阮強(qiáng) 王進(jìn) 唐鴻生 關(guān)天培 王佳泓 方潤婭 黃狄文

1 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院胃腸外科二區(qū) （廣東 廣州 510095）

2 廣州保瑞醫(yī)療技術(shù)有限公司 （廣東 廣州 518055）

內(nèi)容提要：目的：通過對一次性使用體腔熱灌注治療管道組件（BR-TRG-V型）與不同類型藥物的相容和鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）溶出試驗(yàn)研究，為BR-TRG-V型管道的臨床應(yīng)用提供安全性依據(jù)。方法：試驗(yàn)選取三種化療藥物（紫杉醇、奧沙利鉑、氟尿嘧啶），通過模擬臨床使用的條件，檢測上述藥液流經(jīng)BR-TRG-V型管道后藥物含量、pH值、有關(guān)物質(zhì)、不溶性微粒、澄清度和顏色變化以及DEHP溶出情況。結(jié)果：三種藥物通過BR-TRG-V型管道后，其藥物含量、pH值、有關(guān)物質(zhì)、不溶性微粒、澄清度和顏色變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。紫杉醇和乙醇溶液作為浸提介質(zhì)DEHP溶出量分別為（1.83±0.06）μg/mL、（6.10±0.30）μg/mL；奧沙利鉑、氟尿嘧啶、鹽酸和氫氧化鈉溶液未檢測出。結(jié)論：BR-TRG-V型管道的藥物相容性良好，DEHP在紫杉醇和乙醇溶液中有少量溶出，但都在安全范圍內(nèi)，臨床應(yīng)用是安全的。

體腔熱灌注治療是治療惡性腫瘤的有效手段之一，通過治療管道組件將含有化療藥物的液體加熱后持續(xù)循環(huán)灌注入患者體腔內(nèi)，用于治療腫瘤體腔種植轉(zhuǎn)移和惡性胸腹水[1-3]。體腔熱灌注治療管道組件（BR-TRG-V型）是一次性醫(yī)療耗材，是一種經(jīng)無菌處理的PVC材料，為保證其韌性和延展性，常規(guī)加入了增塑劑鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）。本研究選取了紫杉醇、奧沙利鉑和氟尿嘧啶三種化療藥物進(jìn)行藥物試驗(yàn)，檢測三種藥物的相容和DEHP溶出情況，為BR-TRG-V型管道的臨床應(yīng)用提供安全性依據(jù)。

1.材料與方法

1.1 主要儀器和材料

高效液相色譜儀（HPLC）：戴安U-3000；氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC/MS）：Thermo Trace 1310+ISQ LT；液體密度天平：METTLER TOLEDO XPE205；酸度計(jì)（pH計(jì)）：梅特勒SG-8；微粒分析儀：GWF-3J；真空干燥箱：德國MMM公司Vacucell 55L；甲醇、乙腈、乙醇、正己烷等均為色譜純。

紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)品（30mg/支，中國食品藥品檢定研究院，批號：100382-201603）；奧沙利鉑標(biāo)準(zhǔn)品（100mg/支，中國食品藥品檢定研究院，批號：100584-201804）；氟尿嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品（100mg/支，中國食品藥品檢定研究院，批號：100187-201203）；紫杉醇注射液（5mL:30mg，北京雙鷺?biāo)帢I(yè)股份有限公司，批號：20190301）；奧沙利鉑注射液（50mg/瓶，海南錦瑞制藥有限公司，批號：190301）；氟尿嘧啶注射液（10mL:0.25g，天津金耀藥業(yè)有限公司，批號：1806071）；鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）標(biāo)準(zhǔn)品（l.0g/支，aladdin公司，批號：J1413093）。試驗(yàn)用一次性使用體腔熱灌注治療管路，型號規(guī)格：BR-TRG-V型，批號分別為171101、171102、171103，生產(chǎn)企業(yè)：廣州保瑞醫(yī)療技術(shù)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 檢驗(yàn)液制備

常溫配置0.12mg/mL紫杉醇溶液、0.1mg/mL奧沙利鉑溶液、1.0mg/mL氟尿嘧啶溶液、0.1 mol/L鹽酸溶液、0.1 mol/L氫氧化鈉溶液、0.9373～0.9378g/mL乙醇溶液各3000mL。將藥液加入一次性使用體腔熱灌注治療循環(huán)管路儲液袋中，以600mL/min的速度循環(huán)，在0min、15min、30min、60min、90min、120min各時間點(diǎn)收集一定量的紫杉醇、奧沙利鉑和氟尿嘧啶溶液檢測藥物含量及pH，循環(huán)2h后收集藥液檢測有關(guān)物質(zhì)、不溶性微粒、澄清度與顏色變化。以紫杉醇、奧沙利鉑、氟尿嘧啶、鹽酸、氫氧化鈉和乙醇溶液作為浸提液，收集流出的所有液體用于檢測DEHP溶岀量。

