xì)胞、心肌細(xì)胞等多種細(xì)胞的增殖、凋亡，還可參與炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激等與動脈粥樣硬化有關(guān)的病理過程[8-9]。miR-448屬于miRNAs的一種，研究顯示，lncRNA AK006774可通過靶向調(diào)控miR-448抑制缺氧/復(fù)氧處理心肌細(xì)胞的凋亡和氧化應(yīng)激[10]。另有研究顯示，缺血性心肌病患者心臟組織中與心肌梗死小鼠心臟組織中miR-448表達(dá)顯著增加，抑制miR-448表達(dá)可降低心肌梗死后的心律失常風(fēng)險[11]。本研究結(jié)果顯示，ACS組患者血清miR-448水平較對照組顯著升高，提示miR-448水平變化與ACS發(fā)生有關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)，中度狹窄組和重度狹窄組ACS患者血清miR-448水平顯著高于輕度狹窄組，重度狹窄組ACS患者血清miR-448水平顯著高于中度狹窄組，提示ACS患者血清miR-448水平與冠狀動脈狹窄程度有關(guān)。研究顯示，冠狀動脈粥樣硬化斑塊的形成與VSMC增殖、凋亡有關(guān)，朱彥彬等[12]研究表明，大鼠頸動脈損傷組織VSMC miR-448高表達(dá)，miR-448可靶向負(fù)調(diào)控SIRT1，促進(jìn)VSMC增殖、侵襲和遷移，減少細(xì)胞凋亡。Zhang等[13]研究表明，冠狀動脈粥樣硬化斑塊VSMC中miR-448表達(dá)水平升高，miR-448可通過靶向MEF2C促進(jìn)VSMC增殖與遷移。由此可以推測，miR-448可能通過參與VSMC增殖的調(diào)控，引起動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定，促進(jìn)ACS發(fā)生及發(fā)展過程。

心肌肌鈣蛋白是心肌壞死的敏感指標(biāo)，其中hs-cTnT和cTnI具有心肌特異度，傳統(tǒng)的檢測方法對血液中低水平的cTn較難檢出，hs-cTnT具有較高的靈敏度、特異度和較長診斷窗口期，對急性心肌梗死、ACS具有較高診斷價值，在臨床應(yīng)用廣泛[14-15]。CK-MB是診斷急性心肌缺血的重要指標(biāo)，本研究顯示ACS組患者血清hs-cTnT、cTnI、CK-MB水平顯著高于對照組，與以往報道一致[14-15]。本研究Logistic回歸分析顯示，miR-448、hs-cTnT、cTnI、CK-MB、LDLC是ACS的相關(guān)危險因素。ACS的病理基礎(chǔ)包括動脈粥樣硬化、冠狀動脈血管內(nèi)皮損傷、脂質(zhì)代謝紊亂等，Gensini評分可反映冠狀動脈狹窄程度[16]。本研究結(jié)果顯示，ACS患者血清miR-448水平與血清hs-cTnT、cTnI、CK-MB、TG、TC、LDLC、Gensini評分呈正相關(guān)，與血清HDLC水平呈負(fù)相關(guān)，提示miR-448可能與ACS患者脂質(zhì)代謝及心肌損傷程度密切相關(guān)，且miR-448水平越高，患者冠狀動脈病變狹窄程度越嚴(yán)重。hs-cTnT對ACS的早期診斷具有一定臨床意義。本研究發(fā)現(xiàn)，血清miR-448和hs-cTnT診斷ACS的AUC、靈敏度、特異度均高于cTnI、CK-MB，且聯(lián)合診斷效能更高，表明檢測血清miR-448、hs-cTnT水平對ACS具有一定診斷價值，血清hs-cTnT、miR-448與cTnI、CK-MB聯(lián)合診斷效能更高，有一定臨床應(yīng)用價值。

綜上所述，血清miR-448、hs-cTnT對ACS的診斷有一定價值，hs-cTnT、miR-448、cTnI、CK-MB聯(lián)合診斷效能更高。