雷裕 卓志強(qiáng)

[摘要] 目的 了解廈門(mén)地區(qū)呼吸道合胞病毒（RSV）感染住院患兒不同檢測(cè)方法的特點(diǎn)。方法? 選擇2020年1—10月廈門(mén)市兒童醫(yī)院住院的患兒，通過(guò)采集患兒鼻咽拭子2份，用熒光免疫方法進(jìn)行七項(xiàng)呼吸道病毒抗原檢測(cè)、PCR方法進(jìn)行三聯(lián)核酸檢測(cè)，以及血清1份用于呼吸道病毒五聯(lián)抗體，收集任一結(jié)果陽(yáng)性的呼吸道合胞病毒感染患兒91例，通過(guò)觀察陽(yáng)性率結(jié)果對(duì)比三種方法的優(yōu)劣。 結(jié)果 91例陽(yáng)性標(biāo)本中PCR陽(yáng)性91例（100%），抗原陽(yáng)性61例（67.03%），抗體陽(yáng)性1例（1.11%）。91例RSV感染病例中，診斷為肺炎72例（79.12%），喘息性支氣管炎8例（8.79%），支氣管炎10例（10.99%），傳染性單核細(xì)胞增多癥1例（1.10%）。19例（20.88%）混合支原體感染，12例（13.19%）混合卡他莫拉菌感染，8例（8.79%）混合肺炎鏈球菌感染，1例（1.10%）混合流感嗜血桿菌感染。<1歲19例，1～2歲18例，3～4歲39例，>4歲15例。男54例、女37例。平均住院天數(shù)5.9 d。結(jié)論 通過(guò)三種不同檢測(cè)手段檢測(cè)病毒核酸、抗原、抗體，結(jié)果核酸陽(yáng)性率最高，其次是抗原，抗體陽(yáng)性率幾乎為0。

[關(guān)鍵詞] 呼吸道合胞病毒;呼吸道感染;兒童;檢測(cè)方法

[中圖分類(lèi)號(hào)] R446.5? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2022）10-0092-03

[Abstract] Objective To understand the characteristics of different detection methods for Respiratory Syncytial Virus （RSV） infection in hospitalized children in Xiamen. Methods Children hospitalized in Xiamen Children′s Hospital from January to October 2020 were selected. Two nasopharyngeal swabs were collected， seven respiratory virus antigens were detected by fluorescence immunoassay， triple nucleic acid was detected by PCR， one serum sample was used for respiratory virus quintuplet antibody， and 91 children with RSV infection with positive results were collected. The advantages and disadvantages of the three methods were compared by observing the positive rate. Results Among the 91 positive samples， 91 cases were positive for PCR （100%）， 61 cases （67.03%） were antigen-positive， and 1 case （1.11%） was antibody-positive. Among 91 cases of RSV infection， 72 cases （79.12%） were diagnosed as pneumonia， 8 cases （8.79%） as wheezing bronchitis， 10 cases （10.99%） as bronchitis， and 1 case （1.10%） as infectious mononucleosis. There were 19 cases （20.88%） complicated with mycoplasma infection， 12 cases （13.19%） with Moraxella catarrhalis infection， 8 cases （8.79%） with Streptococcus pneumoniae infection and 1 case （1.10%） with Haemophilus influenzae infection. 19 cases were less than 1 year old， 18 cases were 1-2 years old， 39 cases were 3-4 years old， and 15 cases were more than 4 years old. There were 54 boys and 37 girls. The average hospital stay was 5.9 days. Conclusion The virus nucleic acid， antigen and antibody were detected by three different detection methods. The results showed that the positive rate of nucleic acid was the highest， followed by antigen， and the positive rate of antibody was almost zero.

[Key words] Respiratory syncytial virus; Respiratory tract infection; Children; Detection method5F309200-687F-4754-BCEF-BA3E0A6D4908

呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）可引起所有年齡段人群的急性呼吸道疾病。幾乎所有兒童在2歲之前都感染過(guò)RSV[1]，再感染也較常見(jiàn)。RSV在鼻咽部復(fù)制后感染小細(xì)支氣管上皮細(xì)胞，不感染基底細(xì)胞，然后擴(kuò)展至肺的Ⅰ型和Ⅱ型肺泡細(xì)胞，這一過(guò)程可能是通過(guò)細(xì)胞間傳播或吸入分泌物完成;RSV的病理表現(xiàn)包括：上皮細(xì)胞壞死、偶有細(xì)支氣管上皮細(xì)胞增生、聚集于支氣管小動(dòng)脈和肺小動(dòng)脈的單核細(xì)胞及T細(xì)胞浸潤(rùn)，以及血管結(jié)構(gòu)和小氣道之間的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。這導(dǎo)致氣道阻塞、空氣滯留和氣道阻力增加，而且與支氣管肺泡灌洗液中發(fā)現(xiàn)中性粒細(xì)胞增多有關(guān)。實(shí)驗(yàn)室提供及時(shí)準(zhǔn)確的病原檢測(cè)報(bào)告，對(duì)臨床醫(yī)師及時(shí)明確病因、控制RSV感染的蔓延、采用特異性針對(duì)性治療方案、防止濫用抗生素都具有重大意義[2-6]。本研究選擇通過(guò)不同方法的比較從91例RSV感染患兒采用三種不同檢測(cè)手段進(jìn)行數(shù)據(jù)對(duì)比，以期能對(duì) RSV的感染提供陽(yáng)性率高的檢測(cè)方法，為臨床醫(yī)師選擇合適的檢測(cè)方法提供依據(jù)[7]。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

收集2020年1—10月廈門(mén)市兒童醫(yī)院住院的91例患兒為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：鼻咽拭子、血清標(biāo)本、痰液標(biāo)本，檢測(cè)RSV抗原、核酸及抗體，至少1個(gè)結(jié)果陽(yáng)性者。其中男54例，女37例;年齡2個(gè)月19 d至5歲7個(gè)月，<1歲：19例，1～2歲18例，3～4歲39例，>4歲15例。平均住院天數(shù)5.9 d。

1.2 方法

①呼吸道病毒五聯(lián)抗體檢測(cè)：抽取調(diào)查對(duì)象靜脈血2 ml，2 h內(nèi)分離血清，采用免疫熒光（IFA）方法檢測(cè)血清中肺炎衣原體、肺炎支原體、呼吸道合胞病毒、腺病毒以及柯薩奇病毒的血清IgM抗體。

②七項(xiàng)呼吸道病原抗原：采用Diagnostic Hybrids，Inc公司生產(chǎn)的七項(xiàng)呼吸道病毒檢測(cè)試劑盒（免疫熒光法），主要通過(guò)基于熒光標(biāo)記單克隆抗體的免疫熒光法，對(duì)鼻咽吸取液、痰液的呼吸道合胞病毒進(jìn)行定性檢測(cè)。定性檢測(cè)：急性呼吸道感染患兒住院7 d內(nèi)留取標(biāo)本，采用一次性無(wú)菌吸痰管吸取1～2 ml深部鼻咽分泌物或痰液，加入少量生理鹽水置于收集管中或行纖維支氣管鏡吸取肺泡灌洗液及時(shí)送實(shí)驗(yàn)室行直接免疫熒光（direct immunofluorescence assayk，DFA）檢測(cè)[8]。

③三聯(lián)核酸：用無(wú)菌的捻拭子或植絨性拭子拭取人鼻咽部分泌物，將鼻咽拭子置入2 ml滅菌的生理鹽水中，立即送檢。采用核酸多重檢測(cè)方法檢測(cè)患者中腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒三種呼吸道病毒病原體，有效期內(nèi)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo)

無(wú)論是一種還是兼并兩種以上檢測(cè)結(jié)果呈現(xiàn)陽(yáng)性，均視為陽(yáng)性感染。

2 結(jié)果

2.1 病毒檢測(cè)結(jié)果

91例患兒中檢出RSV-RNA陽(yáng)性91例，陽(yáng)性檢出率為100.00%，抗原陽(yáng)性61例（67.03%），抗體陽(yáng)性1例（1.11%）。見(jiàn)表1。

2.2 臨床特點(diǎn)

91例RSV感染病例中，診斷為肺炎72例（79.12%），喘息性支氣管炎8例（8.79%），支氣管炎10例（10.99%），傳染性單核細(xì)胞增多癥1例（1.10%）。19例（20.88%）混合支原體感染，12例（13.19%）混合卡他莫拉菌感染，8例（8.79%）混合肺炎鏈球菌感染，1例（1.10%）混合流感嗜血桿菌感染。<1歲19例，1～2歲18例，3～4歲39例，>4歲15例。男54例，女37例。平均住院天數(shù)5.9 d。

