黃麗，張?chǎng)?，黎廣智，王永飛，李小波，金小寶，黃博，3*

（1.廣東藥科大學(xué)廣東省生物活性藥物研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510006；2.暨南大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣東 廣州 510632；3.廣東藥科大學(xué)生命科學(xué)與生物制藥學(xué)院，廣東 廣州 510006）

瘧疾是全球三大傳染病之一，廣泛流行于熱帶、亞熱帶及溫帶邊緣等地區(qū)，其嚴(yán)重影響流行區(qū)人口的健康和生命，并長期制約當(dāng)?shù)厣鐣?huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展。據(jù)WHO《World Malaria Report 2021》，2020 年全球瘧疾發(fā)病人數(shù)估計(jì)2.41 億，死亡人數(shù)估計(jì)62.7萬［1］。瘧疾的臨床癥狀復(fù)雜多變，輕者出現(xiàn)發(fā)燒、出汗和寒冷等，重者出現(xiàn)急性腎損傷、肺水腫、黃疸、貧血、甚至死亡［2］。肝臟參與瘧疾感染進(jìn)程，一方面作為紅外期肝細(xì)胞內(nèi)裂體增殖所必需的器官，另一方面作為紅內(nèi)期肝臟中的紅細(xì)胞內(nèi)裂體增殖所致宿主致病和死亡的主要參與器官［3］。瘧疾感染導(dǎo)致的肝損傷是一種發(fā)生率較高、但尚未受到足夠重視的并發(fā)癥［4］。臨床研究發(fā)現(xiàn)，瘧疾患者的肝臟出現(xiàn)不同程度的損傷（包括肝腫大、黃疸、轉(zhuǎn)氨酶升高和門脈內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤等）、甚至肝功能衰竭和肝細(xì)胞壞死等［4-5］。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，感染鼠源性瘧原蟲（P. bergheiANKA）的小鼠肝臟出現(xiàn)充血、瘧色素沉積、肝細(xì)胞空泡樣變性和萎縮以及微血管堵塞等［6］。盡管已有研究提示瘧疾肝損傷與高蟲荷、氧化應(yīng)激、瘧色素沉積、炎癥細(xì)胞浸潤和免疫細(xì)胞功能異常相關(guān)［5］，然而其損傷機(jī)制尚未完全闡明。瘧原蟲具有復(fù)雜的生活史和多種免疫逃避策略等獨(dú)特的生物學(xué)特征，深入研究瘧原蟲-宿主間的相互作用將有助于闡明瘧疾肝損傷的致病機(jī)理，為探索新的治療方案或研發(fā)有效的瘧疾疫苗提供新方向。

外泌體（exosome）是一種細(xì)胞分泌到胞外的、直徑為30～100 nm 的多囊泡體，其攜帶lncRNAs、microRNAs、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等多種成分，介導(dǎo)細(xì)胞間短/長距離的通訊并調(diào)控細(xì)胞功能［7］。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，包括瘧原蟲、陰道毛滴蟲、弓形蟲和錐蟲等多種寄生蟲均可分泌外泌體［8］。寄生蟲源性外泌體具有傳遞毒力因子、抗藥基因和分化因子功能，在寄生蟲的繁殖和致病，調(diào)控宿主免疫應(yīng)答等方面發(fā)揮重要作用，從而實(shí)現(xiàn)寄生蟲-寄生蟲間和寄生蟲-宿主之間的相互作用等［8］。已有研究表明，惡性瘧原蟲（P.falciparum）感染人體后，感染瘧原蟲紅細(xì)胞（infectedred blood cells，iRBC）分泌的外泌體數(shù)量明顯增加，且與患者的病理損傷程度呈正相關(guān)［9］，提示瘧原蟲源性外泌體可能參與瘧原蟲侵襲和瘧疾發(fā)病過程。然而，Martin-Jaular 等［10］發(fā)現(xiàn)感染約氏瘧原蟲（P. yoelii17X）小鼠血漿外泌體可以誘導(dǎo)小鼠機(jī)體產(chǎn)生高水平的IgG2a和IgG2b，進(jìn)而增強(qiáng)小鼠抵抗P.yoelli17X感染能力。可見，瘧原蟲源性外泌體在瘧原蟲-宿主間的相互作用中的生物學(xué)功能復(fù)雜，其在紅內(nèi)期肝損傷中作用的報(bào)道較少。因此，本文利用P.bergheiANKA 感染昆明小鼠模型，研究感染P. bergheiANKA 小鼠血清外泌體對(duì)紅內(nèi)期肝組織病理損傷的調(diào)節(jié)作用，并探討分析其潛在的致病機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和蟲株

