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        人參四逆顆粒對慢性心力衰竭大鼠心功能和神經(jīng)內(nèi)分泌因子水平的影響▲

        2022-06-09 06:45:00陳東華梁榮中
        廣西醫(yī)學 2022年7期
        關(guān)鍵詞:心功能水平模型

        龍 珍 黃 毅 陳東華 梁榮中

        (1 廣西壯族自治區(qū)食品藥品審評查驗中心食品化妝品科,南寧市 530029,電子郵箱:404126527@qq.com;2廣西中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外科,南寧市 530022;廣西壯族自治區(qū)民族醫(yī)院3 藥劑科,4 體檢科,南寧市 530001)

        隨著老齡化的加劇,心血管疾病的發(fā)病率日益上升[1]。心肌梗死、心律失常、炎癥及血流動力學負荷過大等因素均會引發(fā)慢性心力衰竭 (chronic heart failure,CHF),而CHF具有發(fā)病率高、治愈難、易復發(fā)、病程長及致死率高等特征[2]。雖然近年來標準的抗心力衰竭治療使患者的生存期得到明顯延長,但其治療效果仍欠佳[2]。目前,我國傳統(tǒng)中醫(yī)藥在CHF治療中的應(yīng)用價值逐漸受到學者的重視,成為近年的研究熱點之一。人參四逆顆粒由紅參、附子、干姜、甘草組成,又稱“回陽飲”,是中醫(yī)回陽救逆的代表方劑,具有益氣活血、溫陽通絡(luò)、養(yǎng)心復元的作用。有學者報告,人參四逆顆粒對犬心力衰竭模型具有較好的治療效果[3]。但是,目前人參四逆顆粒治療CHF的作用機制及其對機體神經(jīng)內(nèi)分泌的影響尚缺乏文獻報告。因此,本研究擬探討人參四逆顆粒對CHF模型大鼠心功能和神經(jīng)內(nèi)分泌因子的影響。

        1 材料和方法

        1.1 實驗動物 9周齡清潔級雄性SD大鼠 90只,體重320~350(330.00±20.00)g,均購于遼寧生長生物技術(shù)有限公司(動物合格證號:SCXX-2005-0001)。所有大鼠均放置在廣西中醫(yī)藥大學動物實驗房進行7 d適應(yīng)性喂養(yǎng),飼養(yǎng)環(huán)境溫度(22±2)℃,常規(guī)飼料喂養(yǎng),自由飲水。按照隨機數(shù)字表法取30只SD大鼠作為空白對照組,剩余60只SD大鼠用于建立CHF模型。

        1.2 藥物、試劑和儀器 鹽酸阿霉素購自輝瑞制藥(無錫)有限公司(國藥準字:H20093251;規(guī)格:5 mL ∶10 mg);人參四逆顆粒由吉林省中醫(yī)中藥研究院化學所提供(生產(chǎn)批號:20100601;規(guī)格:3.66 g生藥/g生粉)。B型鈉尿肽(B-type natriuretic peptide,BNP;生產(chǎn)批號:20128186)、內(nèi)皮素(生產(chǎn)批號:20183141)、血管緊張素Ⅰ(angiotensin Ⅰ,AngⅠ)(生產(chǎn)批號:20174361)、血管緊張素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ) (生產(chǎn)批號:20143251)ELISA試劑盒均購自武漢碧云天生物科技有限公司。Vevo 2100型小動物高分辨率超聲成像系統(tǒng)購自加拿大VisualSonics公司;iWorx動物多導生理記錄儀購自美國iWorx公司;Vivid 7型心臟超聲診斷儀購自GE公司。

        1.3 建立CHF模型 采用鹽酸阿霉素腹腔注射法[4]建立CHF模型。建模方法如下:采用滅菌注射用水配置濃度為0.8 mg/mL的阿霉素溶液,前3周按3 mg/kg的劑量腹腔注射,后3周按2 mg/kg的劑量腹腔注射,每周給藥1次,連續(xù)給藥6周。建模成功標準:建模完畢后繼續(xù)喂養(yǎng)8周,采用Vivid 7型心臟超聲診斷儀檢測造模大鼠心功能,檢測結(jié)果顯示左室射血分數(shù)(left ventricular ejection fraction,LVEF)≤45%表示建模成功[5]。本研究中的60只大鼠均建模成功。

        1.4 分組與給藥 將成功建模的 60只大鼠按照隨機數(shù)字表法分為模型組、給藥組,每組30只。于建模成功后,給予空白對照組與模型組大鼠蒸餾水(10 mL/kg)灌胃,給予給藥組大鼠中等劑量人參四逆顆粒灌胃,藥物劑量參考《藥理實驗方法學》[6]中人與動物體表面積折算的等效劑量比率關(guān)系進行換算,最終確定中等藥物劑量為0.5 g/kg。將藥物溶于蒸餾水溶液,灌胃藥物體積為1 mL/kg,2次/d,其間所有大鼠均進行常規(guī)飼養(yǎng),自由飲水。連續(xù)給藥21 d。

        1.5 心功能指標的測定 連續(xù)給藥21 d后,采用Vivid 7型心臟超聲診斷儀測定大鼠的心功能水平,探頭頻率為11.4 MHz,圖像深度調(diào)至2.0~4.0 cm。檢查前腹腔注射10%水合氯醛(0.35 mL/100 g)對大鼠進行常規(guī)麻醉,檢查時先完成二維切面超聲檢查,并測量左室舒張末期內(nèi)徑(left ventricular end-diastolic diameter,LVEDD)、左室收縮末期內(nèi)徑(left ventricular end-systolic diameter,LVESD)、左室舒張末期室間隔厚度(interventricular septal thickness,IVST)、左室后壁厚度(left ventricular posterior wall thickness,LVPWT)、左室舒張末期容積(left ventricular end-diastolic volume,LVEDV)、左室收縮末期容積(left ventricular end-systolic volume,LVESV)。根據(jù)公式計算LVEF,LVEF=(LVEDV-LVESV)/LVEDV×100%[7]。藥物連續(xù)干預完畢后,測量大鼠體重;完成心功能指標的測定后,處死大鼠,迅速開胸取出心臟、肺臟;冰生理鹽水洗凈心臟,濾紙吸干后剪去左右心房和右心室,剩余部分即為左心室,稱量左心室重量(left ventricular weight,LVW)。

