邢晨晨，張效威，徐江雁

河南中醫(yī)藥大學(xué)，河南 鄭州 450046

糖尿病腎臟疾病(diabetic kidney disease，DKD)是糖尿病引起的嚴(yán)重微血管并發(fā)癥，以持續(xù)性蛋白尿、水腫、高血壓、腎功能持續(xù)性下降、心血管事件頻發(fā)等為表現(xiàn)的臨床綜合征[1]，是全球慢性腎臟病的主要原因，也是目前導(dǎo)致終末期腎臟病(end-stage-renal-disease，ESRD)的首要原因[2]。調(diào)查結(jié)果顯示，全球范圍內(nèi)約20%的糖尿病患者進(jìn)展為DKD[3]，而我國DKD患病率高達(dá)40%[4]。DKD發(fā)展至后期需要進(jìn)行血液透析，甚至腎臟移植，嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量，并且給家庭和社會帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此，盡早采取干預(yù)措施，阻止或延緩DKD病程進(jìn)展至ESRD是目前治療DKD的重要目標(biāo)之一。臨床實(shí)踐過程中針對DKD的治療主要以控制血壓、降低血糖以及抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)等為主，然而上述治療藥物并不能有效阻止DKD的持續(xù)進(jìn)展。中醫(yī)藥在防治DKD方面有明顯的優(yōu)勢，能夠有效減少蛋白尿生成，延緩病程進(jìn)展，保護(hù)腎功能等。

熟地黃-山茱萸是治療腎病的常用藥對[5]，也是益腎通絡(luò)方中具有補(bǔ)益肝腎功能的重要藥對。熟地黃性味甘溫，入肝腎經(jīng)，既能補(bǔ)益肝腎、填精益髓，又能補(bǔ)血養(yǎng)虛；山茱萸味酸澀質(zhì)潤，溫而不燥，補(bǔ)益肝腎，既能益精助陽，還能收斂固澀?，F(xiàn)代藥理研究表明，熟地黃能調(diào)節(jié)血脂、血糖，并對心腦血管系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等有良性調(diào)節(jié)作用[6]。山茱萸能保護(hù)肝腎功能，對神經(jīng)、心腦系統(tǒng)具有保護(hù)作用等[7]。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)利用系統(tǒng)生物學(xué)、計(jì)算生物學(xué)和多向藥理學(xué)等技術(shù)方法，構(gòu)建成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)，研究藥物對疾病的分子作用機(jī)制，為中藥復(fù)雜成分的研究提供了有效方法[8]。分子對接技術(shù)是采用計(jì)算機(jī)技術(shù)，通過化學(xué)計(jì)量學(xué)方法模擬配體與受體之間的幾何匹配、能量匹配，并計(jì)算二者之間的結(jié)合力，以尋找二者最佳的結(jié)合模式[9]。基于此，本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對熟地黃-山茱萸治療DKD的分子作用機(jī)制進(jìn)行探討，并利用分子對接方法進(jìn)行驗(yàn)證，以期為熟地黃-山茱萸防治DKD藥效機(jī)制的闡釋以及深入開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 熟地黃-山茱萸有效成分篩選通過中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫及分析平臺[10](traditional Chinese medicine systems pharmacology，TCMSP)和中藥分子機(jī)制的生物信息學(xué)分析工具[11](bioinformatics analysis tool for molecular mechanism of traditional Chinese medicine，BATMAN-TCM)以及中藥綜合數(shù)據(jù)庫(traditional Chinese medicines integrated database，TCMID)，以“熟地黃”和“山茱萸”為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索。對TCMSP數(shù)據(jù)庫檢索到的相關(guān)成分以口服生物利用度(oral bioavailability，OB)≥20%[12]、類藥性(drug-like，DL)≥0.1[13]為條件進(jìn)行篩選。對BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫和TCMID數(shù)據(jù)庫檢索到的化學(xué)成分通過Pubchem數(shù)據(jù)庫[14]獲取成分的Canonical SMILES號保存并導(dǎo)入SwissADME[15](http：//www.swissadme.ch/)，借助該平臺對熟地黃和山茱萸的有效成分進(jìn)行篩選，同時(shí)查閱《中華人民共和國藥典》(2020版)及中國知網(wǎng)相關(guān)文獻(xiàn)補(bǔ)充被遺漏的活性成分。

