趙苗苗，魏敬芝，張 昆

(漢中市中心醫(yī)院兒科，陜西 漢中 723099)

反復(fù)上呼吸道感染病情復(fù)雜并且難于治療，是兒科常見的疾病，長(zhǎng)期反復(fù)會(huì)導(dǎo)致患兒生長(zhǎng)發(fā)育受到嚴(yán)重阻礙，還易并發(fā)肺炎、心力衰竭等[1-2]。目前小兒反復(fù)上呼吸道感染的具體發(fā)病機(jī)制尚未明確。免疫功能發(fā)育不完善可能是發(fā)病的主要原因，從而導(dǎo)致繼發(fā)免疫功能下降[3]。纖維膠凝蛋白(Ficolin，F(xiàn)CN)是一組能夠識(shí)別并結(jié)合病原相關(guān)模式分子的蛋白，在固有免疫防御中扮演著重要的角色[4-5]。纖維膠凝蛋白3(Ficolin-3，F(xiàn)CN3)是FCN家族的關(guān)鍵因子，主要分布于血漿中，可能通過激活凝集素途徑參與機(jī)體免疫反應(yīng)。有研究[6]通過ELISA分析發(fā)現(xiàn)FCN3在涂陰肺結(jié)核中表達(dá)降低，認(rèn)為其可作為涂陰肺結(jié)核診斷的血清標(biāo)志物。基于FCN3在涂陰肺結(jié)核中的應(yīng)用，本研究觀察反復(fù)上呼吸道感染患兒血清中FCN3表達(dá)水平，并探討其與體液免疫的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 本研究入選的126例反復(fù)上呼吸道感染患兒均于2017年12月至2019年12月收治入院，設(shè)為觀察組，其中年齡2～11歲，平均(7.19±2.43)歲；男性67例，女性59例。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合反復(fù)呼吸道感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②患兒年齡2～12歲；③家屬接受本研究?jī)?nèi)容。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并有心、肝、腎功能障礙，以及血液系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)疾??；②近期使用過免疫抑制劑或激素藥物；③本身存在先天性肺發(fā)育畸形、免疫缺陷疾病、支氣管哮喘、結(jié)締組織病。同時(shí)，選取同時(shí)期體檢結(jié)果健康的兒童120例為對(duì)照組，其中年齡2～12歲，平均(6.57±2.11)歲；男性65例，女性55例。兩組基本資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。本研究所有受試者家屬均知情同意，并簽署知情同意書，且該研究已經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 主要試劑與儀器 人FCN3酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)試劑盒(貨號(hào)：EH0137)購(gòu)自武漢菲恩生物科技有限公司；人IgM ELISA試劑盒(貨號(hào)：JK-A-5201)、人IgA ELISA試劑盒(貨號(hào)：JK-A-5203)、人IgG ELISA試劑盒(貨號(hào)：JK-A-5202)購(gòu)自上海晶抗生物工程有限公司。臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(型號(hào)：貝克曼庫(kù)爾特Allegra 64R)購(gòu)自貝克曼庫(kù)爾特商貿(mào)(中國(guó))有限公司；恒溫恒濕箱(型號(hào)：LHS-250HCN)購(gòu)自上海錦玟儀器設(shè)備有限公司。

1.3 研究方法

1.3.1 樣本采集及測(cè)定：兩組受試者均于晨起采用清潔干燥試管抽取空腹肘靜脈血5 ml，于離心機(jī)下以3000 r/min離心15 min，收集上清液至EP管內(nèi)，保存-20 ℃冰箱備用。采用ELISA法檢測(cè)兩組受試者血清中IgA、IgG、IgM、FCN3的表達(dá)水平以及觀察組患兒治療前后FCN3表達(dá)水平，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.2 治療方法：根據(jù)中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)兒科醫(yī)師分會(huì)兒童耳鼻咽喉專業(yè)委員會(huì)發(fā)布的《兒童反復(fù)上呼吸道感染臨床診治管理專家共識(shí)》[7]對(duì)患兒采用阿奇霉素治療，根據(jù)患兒不適部位靈活運(yùn)用，以減緩患兒癥狀。