3 討論

兒童90%以上的急性呼吸道感染是由病毒引起的。常見(jiàn)的呼吸道病毒主要包括呼吸道合胞病毒、流感病毒A、流感病毒B、腺病毒、副流感病毒、人冠狀病毒、鼻病毒等[9-16]。在發(fā)展中國(guó)家，RSV感染是所致毛細(xì)支氣管炎或肺炎患兒死亡的主要病因之一[17-20];而在美國(guó)，每年因RSV感染住院的嬰兒有75 000～125 000例，尤其多見(jiàn)于早產(chǎn)兒及呼吸系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)有缺陷的小嬰兒。RSV能在全世界引起季節(jié)性暴發(fā)，每年造成全球100萬(wàn)以上兒童的死亡。在北半球，暴發(fā)一般出現(xiàn)在10月或11月至次年4月或5月，1月或2月為高峰期。在南半球，冬季RSV感染流行出現(xiàn)在5月至9月，高峰期在5月、6月或7月。幾乎所有兒童在2歲之前都感染過(guò)RSV，再感染也較常見(jiàn)。RSV是1歲以下兒童中下呼吸道感染的最常見(jiàn)病因[21]。RSV是一種反義單鏈RNA病毒，屬副黏病毒科。A和B兩種亞型在多數(shù)RSV暴發(fā)中同時(shí)出現(xiàn)，A亞型引起的疾病常更嚴(yán)重。亞型中有幾種基因型在一個(gè)社區(qū)中占據(jù)優(yōu)勢(shì)，優(yōu)勢(shì)毒株每年輪換，這可能是導(dǎo)致頻繁再感染的原因。RSV主要通過(guò)鼻咽黏膜或眼黏膜接觸含病毒的分泌物或污染物而傳播。直接接觸是最常見(jiàn)的傳播途徑，氣溶膠飛沫也可引起傳播。RSV可在手和污染物上存活數(shù)小時(shí)。因此，洗手和接觸防護(hù)是預(yù)防醫(yī)療保健相關(guān)傳播的重要措施[22-23]。RSV感染的潛伏期通常為4～6 d（范圍在2～8 d）。RSV在鼻咽部復(fù)制后感染小細(xì)支氣管上皮細(xì)胞，不感染基底細(xì)胞，然后擴(kuò)展至肺的Ⅰ型和Ⅱ型肺泡細(xì)胞，這一過(guò)程可能是通過(guò)細(xì)胞間傳播或吸分泌物完成;1～3 d后出現(xiàn)LRTI（毛細(xì)支氣管炎或肺炎）。RSV的病理表現(xiàn)包括：上皮細(xì)胞壞死、偶有細(xì)支氣管上皮細(xì)胞增生、聚集于支氣管小動(dòng)脈和肺小動(dòng)脈的單核細(xì)胞及T細(xì)胞浸潤(rùn)，以及血管結(jié)構(gòu)和小氣道之間的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。這導(dǎo)致氣道阻塞、空氣滯留和氣道阻力增加，而且與支氣管肺泡灌洗液中發(fā)現(xiàn)中性粒細(xì)胞增多有關(guān)。

RSV感染的臨床表現(xiàn)因患者年齡、健康狀況以及感染為原發(fā)還是繼發(fā)而異[24]。原發(fā)性感染的嬰幼兒通常表現(xiàn)為L(zhǎng)RTI（毛細(xì)支氣管炎或肺炎），年齡較大的兒童和成人通常表現(xiàn)為上呼吸道癥狀或氣管、支氣管炎。RSV可在兒童中導(dǎo)致嚴(yán)重的下呼吸道疾病、毛細(xì)支氣管炎、支氣管痙攣、肺炎和急性呼吸衰竭[25]。下呼吸道疾病常發(fā)生在初次感染時(shí)，并可見(jiàn)于50%以上的二次感染。雖然第3次感染之后疾病嚴(yán)重程度下降，但即使在健康成人中也有約1/4有LRTI表現(xiàn)。大約20%的嬰兒在出生后的第1年會(huì)出現(xiàn)RSV相關(guān)的哮鳴音;2%～3%需要住院治療。RSV反復(fù)感染在兒童和年輕成人中頻發(fā)，可導(dǎo)致明顯的上呼吸道癥狀。其表現(xiàn)包括咳嗽、鼻卡他、鼻溢和結(jié)膜炎。與其他呼吸道病毒相比，RSV更可能累及鼻竇和耳。觀察性研究表明，對(duì)于90日齡以下的伴RSV感染毛細(xì)支氣管炎的發(fā)熱小嬰兒，菌血癥或腦膜炎的風(fēng)險(xiǎn)不到1%～2%;泌尿道感染風(fēng)險(xiǎn)為1%～5%，低于不伴毛細(xì)支氣管炎的發(fā)熱嬰兒，但也不能忽視。繼發(fā)性細(xì)菌感染在因RSV毛細(xì)支氣管炎住院的嬰兒中也不少見(jiàn)。RSV感染通常呈自限性病程，不會(huì)導(dǎo)致明顯的長(zhǎng)期肺部后遺癥。然而，RSV感染與一些患者的復(fù)發(fā)性哮鳴有關(guān)。RSV肺炎導(dǎo)致呼吸衰竭是免疫功能受損宿主中急性發(fā)病和死亡的一個(gè)重要原因，在造血干細(xì)胞移植患者中報(bào)道的死亡率為70%～100%。有研究結(jié)果顯示，RSV感染在肺移植或腎移植患者中似乎不會(huì)引起慢性肺功能障礙。5F309200-687F-4754-BCEF-BA3E0A6D4908