雌性昆明小鼠，6 周齡，體質(zhì)量約20 g，由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（粵）2021-0093。小鼠飼養(yǎng)于廣東藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，采用SPF 級(jí)小鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料和高壓滅菌水喂養(yǎng)。P. bergheiANKA 株由廣州中醫(yī)藥大學(xué)科技產(chǎn)業(yè)園有限公司惠贈(zèng)，并于液氮中冷凍長期保存。

1.2 感染期血清外泌體的提取和鑒定

共計(jì)12 只雌性昆明小鼠經(jīng)腹腔注射1.0×106個(gè)P.bergheiANKA 寄生紅細(xì)胞（iRBC）/只。當(dāng)紅細(xì)胞原蟲感染率達(dá)約40%時(shí)，乙醚麻醉小鼠，眼球取全血，1000 r/min離心3 min收集血清。按照血清型總外泌體分離試劑盒說明書（No. 4478360#, Invitro‐gen）富集感染小鼠的血清外泌體。具體步驟如下：血清經(jīng)3000 r/min 離心30 min，棄沉淀。將5 mL 外泌體分離試劑加入10 mL 上清液，12000 r/min 離心30 min，收集外泌體沉淀，并加入PBS（50 μL）重懸沉淀。TEM 負(fù)染色觀察外泌體的形態(tài)：將5 μL分離后的感染小鼠血清外泌體重懸于PBS（40 μL）中，渦旋均勻。取10 μL 重懸液滴加銅網(wǎng)上室溫沉淀5 min，接著滴加10 μL 乙酸雙氧鈾溶液銅網(wǎng)上染色2 min，F(xiàn)EI Tecnai G2 Sprit Twin TEM（FEI, USA）觀察。Western blot 檢測(cè)感染期血清外泌體表面的CD9 和CD63 表達(dá)：BCA 法測(cè)定外泌體或感染紅細(xì)胞裂解物的蛋白濃度，50 μg 蛋白（外泌體或感染紅細(xì)胞裂解物）依次進(jìn)行SDS-PAGE電泳、轉(zhuǎn)膜、5%脫脂奶粉封閉、一抗（anti-mouse CD9，稀釋倍數(shù)1∶1000；antimouse CD63，稀釋倍數(shù)1∶1000；BD Biosciences,USA）4 ℃孵育過夜、二抗（anti-mouse antibodies conjugated with horseradish peroxidase，稀釋倍數(shù)1∶5000；Jackson Immunoresearch Labs Inc., USA）室溫孵育1 h、ECL A/B 混合液顯色、曝光、凝膠圖像保存，應(yīng)用Alpha 軟件分析目標(biāo)蛋白的灰度值。以β-actin蛋白為內(nèi)參照。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組