1.2 熟地黃-山茱萸活性成分的作用靶點(diǎn)和DKD靶點(diǎn)的獲取通過TCMSP和BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫獲得有效成分的靶點(diǎn)信息。利用蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫Uniprot[16](http：//www.uniprot.org)對收集到的靶點(diǎn)信息進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，設(shè)定“reviewed”和物種為“Homo Sapiens”，將靶點(diǎn)轉(zhuǎn)化為對應(yīng)的基因名稱。利用SwissTargetPrediction[17](http：//www.swisstargetprediction.ch/)和STITCH平臺預(yù)測相關(guān)化合物的潛在靶點(diǎn)。將以上4個(gè)數(shù)據(jù)庫檢索到的化合物靶點(diǎn)合并，刪除重復(fù)基因，得到熟地黃-山茱萸活性成分的作用靶點(diǎn)。以“diabetic kidney disease”為關(guān)鍵詞，搜索OMIM(Online Mendelian Inheritance in Man)數(shù)據(jù)庫[18](http：//www.omim.org)、DisGeNet數(shù)據(jù)庫[19](http：//www.disgenet.org/home/)、DRUGBANK數(shù)據(jù)庫[20](http：//www.drugbank.ca/)、Gene-Cards數(shù)據(jù)庫[21](https：//www.genecards.org)得到相關(guān)靶點(diǎn)。將4個(gè)數(shù)據(jù)庫獲得疾病靶點(diǎn)合并后刪除重復(fù)靶點(diǎn)，獲得DKD靶點(diǎn)。將熟地黃-山茱萸活性成分的作用靶點(diǎn)和DKD靶點(diǎn)進(jìn)行映射，得到熟地黃-山茱萸治療DKD的潛在作用靶點(diǎn)。

1.3 熟地黃-山茱萸活性成分-DKD靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建將熟地黃-山茱萸治療DKD的潛在作用靶點(diǎn)上傳至STRING數(shù)據(jù)庫[22](http：//string-db.org)，選擇物種為“Homo Sapiens”，選擇靶點(diǎn)關(guān)聯(lián)置信度為0.70，并隱藏游離節(jié)點(diǎn)，進(jìn)行蛋白互作(protein-protein interaction，PPI)分析，構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)，將獲得的數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape3.8.2軟件制作PPI網(wǎng)絡(luò)圖。

1.4 熟地黃-山茱萸干預(yù)DKD的富集分析將熟地黃-山茱萸干預(yù)DKD的潛在作用靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫[23](https：//david.ncifcrf.gov/)，進(jìn)行基因本體(gene ontology，GO)功能富集分析、京都基因與基因組百科全書(kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG)通路富集分析，設(shè)置P<0.05進(jìn)行篩選，最終選取符合條件的前10位GO功能條目和前20位KEGG通路條目，利用微生信平臺進(jìn)行可視化制圖，并利用Cytoscape 3.8.2軟件構(gòu)建靶點(diǎn)-信號通路網(wǎng)絡(luò)圖。

1.5 熟地黃-山茱萸干預(yù)DKD的關(guān)鍵成分與核心靶點(diǎn)的分子對接將進(jìn)行分子對接關(guān)鍵成分的sdf格式文件利用OpenBabel-3.1.1轉(zhuǎn)化為pdb格式文件。利用RCSBPDB數(shù)據(jù)庫[24](https//：www.rcsb.org/)下載靶點(diǎn)蛋白的三維晶體結(jié)構(gòu)。利用分子對接模擬軟件Autodock Tools1.5.6對蛋白及化合物進(jìn)行去水、加氫、計(jì)算電荷數(shù)等前期處理后進(jìn)行對接模擬計(jì)算。若結(jié)合能<0 kcal·mol-1表明靶點(diǎn)蛋白與化合物自然狀態(tài)下可自發(fā)結(jié)合，結(jié)合能<-1.2 kcal·mol-1表明靶點(diǎn)蛋白與化合物對接結(jié)果良好，結(jié)合能越小，表明化合物與蛋白之間結(jié)合能力越佳。通過Pymol軟件對得分較高且構(gòu)象較穩(wěn)定的對接結(jié)果進(jìn)行可視化。

