趙卓姝 溫倩敏 劉鳳芝 何錦卿

(廣東醫(yī)科大學(xué)順德婦女兒童醫(yī)院(佛山市順德區(qū)婦幼保健院)，廣東 佛山 528300)

現(xiàn)產(chǎn)前診斷能有效降低新生兒畸形率。染色體核型分析是目前羊水穿刺細胞遺傳學(xué)產(chǎn)前診斷的重要手段，其染色體分辨率最高可達400條帶，但事實羊水細胞培養(yǎng)時間長、檢測分辨率偏低，導(dǎo)致染色體核型分析應(yīng)用較局限[1]。而基因拷貝數(shù)變異(CNVs)屬于一種基因結(jié)構(gòu)變異，可表現(xiàn)為突變的亞顯微水平基因片段拷貝數(shù)，通常包括DNA某一片段的缺失、重復(fù)、倒置、插入，基因片段的微缺失、微重復(fù)最為常見[2]。本文分析基于高通量測序技術(shù)的基因拷貝數(shù)變異檢測(NGS-CNVs)應(yīng)用于產(chǎn)前篩查的臨床價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年1月至2021年6月我院產(chǎn)前診斷中心的305例高風(fēng)險孕婦，均在超聲引導(dǎo)下完成羊水穿刺，穿刺成功后抽取羊水分別進行NGS-CNVs及細胞培養(yǎng)染色體核型分析。孕婦年齡21～39歲，平均年齡(34.62±4.21)歲；孕齡17～22周，平均孕齡(18.62±2.21)周；孕次1～5次，評均孕次(2.62±0.35)次；存在自然流產(chǎn)26例，人工流產(chǎn)218例。本研究所選的高危孕婦其中高齡孕婦95例(31.15%)、不良孕產(chǎn)史20例(6.56%)、唐氏篩查高風(fēng)險112例(36.72%)、超聲異常78例(25.57%)。所有孕婦及家屬均知情同意，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2方法 305例孕婦均接受遺傳咨詢并建立病例。所有孕婦在超聲引導(dǎo)下順利完成羊水穿刺，留取30 mL羊水，其中10 mL進行NGS-CNVs檢測，另外20 mL完成細胞培養(yǎng)染色體核型分析。NGS-CNVs檢測：選取本院HiSeq2000基因測序平臺，將檢測所得的CNVs對比人類已知公開的基因數(shù)據(jù)庫(DGV、OMIM、DECIPHER、ISCA、PUBMED)，根據(jù)對比結(jié)果明確CNVs類型及意義。羊水細胞培養(yǎng)染色體核型分析：進行羊水細胞培養(yǎng)，最后濃度為 25 μg/mL。培養(yǎng)至 40 倍目鏡下細胞島鋪滿視野，進行細胞消化收集后低滲處理，固定后制片，應(yīng)用全自動染色體掃描儀，采集染色體分裂相。G顯帶，染色體核型分析≥20個分裂相，若出現(xiàn)核型異常則計算≥40個分裂相，必要時對父母外周血染色體核型分析來源進行檢查。

2 結(jié) 果

2.1NGS-CNVs、染色體核型分析結(jié)果對比 NGS-CNVs、染色體核型分析在檢測染色體非整倍體中無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；NGS-CNVs在染色體小片段拷貝數(shù)異常檢出率高于染色體核型分析存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。見表1。

表1 NGS-CNVs、染色體核型分析結(jié)果對比[n(%)]

2.2超聲正常、異常組孕婦一般資料及CNVs檢出率對比 兩組孕婦一般資料比較(P>0.05)；超聲異常組CNVs檢出率高于正常組(P<0.05)。見表2。

表2 超聲正常、異常組孕婦一般資料及CNVs檢出率對比

3 結(jié) 果

NGS-CNVs 數(shù)據(jù)經(jīng)檢索人類公開遺傳數(shù)據(jù)庫，明確其臨床意義。因此，我們可以通過高通量測序檢測胎兒新發(fā)現(xiàn)拷貝數(shù)變異，發(fā)現(xiàn)大量致病性未知以及目前臨床認為屬于多態(tài)性的拷貝數(shù)變異，檢索或結(jié)合臨床病理標記其臨床意義[3-4]。性染色體異常，21、18、13染色體缺失均為常見的染色體數(shù)目異常類型，給胎兒帶來嚴重的生理缺陷。以往羊水染色體核型分析是檢測胎兒染色體數(shù)目異常的金標準，但羊水細胞培養(yǎng)周期長至7～10 d，耗時長，給孕婦、家屬心理帶來嚴重影響。本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NGS-CNVs檢測羊水染色體非整倍體結(jié)果與細胞染色體核型分析完全一致，說明NGS-CNVs檢測染色體數(shù)目非?？煽?。與戚桂杰等研究結(jié)果相類似[5]。NGS-CNVs技術(shù)在檢測胎兒染色體具有獨特的優(yōu)勢，檢測不需細胞培養(yǎng)，檢測過程僅2～3 d，提取羊水胎兒DNA迅速、可靠，減輕孕婦不必要的擔(dān)心。

CNVs已被證實與多種出生缺陷病密切相關(guān)，多表現(xiàn)為重要基因的微重復(fù)、缺失，因此如何高效的檢測CNVs尤為重要。細胞染色體核型分析存在局限性，對5Mb及以上的大片段失衡較為敏感，難以分辨更小片段的染色體結(jié)構(gòu)失衡[6]。NGS-CNVs則能發(fā)現(xiàn)片段在100Kb以上的基因缺失、重復(fù)，有效的檢測更多的微缺失、微重復(fù)，提高產(chǎn)前診斷的臨床意義[7]。本研究發(fā)現(xiàn)NGS-CNVs對染色體拷貝數(shù)變異檢出率顯著高于染色體核型分析，并在發(fā)現(xiàn)致病性CNVs、多態(tài)性CNVs、臨床意義未明CNVs數(shù)目顯著高于染色體核型分析(P<0.05)。進一步說明NGS-CNVs技術(shù)的重要意義。國內(nèi)劉淑敏等在臨床中發(fā)現(xiàn)2例產(chǎn)前診斷孕婦在羊水穿刺后NGS-CNVs、染色體核型分析結(jié)果不一致的現(xiàn)象，提示NGS-CNVs技術(shù)在分析染色體CNVs異常中的優(yōu)勢[8]。本文結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)期超聲異常組CNVs檢出率高于正常組(P<0.05)，基于此，在產(chǎn)前診斷中，超聲提示胎兒出現(xiàn)結(jié)構(gòu)、軟指標異常時，建議進一步完成NGS-CNVs檢測，避免新生兒出生缺陷。

綜上所述，NGS-CNVs可有效的檢出胎兒染色體非整倍體和CNVs，有助于改善產(chǎn)前診斷水平，更好的作為產(chǎn)前超聲篩查的補充。