將48 只雌性昆明小鼠隨機(jī)分為4 組：正常對(duì)照組（即Control 組，8 只）、外泌體組（即Exos 組，8 只，每天每只鼠經(jīng)尾靜脈注射50 μg 外泌體）、感染組（即Pb組，16 只，每只鼠經(jīng)腹腔注射106個(gè)iRBC）和感染+外泌體組（即Pb+Exos 組，16 只，每只鼠腹腔感染106個(gè)iRBC，且感染后每天每只鼠經(jīng)尾靜脈注射50 μg 外泌體）。當(dāng)小鼠呈現(xiàn)共濟(jì)失調(diào)、癱瘓、抽搐、昏迷等神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙的癥狀時(shí)，且在24 h內(nèi)死亡，即可判斷為腦型瘧模型小鼠。記錄各組小鼠的腦型瘧發(fā)生率和生存時(shí)間。薄血膜吉姆薩染色法計(jì)數(shù)紅細(xì)胞原蟲感染率：取尾靜脈血制備薄血膜片，經(jīng)甲醇固定，吉姆薩染色，流水沖洗和自然晾干，在光學(xué)顯微鏡（×1000）下血球計(jì)數(shù)儀檢測(cè)紅細(xì)胞原蟲感染率。紅細(xì)胞原蟲感染率=100%×iRBC數(shù)/紅細(xì)胞總數(shù)。

1.4 H&E染色觀察肝臟病理變化

于感染后第9 天，取各組小鼠肝組織，10%（φ）中性多聚甲醛溶液中固定48 h，經(jīng)梯度乙醇脫水、常規(guī)石蠟包埋后，切成5 μm 厚度的切片。經(jīng)蘇木素-伊紅（H&E）染色后光學(xué)顯微鏡下(Leica, Germany)觀察肝組織病理學(xué)變化情況（×100），并計(jì)算肝組織的炎癥點(diǎn)密度（即炎癥點(diǎn)/視野）。

1.5 免疫組化染色與觀察肝組織M1 型巨噬細(xì)胞標(biāo)識(shí)物iNOS表達(dá)

感染后第9 天的肝組織切片依次經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度乙醇復(fù)水，檸檬酸鹽緩沖溶液微波爐加熱修復(fù)抗原，3.0%H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，山羊血清室溫封閉，一抗[兔源iNOS 抗體（Affinity，稀釋比1∶200）]4°C孵育過夜，二抗[山羊抗兔IgG（H+L）HRP（Affinity，稀釋比1∶200）]室溫孵育50 min，DAB 顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封片，置于普通光學(xué)顯微鏡下（×400）觀察拍照，計(jì)算iNOS 染色陽性細(xì)胞數(shù)目。

1.6 qPCR 檢測(cè)肝組織促炎癥/抑炎癥細(xì)胞因子的mRNA表達(dá)量

取各組感染后第9天的肝組織約100 mg置于1 mL Trizol 液中，按照試劑盒說明書提取組織總RNA（No. 9109#, TaKaRa）。按 照PrimeScriptTM1st Strand cDNA Synthesis Kit 說明書（No.6210B#,TaKaRa）將1 μg RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，使用SYBR?Premix Ex Taq TM（2×）試劑盒方法在CFX96 Touch實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)（BIO-RAD,USA）中測(cè)定肝組織促炎癥/抑炎癥細(xì)胞因子的mRNA表達(dá)量。qPCR反應(yīng)體系：1.0 μL的模板cDNA，5.0 μL2×SYBR PremixExTaq，0.5μL上引物，0.5 μL下引物，并加滅菌蒸餾水至10 μL。qPCR 反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃變性5 s，60 ℃退火20 s，70 ℃延伸5 s，43 個(gè)循環(huán)；70 ℃延伸10 min。促炎癥/抑炎癥細(xì)胞因子和內(nèi)參β-actin 的引物序列見表1。采用2-ΔΔCt法計(jì)算細(xì)胞因子的mRNA相對(duì)表達(dá)量。

表1 qPCR反應(yīng)的基因及其引物序列Table 1 Primer sequences of target genes used for qPCR assays

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用GraphPad Prism 5 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以表示。兩組間比較采用獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，多組間比較應(yīng)用one-way ANOVA 檢驗(yàn)。采用Log-Rank test 和a time-series analysis test法分別分析兩組間生存時(shí)間（即半數(shù)生存期）和每天紅細(xì)胞原蟲感染率。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 感染期血清外泌體的提取和鑒定