2 結(jié)果

2.1 熟地黃-山茱萸活性成分及干預(yù)DKD靶點(diǎn)預(yù)測獲得熟地黃活性成分11種，山茱萸活性成分42種，同時(shí)檢索得到與53種活性成分相對應(yīng)的靶點(diǎn)175個(gè)。此外，根據(jù)數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果，得到4 232個(gè)與DKD治療相關(guān)的靶點(diǎn)。將熟地黃-山茱萸有效成分對應(yīng)的175個(gè)靶點(diǎn)與4 232個(gè)DKD關(guān)聯(lián)靶點(diǎn)，利用Venny2.1進(jìn)行映射后，獲得100個(gè)共同靶點(diǎn)(見圖1)。

圖1 熟地黃-山茱萸與DKD共同靶點(diǎn)韋恩圖

2.2 熟地黃-山茱萸潛在活性成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建利用Cytoscape 3.8.2軟件構(gòu)建熟地黃-山茱萸干預(yù)DKD的“活性成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)，見圖2，菱形代表疾病，圓形代表靶點(diǎn)，六邊形代表活性成分。網(wǎng)絡(luò)中共有活性成分節(jié)點(diǎn)53個(gè)，靶點(diǎn)節(jié)點(diǎn)100個(gè)，節(jié)點(diǎn)中相互作用的邊358條。根據(jù)網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)性質(zhì)分析結(jié)果顯示，多種成分干預(yù)一個(gè)靶點(diǎn)，一種成分也能干預(yù)多個(gè)靶點(diǎn)，體現(xiàn)了熟地黃-山茱萸多成分、多靶點(diǎn)干預(yù)DKD的協(xié)同作用機(jī)制，主要成分拓?fù)浞治鲋笜?biāo)見表1。

注：藍(lán)色為活性成分，粉色為靶點(diǎn)，綠色為疾病圖2 熟地黃-山茱萸干預(yù)DKD的成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)圖

表1 熟地黃-山茱萸關(guān)鍵成分網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)特征參數(shù)

2.3 PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及關(guān)鍵靶點(diǎn)篩選通過STRING和Cytoscape 3.8.2軟件對100個(gè)交集靶點(diǎn)進(jìn)行分析處理后，得到共有99個(gè)節(jié)點(diǎn)和962條邊的PPI網(wǎng)絡(luò)，網(wǎng)絡(luò)中每個(gè)節(jié)點(diǎn)的大小和顏色的深淺反映其度值的大小(圖3)。通過拓?fù)鋵W(xué)性質(zhì)分析，度值排名前10位的關(guān)鍵靶點(diǎn)分別為AKT1、TP53、VEGFA、JUN、CASP3、PPARG、STAT3、ESR1、PTGS2、FOS，具體拓?fù)鋮?shù)見表2。

圖3 熟地黃-山茱萸干預(yù)DKD的PPI網(wǎng)絡(luò)

表2 熟地黃-山茱萸主要活性成分靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)特征參數(shù)

