周亞麗 徐宇浩 徐建慧 黨玉婷 于 明

阿爾茨海默病(Alzheimer′s disease，AD)是最為常見的神經(jīng)退行性疾病之一，以記憶喪失、行為改變和認(rèn)知障礙進行性加重為主要特征，病因尚不明確[1]。近年來，AD的神經(jīng)炎性機制引起了廣泛重視，但相關(guān)研究仍高度欠缺，為AD炎性機制的完善帶來困擾[2]。研究顯示，多種白介素(interleukin，IL)可通過參與神經(jīng)元、小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞間的相互作用，進而促進AD神經(jīng)炎癥的進展[3, 4]。由此，IL家族與AD的關(guān)系受到廣泛關(guān)注。近年來研究顯示，IL-32對小鼠顱內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞激活、淀粉樣蛋白生成和神經(jīng)炎癥具有促進作用，進而導(dǎo)致小鼠記憶障礙加重，在動物層面提示了IL-32與AD的密切關(guān)聯(lián)[5]。然而，IL-32與AD的臨床研究目前未見報道。因此，本研究以首發(fā)AD患者為研究對象，血清IL-32為觀察指標(biāo)，從臨床層面探討IL-32在AD患者血清中的變化，并對其診斷價值進行評估，報道如下。

對象與方法

1.對象:選取2020年8月～2021年6月在江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科就診的首診AD患者61例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①參考《精神病診斷和統(tǒng)計手冊》的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；②簡易智能精神狀態(tài)檢查量表(mini-mental state examination，MMSE)評分0～26分；③MRI提示雙側(cè)顳葉、海馬萎縮。排除標(biāo)準(zhǔn):①合并嚴(yán)重的心腦血管疾病、肝腎疾病、精神疾病、風(fēng)濕免疫性疾病、腫瘤等疾病者；②其他疾病導(dǎo)致的認(rèn)知功能障礙者；③依從性差者；④有其他不適宜入選的情況。其中男性31例，女性30例，平均年齡為72.80±11.10歲。同期選取筆者醫(yī)院40例年齡、性別匹配的老年體檢者為對照組，其中男性21例，女性19例，平均年齡為71.80±10.70歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①尿常規(guī)、糞便常規(guī)、血常規(guī)、凝血常規(guī)及肝腎功能存在異常;②自身免疫性疾病;③認(rèn)知功能障礙;④急性應(yīng)激狀態(tài);⑤癌癥。本研究經(jīng)江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會審查批準(zhǔn)(倫理審批號：SWYXLL20210401-12)，所有受試者均簽署知情同意書。

2.研究方法:所有研究對象空腹10h后晨起采集靜脈血5ml，不抗凝，置于3000r/min離心10min后分離上清，-70℃環(huán)境中保存，采用ELISA法測定血清IL-32，ELISA試劑盒購于鎮(zhèn)江優(yōu)化生物科技有限公司，具體操作參照說明書；使用生化分析儀檢測血清甘油三脂、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)、空腹血糖。

結(jié) 果

1.AD組與對照組一般資料比較:AD組年齡、飲酒史、高血壓病史與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。而AD組既往吸煙史、糖尿病病史及MMSE評分均明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),詳見表1。

2.AD組與對照組血清學(xué)指標(biāo)比較:AD組血清HDL-C及甘油三酯水平與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。而血清IL-32、空腹血糖、LDL-C、總膽固醇水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，詳見表2。

3.血清IL-32水平與MMSE評分相關(guān)性分析：血清IL-32和MMSE評分的Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，血清IL-32水平與MMSE評分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.663，P<0.01)，詳見圖1。

圖1 血清IL-32水平與MMSE評分相關(guān)性分析散點圖

4.多因素Logistic回歸分析：將既往吸煙史、血清LDL-C、總膽固醇、IL-32、空腹血糖、既往糖尿病史、MMSE評分納入多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，僅LDL-C(X1)、血清IL-32(X2)、既往糖尿病病史(X3)、MMSE評分(X4)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且血清LDL-C、IL-32、既往糖尿病史、MMSE評分均為AD的危險因素，詳見表3。據(jù)此構(gòu)建Logistic回歸方程為Z=1/{1+e-[-14.949+1.259(X1)+0.141(X2)+1.379(X3)-0.086(X4)]},Hosmer-Lemeshow 檢驗P=0.771，顯示回歸模型擬合度好。

表3 AD的多因素Logistic回歸分析

5.血清IL-32水平的ROC曲線分析:為進一步評估血清IL-32對AD的診斷效能，對IL-32水平做ROC曲線分析，其曲線下面積為0.851，敏感度為88.5%，特異性為70.0%，詳見圖2。而聯(lián)合LDL-C、血清IL-32、既往糖尿病病史、MMSE評分構(gòu)建的ROC曲線下面積為0.906，敏感度為95.1%，特異性為72.5%，詳見圖3。