TEM 結(jié)果顯示（圖1A）：感染期血清外泌體呈典型的“杯盤”形態(tài)特征，其顆粒直徑為30～150 nm，與經(jīng)典外泌體結(jié)構(gòu)高度一致；Western blot檢測(cè)到感染期血清外泌體的CD9和CD63表達(dá)呈陽性，而感染紅細(xì)胞裂解物罕見或未見CD9和CD63表達(dá)（圖1B）。上述結(jié)果表明：利用血清型總外泌體分離試劑法成功富集感染期血清外泌體。

圖1 感染期血清外泌體的鑒定Figure 1 Characterization of serum-derived exosomes from infected mice

2.2 感染期血清外泌體對(duì)感染小鼠生存時(shí)間、腦型瘧發(fā)生率和紅細(xì)胞原蟲感染率的影響

Control組和Exos組小鼠正常存活，且未見任何異常癥狀和原蟲血癥。然而，Pb組小鼠在感染后第7 天出現(xiàn)死亡，第22 天全部死亡。感染+外泌體組（Pb+Exos）小鼠在第7 天出現(xiàn)死亡，第18 天小鼠全部死亡（圖2A）。Pb組和Pb+Exos 組均發(fā)生腦型瘧模型小鼠，且小鼠出現(xiàn)腦型瘧癥狀時(shí)間均為感染后第7～9 天。與Pb組相比，Pb+Exos 組小鼠的腦型瘧發(fā)生率顯著上調(diào)（27%vs48%，P=0.002，圖2B），而半數(shù)生存期顯著下調(diào)（17.5 dvs11.5 d，P=0.005，圖2A）。薄血膜吉姆薩染色顯示：與Pb組相比，Pb+Exos 組小鼠紅細(xì)胞原蟲感染率在感染后第3～18 天差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖2C）。

圖2 感染期血清外泌體對(duì)感染小鼠的生存時(shí)間（A）、腦型瘧發(fā)生率（B）和紅細(xì)胞原蟲感染率（C）的影響Figure 2 Effect of serum-derived exosomes from infected mice on the survival time (A), cerebral malaria incidence (B), and para‐sitemia(C)in P.berghei ANKA-infected mice

2.3 感染期血清外泌體對(duì)小鼠肝組織病理變化的影響

H&E 染色顯示（圖3）：Control組和Exos組小鼠肝組織結(jié)構(gòu)清晰、正常，肝細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，肝索以中央靜脈為中心呈放射狀分布，罕見或未見炎性細(xì)胞浸潤。然而，Pb組小鼠肝臟結(jié)構(gòu)紊亂，可見大量炎癥細(xì)胞浸潤和未被降解的瘧色素。與Pb組相比，Pb+Exos組小鼠的肝臟壞死區(qū)域顯著增加，伴隨顯著增多的炎性細(xì)胞聚集和浸潤（～12 個(gè)炎癥點(diǎn)/視野vs～30 個(gè)炎癥點(diǎn)/視野，P=0.002），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖3 感染期血清外泌體對(duì)感染小鼠肝組織病理損傷的影響Figure 3 Effect of serum-derived exosomes from infected mice on histopathological change of liver tissues in P. berghei ANKAinfected mice(HE,100×)

2.4 感染期血清外泌體對(duì)小鼠肝組織M1 巨噬細(xì)胞極化的影響

免疫組化結(jié)果顯示（圖4）：Control 組或Exos 組的小鼠肝組織罕見或未見M1 型巨噬細(xì)胞標(biāo)記物iNOS 表達(dá)。Pb組小鼠肝組織的iNOS 表達(dá)呈現(xiàn)陽性，且與Control 組相比顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；此外，Pb+Exos 組肝組織M1 型巨噬細(xì)胞極化標(biāo)記物iNOS的表達(dá)水平與Pb組相比顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。上述結(jié)果表明感染期血清外泌體可促進(jìn)感染小鼠肝組織的巨噬細(xì)胞增殖和M1極化。