2.4 GO功能富集分析和KEGG通路富集分析通過DAVID平臺對100個(gè)交集靶點(diǎn)進(jìn)行GO功能富集分析(P<0.05)，共得到408條條目，其中生物過程(biological process，BP)295條，分子功能(molecular function，MF)77條，細(xì)胞組分(cell composition，CC)36條，各類別排名靠前的條目見圖4，長度越長表示富集在該條目上的基因越多，顏色越深表示富集越顯著。通過GO功能富集分析推測其細(xì)胞組分主要涉及胞質(zhì)溶膠、核染色質(zhì)、質(zhì)膜、核質(zhì)、轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合體等方面；生物過程主要涉及針對藥物反應(yīng)、雌二醇反應(yīng)、RNA聚合酶Ⅱ啟動子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控、一氧化氮生物合成過程的正調(diào)控、老化、缺氧反應(yīng)等方面；分子功能主要涉及酶結(jié)合、蛋白質(zhì)結(jié)合、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、類固醇結(jié)合等方面。通過KEGG通路分析得到P<0.05的通路共89條，結(jié)合DKD的疾病特點(diǎn)，提示熟地黃-山茱萸可能通過HIF-1信號通路、細(xì)胞凋亡相關(guān)信號通路、p53信號通路、PI3K-Akt信號通路、T細(xì)胞受體信號通路等發(fā)揮治療DKD的作用，選取富集程度高的前20條通路進(jìn)行可視化，氣泡越大，表示富集在該條通路上的基因越多，顏色越深表示富集程度越顯著，見圖5。利用Cytoscape 3.8.2軟件制作熟地黃-山茱萸干預(yù)DKD的活性成分-靶點(diǎn)-信號通路網(wǎng)絡(luò)圖，見圖6，進(jìn)一步說明靶點(diǎn)和信號通路對熟地黃-山茱萸防治DKD的重要作用。

注：綠色為BP分析；黃色為 CC分析；紫色為 MF分析圖4 熟地黃-山茱萸干預(yù)DKD關(guān)鍵靶點(diǎn)GO功能富集分析柱狀圖

2.5 分子對接為進(jìn)一步驗(yàn)證關(guān)鍵靶點(diǎn)與成分的可靠性，根據(jù)疾病，選取β-谷甾醇、豆甾醇、漢防己甲素作為分子對接藥效成分分別與核心靶點(diǎn)AKT1(PDBID：1UNQ)、TP53(PDBID：6VIP)、VEGFA(PDBID：5DN2)、JUN(PDBID：5QS8)、CASP3(PDBID：3H0E)進(jìn)行分子對接模擬計(jì)算，結(jié)果顯示，關(guān)鍵靶點(diǎn)與藥效成分最低結(jié)合能均<-1.2 kcal·mol-1，說明預(yù)測的成分和靶點(diǎn)均有良好的對接活性，見表3，其中對接得分最高的是JUN-豆甾醇，分值為-9.27 kcal·mol-1，得分最低的是VEGFA-漢防己甲素，分值為-4.72 kcal·mol-1。將以上對接結(jié)果通過Pymol軟件對得分較高且構(gòu)想象較穩(wěn)定的靶蛋白與化合物對接結(jié)果進(jìn)行可視化，見圖7。

圖5 熟地黃-山茱萸干預(yù)DKD關(guān)鍵靶點(diǎn)KEGG功能富集分析氣泡圖

圖6 熟地黃-山茱萸干預(yù)DKD活性成分-靶點(diǎn)-信號通路網(wǎng)絡(luò)圖

表3 熟地黃-山茱萸核心成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)分子對接結(jié)果

注：A：AKT1-豆甾醇；B：AKT1-漢防己甲素；C：TP53-漢防己甲素；D：VEGFA-β谷甾醇；E：JUN-豆甾醇；實(shí)線為氫鍵作用；虛線為疏水作用圖7 熟地黃-山茱萸成分與核心靶點(diǎn)分子對接結(jié)果(部分)

3 討論

DKD發(fā)病隱匿，是糖尿病微血管并發(fā)癥之一。腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化是其最主要的病理改變。DKD發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，至今仍不明確，可能涉及糖代謝異常、微循環(huán)障礙、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞自噬等方面[25]。近年來，研究發(fā)現(xiàn)中醫(yī)藥干預(yù)DKD在改善腎功能，減輕蛋白尿，延緩病程進(jìn)展，提高患者生活質(zhì)量等方面有重要作用。