        1.6 神經(jīng)內(nèi)分泌因子水平的檢測 完成心功能指標的測定后,取大鼠尾靜脈血2 mL,迅速將血樣進行離心(3 000 r/min,離心半徑60 cm,離心時間10 min)分離血漿,密封后置于-80℃中冷存待檢。采用ELISA法檢測血漿BNP、內(nèi)皮素、AngⅠ、AngⅡ水平,所有操作均嚴格按照說明書執(zhí)行。

        1.7 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 22.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以(x±s)表示,多組間比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD-t檢驗,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

        2 結(jié) 果

        2.1 3組大鼠心功能的比較 干預21 d后,給藥組與模型組大鼠的IVST、LVPWT、LVESD、LVEDD、LVEDV均大于空白對照組大鼠,LVEF水平低于空白對照組,且模型組大鼠的LVW重于空白對照組大鼠(均P<0.05);給藥組大鼠的IVST、LVPWT、LVW、LVESD、LVEDV、LVEDD均小于模型組大鼠,LVEF水平高于模型組(均P<0.05),見表1。

        表1 3組大鼠心功能的比較(x±s)

        2.2 3組大鼠的血漿神經(jīng)內(nèi)分泌因子水平的比較 給藥組與模型組大鼠的血漿BNP、內(nèi)皮素、AngⅠ、AngⅡ水平均高于空白對照組大鼠(均P<0.05),而給藥組大鼠的血漿BNP、內(nèi)皮素、AngⅠ、AngⅡ水平均低于模型組大鼠(均P<0.05)。見表2。

        表2 3組大鼠血漿神經(jīng)內(nèi)分泌因子水平的比較(x±s,ng/L)

        3 討 論

        心力衰竭是常見的心血管疾病,其可引起心排血量相對或絕對不足,以致不能滿足機體組織代謝需要,是各種心血管疾病最終的共同轉(zhuǎn)歸。目前西醫(yī)治療CHF的藥物主要包括利尿劑、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、AngⅡ受體拮抗劑、β受體阻斷劑和醛固酮受體拮抗劑等,近年來新藥的研究進展不大。人參四逆湯是經(jīng)典方劑,具有回陽固脫的功效,人參四逆顆粒是由人參四逆湯提取,分離精制而成。研究表明,加味人參四逆湯可增加急性心肌梗死后心力衰竭大鼠的冠狀動脈血流量,改善心肌供血,增強心肌收縮力,增加心輸出量,從而改善大鼠心功能[5]。有學者報告,人參四逆顆??稍黾有牧λソ呷男妮敵隽?,改善犬血流動力學指標[3]。本研究中,模型組大鼠的IVST、LVPWT、LVW、LVESD、LVEDD、LVEDV均大于空白對照組,LVEF水平均低于空白對照組(均P<0.05),而給予人參四逆顆粒干預21 d后,給藥組上述指標均優(yōu)于模型組(均P<0.05)。這表明,人參四逆顆粒能改善CHF大鼠的心功能。

        心力衰竭時,交感神經(jīng)系統(tǒng)和腎素-血管緊張素系統(tǒng)被激活,兒茶酚胺、 AngⅡ和醛固酮等神經(jīng)激素和細胞因子釋放增多,進而損傷心血管系統(tǒng);同時心肌和血管自身也能合成和分泌一些神經(jīng)激素及細胞因子,例如去甲腎上腺素、 AngⅡ、 醛固酮、生長因子和炎癥細胞因子等,以影響心肌和血管[8]。這些有生物活性的神經(jīng)激素的過度表達可造成心肌損傷和循環(huán)功能受損[8]。BNP是一種由心肌細胞分泌的利尿鈉肽的重要成員之一,是評估心功能的客觀指標[9]。研究表明,CHF患者BNP水平表達越高,其預后越差;治療期間BNP水平降低不明顯,則發(fā)生各種并發(fā)癥的概率增加[10]。內(nèi)皮素1是目前已知的最強大的內(nèi)源性縮血管物質(zhì),缺血缺氧導致血管內(nèi)皮受損時,內(nèi)皮素1的合成與釋放增加[11-12]。心力衰竭發(fā)生后,內(nèi)皮素1的水平升高,進一步引起心肌及血管收縮、重構(gòu)[12]。本研究結(jié)果顯示,模型組大鼠的血漿BNP、內(nèi)皮素、AngⅠ、AngⅡ水平均高于空白對照組(均P<0.05),而給藥組大鼠的上述指標水平均低于模型組大鼠(均P<0.05)。這表明,心力衰竭大鼠的神經(jīng)內(nèi)分泌細胞因子水平異常升高,而人參四逆顆??山档虲HF大鼠的神經(jīng)內(nèi)分泌細胞因子水平,這可能是其治療CHF的重要機制之一。

        綜上所述,人參四逆顆粒能改善CHF大鼠的心臟功能,其或通過降低神經(jīng)內(nèi)分泌細胞因子水平而發(fā)揮治療CHF作用,但其臨床應(yīng)用價值仍需進一步探討。

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