圖2 血清IL-32水平的ROC曲線

圖3 聯(lián)合分析的ROC曲線

討 論

AD的發(fā)病機制復(fù)雜，包括Aβ沉積、tau磷酸化、慢性炎癥、神經(jīng)營養(yǎng)障礙、氧化應(yīng)激等多個病理生理過程，多種因素共同作用導(dǎo)致AD的發(fā)生[7～11]。近年來，神經(jīng)炎癥與AD的關(guān)系成為該領(lǐng)域的研究熱點，而IL家族作為反應(yīng)神經(jīng)炎性病變的代表性成員，其在AD中的變化向來是臨床和科研工作中關(guān)注的重點。現(xiàn)有大量研究圍繞多種不同的白介素因子與AD的關(guān)聯(lián)開展，不僅在臨床層面對多種IL(如IL-1、IL-6、IL-17、IL-18和IL-12/23等)在AD診斷中的輔助價值進行了評估[12～14]。同時也從動物或細(xì)胞層面探討了IL-2、IL-3、IL-4、IL-10、IL-13和IL-33等多種IL在AD發(fā)病中的調(diào)控作用[15～19]。然而，IL家族與AD之間關(guān)聯(lián)的認(rèn)知遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。

近年來，IL-32在AD神經(jīng)炎性中的調(diào)控作用被逐漸發(fā)掘，既往IL-32相關(guān)研究多集中在慢性阻塞性肺疾病、結(jié)核分枝桿菌感染、病毒感染、惡性腫瘤以及一些自身免疫性疾病等領(lǐng)域[20～24]。而近年來動物研究則顯示，對IL-32β在轉(zhuǎn)基因小鼠中可激活轉(zhuǎn)錄因子3和核因子-κB，促進膠質(zhì)細(xì)胞激活、淀粉樣蛋白生成和神經(jīng)炎癥，導(dǎo)致小鼠記憶障礙加重[5]。Jung等[25]研究亦顯示，IL-32β過表達后在小鼠體內(nèi)檢測到1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)毒性顯著增加，并促進了小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活和炎性蛋白的表達。在動物學(xué)研究基礎(chǔ)上，本研究對IL-32在AD患者血清中的表達變化進行性觀察，結(jié)果顯示AD患者血清IL-32水平較對照組明顯升高，與動物層面研究一致，高度提示IL-32在AD中的促炎作用。進一步相關(guān)性分析顯示血清IL-32的水平與MMSE評分呈高度負(fù)相關(guān)，提示IL-32可用于AD患者病情嚴(yán)重程度的評估，具有良好的臨床價值。

徐姍姍等[26]研究發(fā)現(xiàn)，AD患者的空腹血糖、血清總膽固醇、C反應(yīng)蛋白、胰島素抵抗指數(shù)、同型半胱氨酸均高于對照組。Xin等[27]研究發(fā)現(xiàn)，AD患者空腹血糖、LDL-C、血清總膽固醇和收縮壓高于對照組，而HDL-C低于對照組。本研究在排除年齡和性別的干擾后，發(fā)現(xiàn)AD患者的既往吸煙史、糖尿病病史、MMSE評分、空腹血糖、低密度脂蛋白膽固醇、總膽固醇和血清IL-32水平與對照組有差異，與以往的研究結(jié)果一致，進一步證明AD發(fā)病機制的復(fù)雜性。而多因素Logistic回歸分析顯示，既往糖尿病病史、血清LDL-C水平、血清IL-32水平和MMSE評分比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，且IL-32可作為AD的獨立危險因素。IL-32的ROC曲線下面積為0.851，具有較高的敏感度和特異性，提示血清IL-32水平可用于AD的輔助診斷。此外，對Logistic回歸篩選出的生物學(xué)標(biāo)志物進行聯(lián)合分析，ROC曲線下面積為0.906，敏感度和特異性均優(yōu)于IL-32的單一評估，表明基于多個生物學(xué)標(biāo)志物(血清LDL-C水平、糖尿病病史、血清IL-32水平和MMSE評分)的Logistic模型可以提高AD的診斷效率。

綜上所述，本研究揭示了IL-32在AD患者血清中的顯著升高，可作為AD的輔助診斷指標(biāo)，且結(jié)合既往糖尿病病史、血清LDL-C水平、血清IL-32水平和MMSE評分分析更具優(yōu)勢。此外，筆者的研究是一個初步的臨床研究，缺乏血清IL-32動態(tài)觀察和長期縱向隨訪證據(jù)，聯(lián)合評估的Logistic診斷模型應(yīng)開展更大的隊列研究予以進一步驗證。