1.2.2 藥物相容性檢測方法

藥物含量檢測：紫杉醇溶液色譜柱（ZORBAX SB-C18 4.6mm×150mm 5-Micron），甲醇-水-乙腈（23:41:36）為流動相，檢測波長為227nm。奧沙利鉑溶液色譜柱（依利特Hypersil ODS25μm ID4.6mm×250mm），磷酸溶液（用0.006%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH至3.0）-乙腈（99:1）為流動相，檢測波長為210nm。氟尿嘧啶溶液色譜柱（依利特Hypersil ODS25μm ID4.6mm×250mm），水（用0.05 mol/L磷酸溶液調(diào)至pH3.5）-甲醇（95:5）為流動相，檢測波長為265nm。取各時間段采集的試樣10μL，注入液相色譜儀檢測，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，檢測各個時間點(diǎn)的藥物濃度及相對百分含量。

pH檢測：循環(huán)15min、30min、60min、90min、120min分別收集一定量藥液，用酸度計(jì)測定其pH，每個時間點(diǎn)選取3份樣品，每份樣品重復(fù)測定2次。

有關(guān)物質(zhì)檢測：取20μL流出液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的5倍，選取3份樣品，每份樣品重復(fù)測定3次。

不溶性微粒檢測：取流出液5mL，按照微粒分析儀檢測步驟操作，測定藥液中≥10μm和≥25μm微粒數(shù)，選取3份樣品，每份樣品重復(fù)測定3次。

澄清度與顏色檢測：取適量流出液，按照藥典規(guī)定方法檢測澄清度與顏色，選取3份樣品。

1.2.3 DEHP溶出量檢測方法

參考DEHP含量檢測標(biāo)準(zhǔn)，氣相色譜/質(zhì)譜測定條件如下[4]：色譜柱：HP-5MS石英毛細(xì)管柱（30m×0.25mm×0.25μm）；柱溫：150°C保持0.5min，以20°C/min的速度升溫至280°C，保持7min；進(jìn)樣口溫度：280°C；EI離子源溫度：230°C；輔助加熱溫度：280°C；電子能量：70 eV；進(jìn)樣體積：1μL；分流比：5:1；載氣：氮?dú)猓兌取?9.99%；流量：1.5mL/min；測定方式：全掃描總離子圖（TIC）定性，選擇離子檢測（SIM）定量[5]。

2.結(jié)果

2.1 藥物含量檢測方法學(xué)驗(yàn)證

取紫杉醇、奧沙利鉑、氟尿嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品各25mg，用流動相溶解并定容制備成標(biāo)準(zhǔn)品貯備液。規(guī)定色譜條件下進(jìn)行檢測，以信噪比3:1時的濃度為檢出限。紫杉醇的線性方程為y=375.4982x+0.0354（R= 99.9955%）。奧沙利鉑的線性方程為y=212.6059x+0.0526（R= 99.9940%）。氟尿嘧啶的線性方程為y=1.0521x+0.1441（R=99.9939%）。HPLC重復(fù)進(jìn)樣6次檢測精密度（見表1）。制備一定濃度的三種藥物溶液，分別加入低、中、高濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，HPLC檢測加標(biāo)回收率（見表2）。

表1.精密度試驗(yàn)結(jié)果

表2.回收試驗(yàn)結(jié)果

2.2 藥物試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 藥物含量

以初始藥物含量為100%，紫杉醇溶液在15min、30min、60min、90min、120min各個時間點(diǎn)的藥物含量分別為（99.50±0.02）%、（99.41±0.14）%、（99.53±0.27）%、（99.56±0.12）%、（99.48±0.14）%；奧沙利鉑溶液在各個時間點(diǎn)的藥物含量分別為（99.66±0.19）%、（99.31±0.22）%、（98.97±0.51）%、（98.53±0.66）%、（97.97±0.45）%；氟尿嘧啶溶液在各個時間點(diǎn)的藥物含量分別為（100.01±0.05）%、（100.02±0.04）%、（99.98±0.11）%、（99.80±0.08）%、（99.88±0.12）%，見圖1a。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示三種藥物經(jīng)管道循環(huán)15min、30min、60min、90min、120min后藥物含量與初始藥物含量相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

圖1.三種化療藥物濃度相對含量及pH值檢測結(jié)果

2.2.2 pH值

紫杉醇溶液在0min、15min、30min、60min、90min、120min各時間點(diǎn)的pH值分別為3.98±0.01、3.97±0.01、3.98±0.01、3.99±0.02、3.99±0.01、3.99±0.01；奧沙利鉑溶液在各個時間點(diǎn)的pH值分別為5.86±0.02、5.85±0.01、5.87±0.01、5.89±0.01、5.90±0.01、5.92±0.01；氟尿嘧啶溶液在各個時間點(diǎn)的pH值分別為8.65±0.01、8.65±0.01、8.65±0.01、8.65±0.01、8.65±0.02、8.64±0.01， 見 圖 1b。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示三種藥物經(jīng)管道循環(huán)15min、30min、60min、90min、120min后pH值與初始藥物pH值相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