2 結(jié) 果

2.1 兩組一般資料比較 見表1。兩組年齡、性別、家族史、體重指數(shù)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。

表1 兩組一般資料比較

2.2 兩組血清FCN3水平及體液免疫指標(biāo)比較 見表2。觀察組血清FCN3表達(dá)水平及體液免疫指標(biāo)IgA、IgG、IgM水平低于對(duì)照組(均P<0.05)。

2.3 觀察組患兒治療前后血清FCN3及體液免疫指標(biāo)比較 見表3。觀察組患兒治療后血清FCN3及體液免疫指標(biāo)表達(dá)IgA、IgG、IgM水平高于治療前(均P<0.05)。

表2 兩組血清FCN3水平及體液免疫指標(biāo)比較

表3 觀察組患兒治療前后血清FCN3及體液免疫指標(biāo)比較

2.4 觀察組患兒血清FCN3表達(dá)水平與體液免疫指標(biāo)相關(guān)性分析 Pearson分析結(jié)果顯示，F(xiàn)CN3表達(dá)水平與IgA、IgG、IgM呈正相關(guān)(r=0.531、0.436、0.499，均P<0.05)。

2.5 血清FCN3水平對(duì)反復(fù)上呼吸道感染發(fā)生的預(yù)測(cè)價(jià)值 見圖1。ROC曲線分析顯示，血清FCN3預(yù)測(cè)反復(fù)上呼吸道感染發(fā)生的曲線下面積為0.752(95%CI：0.688～0.815)，截?cái)嘀禐?5.723 μg/ml，敏感度為96.0%，特異度為51.7%。

圖1 血清FCN3預(yù)測(cè)反復(fù)上呼吸道感染發(fā)生ROC曲線

3 討 論

反復(fù)上呼吸道感染多見于學(xué)齡前兒童，隨著年齡的增長(zhǎng)，發(fā)病率逐年降低[8-11]。上呼吸道感染易受天氣、環(huán)境、自身免疫能力的影響，故易反復(fù)發(fā)作，最終形成反復(fù)呼吸道感染，甚至?xí)霈F(xiàn)感染中毒、重度肺炎，還可能危及患兒生命[12]。宋元玉[13]通過引入“創(chuàng)傷后成長(zhǎng)”概念，認(rèn)為反復(fù)呼吸道感染的患兒創(chuàng)傷后成長(zhǎng)水平低，其主要因素不僅包括患兒自身情況，而且與患兒家庭觀念及父母文化程度也有一定的關(guān)系。因此，對(duì)兒童反復(fù)上呼吸道感染的重視，既有關(guān)患兒本身的身心健康，也對(duì)其家庭和未來起著重要作用。

體液免疫和細(xì)胞免疫是參與機(jī)體免疫功能的重要機(jī)制。有研究[14-15]通過對(duì)反復(fù)呼吸道感染患兒機(jī)體免疫指標(biāo)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，IgA、IgG、IgM水平均明顯比健康正常兒童低，說明反復(fù)呼吸道感染不僅與病原體直接侵害有關(guān)，而且與患兒機(jī)體免疫功能也密切相關(guān)。Munteanu等[16]認(rèn)為，如果兒童時(shí)期發(fā)生長(zhǎng)期或合并嚴(yán)重并發(fā)癥反復(fù)感染，則應(yīng)考慮存在免疫缺陷，反復(fù)感染經(jīng)常累及上呼吸道，年齡在5歲內(nèi)的兒童1年內(nèi)可出現(xiàn)4～8次呼吸道感染發(fā)作。細(xì)胞免疫的改變可能與反復(fù)呼吸道感染有關(guān)。Pasternak等[17]對(duì)394例3個(gè)月至18歲的反復(fù)呼吸道感染患兒進(jìn)行評(píng)估，發(fā)現(xiàn)65%的反復(fù)呼吸道感染患兒存在體液免疫功能紊亂，兒童的呼吸道感染通常是由IgG、IgA、IgM表達(dá)水平異常導(dǎo)致的。本研究結(jié)果中，反復(fù)上呼吸道感染患兒血清IgA、IgG、IgM表達(dá)均低于對(duì)照組，提示患兒可能出現(xiàn)免疫功能低下，易引起上呼吸道感染，需醫(yī)護(hù)、家長(zhǎng)、學(xué)校三方密切關(guān)注，從而保證患兒的身心健康。