對(duì)于具有典型毛細(xì)支氣管炎的既往體健嬰幼兒，臨床疑診RSV感染通常便足夠。在這類(lèi)患兒中鑒定RSV不太可能影響治療。如果鑒定RSV會(huì)影響臨床治療，則應(yīng)進(jìn)行RSV感染的實(shí)驗(yàn)室診斷。RSV的實(shí)驗(yàn)室診斷可通過(guò)分析呼吸道分泌物及血清抗體實(shí)現(xiàn)。對(duì)于健康兒童，鼻腔沖洗的檢出率最高，但如果鼻腔沖洗不可行，鼻咽拭子或咽拭子可能也是適用的。對(duì)于插管患者或正接受支氣管鏡檢查的患者，應(yīng)進(jìn)行氣管吸引或支氣管肺泡灌洗。確診標(biāo)準(zhǔn)是在HEp-2細(xì)胞中分離出RSV。發(fā)現(xiàn)典型的病毒空斑伴合胞體形成，聯(lián)合免疫熒光染色能確診?？衫每乖东@技術(shù)實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)，不到30 min即可完成。這些檢查具有相對(duì)高水平的敏感度和特異度，是大部分臨床實(shí)驗(yàn)室的主要診斷方法。

本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，91例患兒中PCR陽(yáng)性91例（100%），抗原陽(yáng)性61例，檢出率67.03%，抗體陽(yáng)性1例（1.11%）。91例呼吸道合胞病毒（RSV）感染病例中，診斷為肺炎72例（79.12），喘息性支氣管炎8例（8.79%），支氣管炎10例（10.99%），傳染性單核細(xì)胞增多癥1例（1.10%）。19例（20.88%）混合支原體感染，12例（13.19%）混合卡他莫拉菌感染，8例（8.79%）混合肺炎鏈球菌感染，1例（1.10%）混合流感嗜血桿菌感染。<1歲19例，1～2歲18例，3～4歲39例，>4歲15例。男54例，女37例。平均住院天數(shù)5.9 d。數(shù)據(jù)顯示呼吸道合胞病毒（RSV）是引發(fā)兒童急性呼吸道疾病常見(jiàn)病原，0～4歲RSV高發(fā)，男女比例相當(dāng)，RSV可在兒童中導(dǎo)致嚴(yán)重的下呼吸道疾病、毛細(xì)支氣管炎、支氣管痙攣、肺炎和急性呼吸衰竭，易混合肺炎支原體、卡他莫拉菌、肺炎鏈球菌感染。通過(guò)三種不同檢測(cè)手段檢測(cè)病毒核酸、抗原、抗體，結(jié)果核酸敏感度最高，其次是抗原，抗體在本次實(shí)驗(yàn)中陽(yáng)性率幾乎為0。

綜上所述，熒光定量RT-PCR熒光探針?lè)z測(cè)核酸和直接免疫熒光檢測(cè)病毒抗原的陽(yáng)性檢出率均高于血清抗體的檢測(cè)。熒光定量RT-PCR技術(shù)具有快速、敏感、特異度強(qiáng)等特點(diǎn)，越來(lái)越多地應(yīng)用到醫(yī)學(xué)臨床檢測(cè)。RT-PCR熒光探針?lè)ńY(jié)合PCR和熒光探針兩種技術(shù)，具備敏感度高、漏檢率低及特異度高的特點(diǎn)，進(jìn)一步提高檢測(cè)的準(zhǔn)確度。直接免疫熒光（DFA）檢測(cè)的是RSV抗原，其在感染RSV后產(chǎn)生時(shí)間較抗體快，該方法雖然操作簡(jiǎn)單，出結(jié)果快，適用于臨床早期檢測(cè)。但由于體內(nèi)RSV特異性抗體產(chǎn)生慢，且滴度低，檢測(cè)的敏感性不高，因此通過(guò)對(duì)患者血清抗體測(cè)定來(lái)診斷RSV感染，不能為臨床醫(yī)師及時(shí)提供診療依據(jù)，且這種檢測(cè)抗體的免疫學(xué)方法反映的是感染的間接指標(biāo)，不能替代直接的病原學(xué)檢測(cè)。

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（收稿日期：2021-05-17）5F309200-687F-4754-BCEF-BA3E0A6D4908