2.2.3 有關(guān)物質(zhì)

色譜圖分析顯示，三種藥液循環(huán)2h后最大雜質(zhì)峰面積與初始藥液主峰面積比值分別為0.46±0.04、0.35±0.05、0.46±0.04。按照檢測標(biāo)準(zhǔn)色譜圖中如有雜質(zhì)峰，單個雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液主峰面積的2倍（0.5%），各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積的3倍（0.75%），表明藥物經(jīng)管道循環(huán)前后三種藥物有關(guān)物質(zhì)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）[6]。

2.2.4 不溶性微粒

微粒分析儀檢測顯示紫杉醇溶液經(jīng)管道循環(huán)2h前后≥10μm微粒數(shù)分別為（36.00±1.00）、（37.33±1.15）個/5mL，≥25μm微粒數(shù)分別為（6.67±0.58）、（7.33±0.58）個/5mL；奧沙利鉑溶液灌注前后≥10μm微粒數(shù)分別為（34.67±0.58）、（35.67±1.15）個/5mL，≥25μm微粒數(shù)分別為（7.00±0.00）、（7.33±0.58）個/5mL；氟尿嘧啶溶液灌注前后≥10μm微粒數(shù)分別為（32.67±0.58）、（32.67±1.53）個/5mL，≥25μm微粒數(shù)分別為（6.33±0.58）、（6.67±0.58）個/5mL，見圖2。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示三種藥物不容微粒個數(shù)在經(jīng)管道循環(huán)前后無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

圖2.三種化療藥物不容微粒檢測結(jié)果

2.2.5 澄清度和顏色變化

三種藥液經(jīng)管道循環(huán)2h后上機(jī)檢測為無色澄明液體，無可見異物。

2.2.6 DEHP溶出量

在0～24μg/mL的線性范圍內(nèi)，DEHP工作曲線線性方程為：Y=5.983e7x-2.15e7（R2=0.9994），DEHP的檢出限為0.01μg/mL。紫杉醇溶液作為浸提介質(zhì)DEHP溶出量為（1.83±0.06）μg/mL；0.9373～0.9378g/mL乙醇溶液作為浸提介質(zhì)DEHP溶出量為（6.10±0.30）μg/mL；奧沙利鉑、氟尿嘧啶、鹽酸和氫氧化鈉溶液未檢測出。

圖3.紫杉醇及乙醇溶液DEHP溶出量峰面積

3.討論

體腔熱灌注治療是一種有效控制惡性腫瘤體腔轉(zhuǎn)移的方法，早期由于設(shè)備和灌注方法差別很大，控溫不準(zhǔn)確，安全性得不到保證。目前，國內(nèi)主流所采用的體腔熱灌注治療技術(shù)為高精度恒溫持續(xù)循環(huán)灌注法，其管道組件曾獲得實(shí)用新型專利一項(xiàng)（專利號：ZL201020106213.X）。本研究選用的BR-TRG-V型一次性使用體腔熱灌注治療管道組件是在既往管道組件材質(zhì)上的改進(jìn)和升級，其主要成分是無菌處理的PVC材料，DEHP的加入是為了增加管道的柔軟性。作為一種脂溶性物質(zhì)，DEHP增塑劑會部分從PVC材質(zhì)中遷移出來[7]。同時DEHP具有生殖毒性，需要嚴(yán)格控制DEHP加入量，以控制產(chǎn)品中DEHP的溶出量[8]。為了驗(yàn)證BR-TRG-V型臨床應(yīng)用安全性作者開展了本項(xiàng)研究。

吸附研究結(jié)果顯示，紫杉醇、奧沙利鉑、氟尿嘧啶三種化療藥物經(jīng)BR-TRG-V型管道循環(huán)前后藥物含量、pH值、有關(guān)物質(zhì)、不溶性微粒、澄清度和顏色變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。三種藥物是臨床最常用的體腔熱灌注治療藥物，其流經(jīng)BRTRG-V型管道后藥物自身無明顯變化，證實(shí)BR-TRG-V型管道的藥物的相容性良好，臨床應(yīng)用是安全的。遷移研究結(jié)果顯示，奧沙利鉑、氟尿嘧啶、鹽酸和氫氧化鈉溶液未檢測出DEHP溶出，紫杉醇和乙醇溶液DEHP有少量溶出。在強(qiáng)酸和強(qiáng)堿中未溶出，提示BR-TRG-V型管道中加入DEHP是很穩(wěn)定的，不會因?yàn)橛龅綈毫迎h(huán)境而發(fā)生很大的變化。紫杉醇和乙醇溶液作為脂溶性藥物，DEHP有少量溶出符合相似相溶原理，溶出量都在安全范圍內(nèi)，進(jìn)一步證實(shí)BR-TRG-V型臨床應(yīng)用是安全的。

綜上所述，BR-TRG-V型體腔熱灌注治療管道組件的藥物相容性良好，DEHP在紫杉醇和乙醇溶液中有少量溶出，但都在安全范圍內(nèi)，臨床應(yīng)用是安全的。