通過對熟地黃-山茱萸治療DKD活性成分和關(guān)鍵靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，熟地黃-山茱萸中有53個(gè)潛在活性成分可能通過100個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)對DKD起到治療作用，主要成分包括β-谷甾醇、豆甾醇、漢防己甲素、沒食子酸等。其中β-谷甾醇及豆甾醇度值排名靠前，β-谷甾醇為山茱萸中的活性成分，在每100 g山茱萸中含量高達(dá)56.4 mg，構(gòu)成比為92.6%[26]；豆甾醇為熟地黃中的活性成分，雖未查到熟地黃與豆甾醇的含量研究，但已有研究證實(shí)，二者治療DKD作用顯著[27-28]，推測其可能為熟地黃-山茱萸防治DKD的關(guān)鍵活性成分。同時(shí)，分子對接結(jié)果顯示，β-谷甾醇、豆甾醇、漢防己甲素與關(guān)鍵靶點(diǎn)VEGFA、AKT1、CASP3、TP53、JUN均有良好的對接活性。研究發(fā)現(xiàn)，在鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病大鼠模型治療中，漢防己甲素可能通過激活Nrf2/HO-1信號通路，發(fā)揮其抗炎、抗氧化應(yīng)激等作用，從而減少蛋白尿，降低尿素氮，有效抑制糖尿病發(fā)展進(jìn)程，延緩腎臟損害[29]。β-谷甾醇屬于植物甾醇類化合物，具有抗炎、抗氧化、調(diào)節(jié)骨代謝、調(diào)節(jié)免疫等多種藥理作用。研究表明，β-谷甾醇能增加酪氨酸磷酸酶的活性，降低核因子-κB水平，減少趨化因子的表達(dá)，同時(shí)增強(qiáng)抗炎因子白細(xì)胞介素-10的活性，從而減輕炎癥反應(yīng)[30]。β-谷甾醇具有保護(hù)腎臟的作用，它能夠降低尿素、尿酸、肌酐等生化參數(shù)指標(biāo)以及改善腎小管壞死等腎臟病理變化[27]。豆甾醇具有抗糖尿病、抗氧化的特性，有助于預(yù)防糖尿病及其腎臟并發(fā)癥。研究表明，豆甾醇通過改善氧化應(yīng)激，調(diào)節(jié)抗氧化酶水平，在預(yù)防糖尿病及其并發(fā)癥中起到重要作用[28]。豆甾醇可能通過抑制甲狀腺激素的釋放，從而刺激胰島素的分泌，實(shí)現(xiàn)降低血糖的目的[31]。研究表明，沒食子酸通過抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)，能夠有效降低甲基乙二醛誘導(dǎo)的糖尿病腎病小鼠的血糖水平，改善病理組織，減少蛋白尿，保護(hù)腎功能，延緩糖尿病腎臟疾病的發(fā)展進(jìn)程[32]。沒食子酸對血管緊張素轉(zhuǎn)化酶有抑制作用，而血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑已廣泛用于DKD的臨床治療，能有效調(diào)節(jié)肌酐、尿素氮的水平，改善肌酐清除率，保護(hù)腎功能[33]。由此推測，這些度值排名靠前的化合物可能是熟地黃-山茱萸發(fā)揮治療DKD作用的關(guān)鍵成分。

通過STRING數(shù)據(jù)庫獲得PPI網(wǎng)絡(luò)信息提示，熟地黃-山茱萸干預(yù)DKD的關(guān)鍵靶點(diǎn)涉及AKT1、CASP3、VEGFA、TP53、PPARG、JUN等。研究表明，鏈脲作菌素誘導(dǎo)的糖尿病腎病模型小鼠使用CASP3抑制劑(Z-DEVD-FMK)8周后，DKD小鼠的蛋白尿、腎小管間質(zhì)纖維化以及腎功能可得到有效改善[34]。因此，推測熟地黃-山茱萸可能通過抑制CASP3的信號通路，實(shí)現(xiàn)減少腎細(xì)胞凋亡，保存殘余腎單位，達(dá)到保護(hù)腎功能的作用。研究表明，VEGFA是糖尿病腎病血管功能障礙的關(guān)鍵因子，能夠保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，預(yù)防DKD腎功能損害和組織學(xué)改變[35]。VEGFA通過減少腎小球基底膜陰離子數(shù)量，干預(yù)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞小窗形成，進(jìn)而影響腎小球基底膜電荷屏障和機(jī)械屏障，使腎小球?yàn)V過膜對血漿蛋白的通透性增加，導(dǎo)致蛋白尿的形成[36]。AKT1能夠調(diào)控細(xì)胞增殖、遷移、凋亡等多種生物過程，能夠調(diào)控葡萄糖的攝取[37]。研究表明，調(diào)節(jié) AKT1能夠修復(fù)腎小管上皮細(xì)胞，從而減輕細(xì)胞凋亡和炎癥反應(yīng)，保護(hù)腎功能[38]。PPARG能夠調(diào)節(jié)全身的脂質(zhì)代謝，參與脂肪細(xì)胞分化和維持葡萄糖水平，與糖尿病、肥胖、心血管疾病密切相關(guān)[39]。