圖4 感染期血清外泌體對(duì)感染小鼠肝組織M1型巨噬細(xì)胞標(biāo)識(shí)物iNOS表達(dá)的影響（免疫組化，400×）Figure 4 Effect of serum-derived exosomes from infected mice on the expression of iNOS in liver tissues of P. berghei ANKAinfected mice

2.5 感染期血清外泌體對(duì)小鼠肝組織促炎癥/抑炎癥細(xì)胞因子表達(dá)水平的影響

qPCR 檢測(cè)顯示（圖5）：Exos組小鼠肝組織的促炎癥細(xì)胞因子（TNF-α、IL-1β和IL-6）和抑炎癥細(xì)胞因子（IL-4 和IL-10）的mRNA 表達(dá)水平與Control組相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與Control 組相比，Pb組小鼠肝組織TNF-α（P<0.001）、IL-1β（P<0.001）、IL-6（P=0.003）、IL-4（P<0.001）和IL-10（P<0.001）等基因mRNA 表達(dá)水平均顯著上調(diào)。此外，與Pb組相比，Pb+Exos 組小鼠肝組織TNF-α（P=0.003）、IL-1β（P=0.035）和IL-6（P=0.006）的mNRA表達(dá)水平顯著上調(diào)，而IL-4（P=0.010）和IL-10（P=0.007）表達(dá)水平顯著下調(diào)。

圖5 感染期血清外泌體對(duì)感染小鼠肝組織促炎癥/抑炎癥細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平的影響Figure 5 Effect of serum-derived exosomes from infected mice on the expression of pro-inflammatory/anti-inflammatory cytokine mRNA in liver tissues of P.berghei ANKA-infected mice

3 討論

瘧疾肝損傷是一種發(fā)生率較高、但尚未受到足夠重視的并發(fā)癥，且其損傷機(jī)制尚未完全闡明。作為固有免疫細(xì)胞的重要組成部分，肝組織中的巨噬細(xì)胞嚴(yán)格調(diào)控瘧原蟲的感染進(jìn)程，一方面非特異性吞噬、清除感染瘧原蟲的紅細(xì)胞和抑制瘧原蟲釋放到血液，另一方面因其異常激活誘導(dǎo)過度的炎癥反應(yīng)加重紅內(nèi)期肝組織的病理損傷[11]。已有研究表明肝組織中的CD68+陽性巨噬細(xì)胞可作為子孢子突破竇周屏障實(shí)現(xiàn)侵襲肝臟的主要載體之一[12]。越來越多的研究證實(shí)巨噬細(xì)胞分化為M1 型（促炎癥作用）和M2 型（抑炎癥及促修復(fù)作用），而一旦巨噬細(xì)胞M1/M2 型極化失衡，將導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸[13-14]。感染P.bergheiANKA的小鼠小腸組織的CD68+陽性巨噬細(xì)胞的數(shù)量明顯升高，而巨噬細(xì)胞M1 型極化則加重感染小鼠的小腸組織病理損傷[15]。然而，關(guān)于巨噬細(xì)胞M1 型極化在瘧原蟲紅內(nèi)期肝組織病理損害作用及其調(diào)控因素的相關(guān)報(bào)道較少見。

