毛愛榮，李戰(zhàn)飛，韓玉新，袁曉雁，陳靜

1解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第988醫(yī)院焦作院區(qū)婦科一區(qū)，河南 焦作 454150

2南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣州 510515

宮頸癌是女性中常見的惡性腫瘤，全球發(fā)病率僅次于乳腺癌。隨著不良生活習(xí)慣的影響，該病發(fā)病率逐年提高，且呈年輕化趨勢。目前世界醫(yī)學(xué)中關(guān)于宮頸癌的發(fā)病機(jī)制尚未明確，但有較多研究認(rèn)為，初次性生活發(fā)生在18歲以前、性伴侶過多、人乳頭瘤病毒感染等均為影響宮頸癌發(fā)病的相關(guān)因素[1-2]。相關(guān)研究報(bào)道，患者機(jī)體免疫應(yīng)答平衡失調(diào)與女性宮頸癌的發(fā)生有著密切聯(lián)系[3]。因此，近年來CD4+T淋巴細(xì)胞抗腫瘤免疫的作用受到了廣大學(xué)者的關(guān)注，但CD4+T細(xì)胞亞群在宮頸癌患者體內(nèi)的平衡狀態(tài)與該病發(fā)生、進(jìn)展及預(yù)后的研究較少。本文進(jìn)一步分析宮頸癌患者CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)與宮頸癌發(fā)生、進(jìn)展及預(yù)后的關(guān)系，旨在為臨床診治宮頸癌提供新思路，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2014年2月至2018年2月解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第988醫(yī)院焦作院區(qū)收治的宮頸癌患者的病歷資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)手術(shù)或穿刺活檢證實(shí)為宮頸癌；②年齡40～72歲；③臨床資料無缺失。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期、哺乳期女性；②合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤及重要器官嚴(yán)重疾?。虎劢邮苓^手術(shù)、化療、激素等治療。按照納入、排除標(biāo)準(zhǔn)，共納入48例宮頸癌患者，設(shè)為觀察組，年齡40～72歲，平均（59.67±3.58）歲；國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）分期[4]：Ⅰ～Ⅱ期19例，Ⅲ～Ⅳ期29例；中～低分化20例，高分化28例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18例；病理類型：鱗狀細(xì)胞癌28例，腺癌20例。另選取同期在解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第988醫(yī)院焦作院區(qū)進(jìn)行健康體檢的52例女性，設(shè)為對(duì)照組，年齡 39～71歲，平均（59.47±3.22）歲。兩組研究對(duì)象年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。取觀察組患者的宮頸癌組織及對(duì)照組女性的正常宮頸組織。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

采用免疫組化法檢測宮頸癌組織標(biāo)本及正常宮頸組織標(biāo)本CD4+T細(xì)胞亞群表達(dá)情況，包括γ干擾素（interferon-γ，IFN-γ）、白細(xì)胞介素-2（interleukin-2，IL-2）、白細(xì)胞介素-4（interleukin-4，IL-4）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）。檢測過程嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，對(duì)比檢測結(jié)果。小鼠抗IFN-γ單克隆抗體及兔抗IL-2、IL-4、IL-6抗體均購自美國Beckman Coulter公司，DNA顯色劑購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司，抗體免疫組織化學(xué)試劑盒購自上海嶸葳達(dá)實(shí)業(yè)有限公司。

CD4+T細(xì)胞亞群（IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6）陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽性細(xì)胞。陽性細(xì)胞百分比評(píng)分：無陽性細(xì)胞為0分，＜30%為1分，≥30%為2分。染色強(qiáng)度評(píng)分：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。兩項(xiàng)評(píng)分相乘，≥3分為陽性。陽性率=陽性例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.3 隨訪

以電話隨訪及門診復(fù)診的方式對(duì)48例宮頸癌患者進(jìn)行隨訪，回訪率100%。記錄宮頸癌患者治療后預(yù)后情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析；影響因素分析采用Logistic回歸模型；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IFN- γ、IL- 2、IL- 4、IL- 6表達(dá)情況的比較

觀察組患者IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6陽性表達(dá)率均高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

表1 兩組患者IFN- γ、IL- 2、IL- 4、IL- 6表達(dá)情況的比較[ n（%）]

2.2 不同IFN- γ、IL- 2、IL- 4、IL- 6表達(dá)情況宮頸癌患者預(yù)后的比較

IFN-γ陽性表達(dá)患者的平均生存期為（20.14±2.10）個(gè)月，短于陰性表達(dá)患者的（24.75±2.54）個(gè)月（t=26.547，P=0.027）；IL-2陽性表達(dá)患者的平均生存期為（10.50±2.12）個(gè)月，短于陰性表達(dá)患者的（21.56±2.78）個(gè)月（t=18.751，P=0.013）；IL-4陽性表達(dá)患者的平均生存期為（19.08±1.68）個(gè)月，短于陰性表達(dá)患者的（23.36±2.25）個(gè)月（t=21.160，P=0.025）；IL-6陽性表達(dá)患者的平均生存期為（19.74±2.08）個(gè)月，短于陰性表達(dá)患者的（23.91±2.38）個(gè)月（t=18.542，P=0.021）。