GO功能富集分析結(jié)果表明，熟地黃-山茱萸防治DKD涉及多個(gè)生物學(xué)過程，主要集中于藥物反應(yīng)、雌二醇反應(yīng)、RNA聚合酶Ⅱ啟動子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控、一氧化碳生物合成的正調(diào)控、凋亡過程的負(fù)調(diào)控等。KEGG通路富集分析顯示，熟地黃-山茱萸干預(yù)DKD的信號通路主要包括HIF-1信號通路、細(xì)胞凋亡信號通路、p53信號通路、PI3K-Akt信號通路、T細(xì)胞受體信號通路等。HIF-1α是HIF-1信號通路上的關(guān)鍵靶點(diǎn)，抑制HIF-1α的釋放能減輕高糖培養(yǎng)大鼠模型的腎小球系膜細(xì)胞的炎癥及纖維化[40]。HIF-1信號通路能調(diào)節(jié)VEGFA，進(jìn)而修復(fù)腎組織微小血管損傷，最終改善腎臟缺血缺氧的狀態(tài)，達(dá)到延緩腎纖維化的目的，實(shí)現(xiàn)保護(hù)腎功能的作用[41]。PI3K-Akt信號通路具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡與自噬的重要作用。研究表明，PI3K-Akt信號通路能夠調(diào)控足細(xì)胞的凋亡，而足細(xì)胞具有維持正常腎小球?yàn)V過膜形態(tài)和功能的作用，通過抑制足細(xì)胞的凋亡可能實(shí)現(xiàn)抑制腎小球硬化以及腎間質(zhì)纖維化，達(dá)到減少蛋白尿，保護(hù)腎功能的目的[42]。HIF與P13K/AKT等信號通路相互作用，能夠共同參與腎纖維化的調(diào)節(jié)。研究表明，通過調(diào)節(jié)p53信號通路，可能抑制高糖誘導(dǎo)足細(xì)胞的損傷與凋亡，從而起到延緩DKD病程進(jìn)展的作用[43]。

綜上，本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，探討了熟地黃-山茱萸防治DKD的作用機(jī)制及活性成分發(fā)揮作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，結(jié)果表明，熟地黃-山茱萸治療DKD的潛在活性成分有β-谷甾醇、豆甾醇、漢防己甲素、沒食子酸等，核心靶點(diǎn)有AKT1、CASP3、VEGFA、TP53、PPARG、JUN等，通過調(diào)節(jié)HIF-1信號通路、細(xì)胞凋亡信號通路、p53信號通路、PI3K-Akt信號通路、T細(xì)胞受體信號通路等干預(yù)DKD，并利用分子對接技術(shù)對潛在成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)的相互作用能力進(jìn)行驗(yàn)證。在網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究中，由于活性成分篩選的標(biāo)準(zhǔn)不一，預(yù)測靶點(diǎn)的方法不同，數(shù)據(jù)搜集是否全面等，都會對結(jié)果產(chǎn)生影響。本研究是以TCMSP數(shù)據(jù)庫用戶指南2021年更新的建議進(jìn)行熟地黃-山茱萸活性成分的篩選，但未考慮藥物的劑量以及煎煮等問題。因此，預(yù)測的結(jié)果仍需通過相應(yīng)的藥效機(jī)制實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。