FCN是補(bǔ)體途徑甘露糖凝集素家族中的一種結(jié)合蛋白，也是近年來新發(fā)現(xiàn)的凝集素，其在抵抗病毒性相關(guān)疾病中起著極大的作用，其主要通過識(shí)別病毒表面糖蛋白激活補(bǔ)體途徑，達(dá)到降低病毒感染的效果[18]。FCN在人類及多種動(dòng)物體內(nèi)均有表達(dá)，目前在人類和脊椎動(dòng)物中有3類FCN，為M-Ficolin(Ficolin-1)、L-Ficolin(Ficolin-2)、H-Ficolin(Ficolin-3)，分別由FCN1、FCN2、FCN3基因編碼[19]。Man-Kupisinska等[20]發(fā)現(xiàn)重組FCN3以濃度依賴的方式與IgG和IgM相互作用。Michalski等[21]發(fā)現(xiàn)FCN3通過巨噬細(xì)胞增強(qiáng)肺炎鏈球菌的吞噬作用，具有殺菌活性。Plawecki等[22]在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者和健康受試者間發(fā)現(xiàn)抗FCN3水平存在顯著差異，165例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中有56例檢測(cè)到抗FCN3抗體呈陽性。本研究中，反復(fù)上呼吸道感染患兒血清中FCN3表達(dá)水平低于對(duì)照組，因此猜測(cè)FCN3參與反復(fù)上呼吸道感染病程并呈現(xiàn)低表達(dá)狀態(tài)，其可能通過巨噬細(xì)胞表現(xiàn)出一定殺菌活性，表達(dá)降低可能是由反復(fù)感染所導(dǎo)致的消耗，但是否以濃度依賴的方式與體液免疫指標(biāo)相關(guān)，仍需進(jìn)一步研究。另外，本研究中患兒治療后血清FCN3表達(dá)水平較治療前提高，提示FCN3與患兒病情有關(guān)，患兒FCN3表達(dá)上調(diào)可能與所采用的抗感染治療提高巨噬細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)作用相關(guān)。

Pearson分析顯示，F(xiàn)CN3表達(dá)水平與IgA、IgG、IgM均呈正相關(guān)，進(jìn)一步驗(yàn)證FCN3表達(dá)是與體液免疫指標(biāo)相關(guān)并呈正相關(guān)，但究竟是否存在相關(guān)共同機(jī)制或靶標(biāo)，是否是引起與被引起的關(guān)系，仍需未來詳細(xì)研究。ROC曲線分析顯示，血清中FCN3預(yù)測(cè)反復(fù)上呼吸道感染發(fā)生的曲線下面積為0.752，截?cái)嘀禐?5.723 μg/ml，敏感度為96.0%，說明FCN3水平對(duì)于預(yù)測(cè)反復(fù)上呼吸道感染有一定的作用，可以作為預(yù)測(cè)反復(fù)上呼吸道感染發(fā)生的敏感指標(biāo)，當(dāng)FCN3表達(dá)低于15.723 μg/ml時(shí)，患兒可能發(fā)生反復(fù)上呼吸道感染。但血清FCN3水平預(yù)測(cè)反復(fù)上呼吸道感染發(fā)生的特異性只有51.7%，相對(duì)較低，因此在臨床應(yīng)用中可聯(lián)合其他常見特異性較高的指標(biāo)，以提高特異性，降低誤診率。

綜上所述，反復(fù)上呼吸道感染患兒血清中FCN3低表達(dá)，且與IgA、IgG、IgM的表達(dá)水平呈正相關(guān)，是預(yù)測(cè)反復(fù)上呼吸道感染較為良好的指標(biāo)。但本研究仍存在不足，如樣本量具有局限性，未來可經(jīng)擴(kuò)大研究年份及研究區(qū)域進(jìn)行改善；也未研究反復(fù)上呼吸道感染患兒相關(guān)炎性因子表達(dá)情況，未來的研究可針對(duì)這一缺陷進(jìn)行補(bǔ)充。