2.3 宮頸癌患者預(yù)后影響因素的單因素分析

不同年齡、病理類型宮頸癌患者2年生存情況比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；不同F(xiàn)IGO分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6表達(dá)情況的宮頸癌患者的2年生存情況比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表2）

表2 宮頸癌患者預(yù)后影響因素的單因素分析

2.4 宮頸癌患者預(yù)后影響因素的Logistic回歸分析

經(jīng)非條件多因素Logistic回歸模型進(jìn)一步分析得出，F(xiàn)IGO分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中～低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、IFN-γ陽性、IL-2陽性、IL-4陽性、IL-6陽性均為宮頸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。（表3）

表3 宮頸癌患者預(yù)后影響因素的Logistic回歸分析

3 討論

宮頸癌具有較高的病死率，患者預(yù)后不佳。既往研究表明，中國宮頸癌每年新發(fā)病例約13萬，隨著宮頸癌普查普治工作的開展，該病發(fā)病率有所下降，但宮頸癌的診治仍不理想[5]。相關(guān)流行病學(xué)資料指出，宮頸癌的發(fā)生與人乳頭瘤病毒感染有著密切聯(lián)系，同時(shí)還與行為因素、宿主因素的協(xié)同作用有關(guān)[6]。

隨著對(duì)宮頸癌發(fā)病機(jī)制的不斷深入研究，宮頸癌患者機(jī)體免疫系統(tǒng)狀態(tài)逐漸受到廣大學(xué)者的關(guān)注，T淋巴細(xì)胞對(duì)腫瘤的作用成為了研究熱點(diǎn)。T淋巴細(xì)胞是免疫系統(tǒng)中最重要的細(xì)胞群之一，其對(duì)殺傷、控制腫瘤細(xì)胞生長有重要意義。CD4+T細(xì)胞于20世紀(jì)80年代首次被Suzukawa等[7]學(xué)者發(fā)現(xiàn)，其主要有兩類細(xì)胞，即Th1、Th2細(xì)胞，兩類細(xì)胞分別產(chǎn)生IFN-γ、IL-2及IL-4、IL-6等因子。

目前，關(guān)于Th1與Th2細(xì)胞在宮頸癌中的研究較少，本研究采用免疫組化法檢測Th1、Th2細(xì)胞中的細(xì)胞因子在宮頸癌中的表達(dá)情況，并分析其與宮頸癌患者預(yù)后的關(guān)系。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組織中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6陽性表達(dá)率均高于正常宮頸組織（P＜0.05），這一研究結(jié)果與既往文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果相似[8]?？梢奣h細(xì)胞的調(diào)節(jié)因子會(huì)影響Th細(xì)胞的功能，其相關(guān)的細(xì)胞因子影響著宮頸癌細(xì)胞的損傷及腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展，可為宮頸癌患者的治療提供新的靶點(diǎn)[9]。

本研究通過非條件多因素Logistic回歸模型進(jìn)一步分析得出，F(xiàn)IGO分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中～低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、IFN-γ陽性、IL-2陽性、IL-4陽性、IL-6陽性均為宮頸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。分析其原因：FIGO分期反映疾病的嚴(yán)重程度，可作為預(yù)后判斷的重要參考因素，隨著臨床分期的增高，宮頸癌患者死亡風(fēng)險(xiǎn)增大。有研究指出，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者3年生存率為55%[10]，本研究中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者2年生存率僅為33.33%（10/30），考慮與本研究納入樣本量過少有關(guān)。健康人體內(nèi)Th1、Th2細(xì)胞亞群內(nèi)相關(guān)因子處于平衡狀態(tài)，一亞群阻礙另一亞群的增殖功能，維持機(jī)體內(nèi)正常免疫功能，而宮頸癌患者機(jī)體Th1、Th2細(xì)胞亞群平衡失調(diào)，使機(jī)體免疫功能紊亂[11-13]。有研究報(bào)道，IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6表達(dá)水平的變化為患者Th1/Th2平衡失調(diào)的主要原因，且上述因子在食管癌、肝癌患者中均有相似表達(dá)，相關(guān)因子陽性表達(dá)患者預(yù)后更差[14-15]。

綜上所述，F(xiàn)IGO分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中～低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、IFN-γ陽性、IL-2陽性、IL-4陽性、IL-6陽性不利于宮頸癌患者預(yù)后。Th1、Th2相關(guān)因子表達(dá)可作為判斷宮頸癌發(fā)生、進(jìn)展的標(biāo)志物，對(duì)評(píng)估患者預(yù)后有重要意義。由于本研究納入樣本量較少，且目前類似研究較少，導(dǎo)致本研究存在一定局限性，未來有待進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，以便對(duì)宮頸癌患者腫瘤組織中CD4+T細(xì)胞平衡失調(diào)與患者預(yù)后的關(guān)系進(jìn)行深入研究。