盡管Martin-Jaular 等[10]發(fā)現(xiàn)感染P. yoelii17X小鼠血漿外泌體誘導(dǎo)BALB/c 小鼠機(jī)體產(chǎn)生較高水平的IgG2a 和IgG2b，發(fā)揮增強(qiáng)BALB/c 小鼠抵抗P.yoelli17XL 感染的作用。然而，本研究結(jié)果顯示尾靜脈注射感染期血清外泌體后，感染P. bergheiANKA 昆明小鼠的存活時(shí)間顯著縮短、腦型瘧發(fā)生率顯著升高，以及肝組織的病理損傷明顯加重。可見，瘧原蟲源性外泌體的生物學(xué)功能復(fù)雜，其損傷或保護(hù)宿主作用可能與瘧原蟲蟲種、宿主遺傳背景和外泌體來源有關(guān)。已有研究證實(shí)激活的M1 型巨噬細(xì)胞產(chǎn)生大量TNF-α、IL-1β和IL-6 等促炎癥因子，而激活M2 型巨噬細(xì)胞后可釋放大量的IL-4 和IL-10 等抑炎癥因子[16]。進(jìn)一步的研究表明TNF-α、IL-1β和IL-6等促炎癥因子，盡管在瘧疾感染早期扮演促進(jìn)殺死瘧原蟲的關(guān)鍵作用，但其過度活化則導(dǎo)致瘧疾的病理損傷[17-18]。此外，IL4 和IL-10 被認(rèn)為是一類可抵抗由Th1細(xì)胞因子驅(qū)動(dòng)的致命瘧疾損傷反應(yīng)的抗炎癥因子[19]。本研究結(jié)果顯示，感染期血清外泌體可上調(diào)肝組織M1 型巨噬細(xì)胞數(shù)量和促炎癥因子（TNF-α、IL-1β和IL-6）的mRNA 表達(dá)水平，下調(diào)抑炎癥因子（IL-4 和IL-10）mRNA 表達(dá)水平。同時(shí)，既往研究表明受腦型瘧模型小鼠血漿外泌體刺激后，巨噬細(xì)胞分泌更多的TNF-α 及促進(jìn)其受體超家族蛋白CD40 的表達(dá)[20]。此外，人源性瘧原蟲蟲株（包括P.falciparum、P.vivax和P.malariae等）感染紅細(xì)胞釋放的外泌體或類似物與未感染紅細(xì)胞相比提高10倍多，且其刺激外周血單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞釋放促炎癥因子，呈現(xiàn)出強(qiáng)烈的促炎癥反應(yīng)[21]。Barker 等[22]發(fā)現(xiàn)腦型瘧模型小鼠（即C57BL/6 小鼠感染P.bergheiANKA）血漿外泌體的miR-155表達(dá)量較非腦型瘧模型小鼠（即BALB/c小鼠感染P.bergheiANKA）顯著升高。此外，Cohen 等[23]和Opadokun等[24]發(fā)現(xiàn)腦型瘧模型小鼠（即CBA 小鼠感染P.bergheiANKA）血漿外泌體的miR-146a表達(dá)量較非腦型瘧模型小鼠（即CBA 小鼠感染P. yoelii）顯著上調(diào)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)miR-155 或miR-146a可分別誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞M1 極化和M2 極化[25]。本研究結(jié)果提示，感染期血清外泌體誘導(dǎo)P. bergheiANKA 感染小鼠肝組織出現(xiàn)強(qiáng)烈的促炎癥反應(yīng)和加重紅內(nèi)期肝組織病理損傷，其原因可能與外泌體經(jīng)miR-155 或miR-146a 分別促進(jìn)巨噬細(xì)胞M1 極化或抑制巨噬細(xì)胞M2 極化有關(guān)。然而，感染期血清外泌體靶向調(diào)控M1 極化的作用機(jī)制有待深入研究。本研究存在一些不足之處：（1）本文缺乏正常小鼠血清外泌體對(duì)照組，以及未分離iRBC 源性外泌體；（2）本文未深入研究感染血清外泌體靶向調(diào)控巨噬細(xì)胞M1 極化的作用機(jī)制。因此，本課題組將在后期研究中檢測(cè)正常小鼠血清外泌體與感染期血清外泌體的microRNAs 和蛋白表達(dá)的差異，探討外泌體靶向調(diào)控巨噬細(xì)胞M1極化的作用機(jī)制。

綜上所述，本文利用感染期血清外泌體初步探討了瘧原蟲-宿主間的相互作用，研究結(jié)果提示感染期血清外泌體加重紅內(nèi)期肝臟病理損傷，其原因可能與促進(jìn)肝臟組織巨噬細(xì)胞增殖和M1 極化有關(guān)，但其詳細(xì)機(jī)制有待闡明。本研究結(jié)果可能為后續(xù)以感染期血清外泌體為靶點(diǎn)的瘧疾肝損傷治療提供了新思路。