楊小艷，韓世明，郭雪艷，吳 梅，方玉梅，王月霞

（六盤水市師范學院生物科學與技術學院，貴州 六盤水 553004）

軟棗獼猴桃（Actinidia arguta）屬于獼猴桃科（Actirlidia‐ceae）獼猴桃屬（Actinidia）多年生藤本落葉植物，又名軟棗子，猴桃梨，藤瓜等。世界上獼猴桃屬植物有54 個種，21 個變種，我國就有52 個種。獼猴桃在中國分布廣泛，其中軟棗獼猴桃是獼猴桃屬中在中國分布最廣泛的野生果樹之一，主要分布在中國的華北、東北、西北及長江流域，尤其以東三省的黑龍江、吉林和遼寧等存量資源最為豐富。中國是世界上軟棗獼猴桃的主產區(qū)，世界上軟棗獼猴桃主要栽培品種有74個，有11 個分布在中國[1-2]。軟棗獼猴桃的枝條多攀爬在樹枝或者樹干上，葉柄呈紅色，葉為互生，葉片、葉柄和莖部都沒有毛，軟棗獼猴桃的花為白色，且花序較小，有淡淡的香氣，果實呈綠色或黃綠色，果實為漿果，果實的果皮光滑無斑點，果實柔軟多汁、味道鮮美可口，果實像蘋果，雖然果實很小但營養(yǎng)豐富，富含維生素C，具有較的高經濟價值、營養(yǎng)價值，良好的醫(yī)療保健效果[3]受到廣大人民群眾的青睞。

1 軟棗獼猴桃的應用領域及研究概況

軟棗獼猴桃的栽種主要分布在中國西北、長江流域、東北和華北等地區(qū)，在世界上軟棗獼猴桃的主要栽培中，軟棗獼猴桃的品種共有74 個，中國先后出現(xiàn)了“魅綠”“豐綠”[4-5]等。2015 年趙芮、趙春莉、安佰義等科學家研究發(fā)現(xiàn)軟棗獼猴桃芽增殖的最佳培養(yǎng)基為：MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA，軟棗獼猴桃果實成熟收獲后貯藏保鮮和生理生化方面的研究較多，加大軟棗獼猴桃種質資源系統(tǒng)評價，為軟棗獼猴桃種質資源系統(tǒng)評價體系得構成，改善軟棗獼猴桃栽培管理方面提供科學的依據(jù)。為軟棗獼猴桃育種提供優(yōu)質苗木和有抗性的砧木，可培育出高產、優(yōu)質的獼猴桃新品種[6-7]。軟棗獼猴有豐富的維生素、多糖類、黃酮類、酚類、萜類等多種活性物質，維生素C 含量豐富，軟棗獼猴桃中多糖對預防心血管疾病有特殊的治療效果，果實中的氨基酸不僅具降血脂和血糖的作用，還可提高人體免疫力[8-12]。還可加工成各類果干、零食。經過試驗研究得到軟棗獼猴桃飲料的最佳配方。謝宗萬的《全國中草藥匯編》中提到根有活血消腫，清熱解毒、祛風利濕等作用，陳藏器的《本草拾遺》果實可以解熱去煩、調中理氣、生津潤燥。因此被稱為藥用及食療價值均高于常規(guī)水果，還有“人間仙果”的美稱[10-14]。

本試驗采用六盤水市水城區(qū)米籮鎮(zhèn)的一年生的軟棗獼猴桃?guī)б秆壳o段作為試驗材料，以MS 培養(yǎng)基作為基礎培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中加入不同濃度的激素6-BA 和IBA 組合，通過植物組織培養(yǎng)可對其進行快速繁殖，在組培室里培養(yǎng)不受生長季節(jié)限制，能夠大批量繁育種苗，保證了所育苗木的純度，具有質量高、成本低、占地小等優(yōu)勢。在組織培養(yǎng)脫分化的過程中選擇軟棗獼猴桃病毒害少的部位進行脫分化，可以獲得無病毒植株，用于雜交育種，得到的軟棗獼猴桃植株產出的水果口感更佳，經濟價值更高。

2 材料與方法

采用一年生軟棗獼猴桃?guī)б秆康哪矍o段作為接種材料，早春季節(jié)從母株上采取側枝，在晴天的中午剪20～30 cm長的枝條，要剪生長強壯、無蟲害、無病菌的幼嫩枝條。

3 軟棗獼猴桃外植體的消毒

將軟棗獼猴桃外植體用水清洗凈，剪去葉子和老的莖段。用剪刀將外植體剪切為長度1.5～2.5 cm 的段，用洗潔精浸泡30 min，之后用細流水沖洗2 h。把無菌水、裝著濾紙的培養(yǎng)皿、接種工具、升汞、酒精燈、打火機、燒杯、培養(yǎng)基等放入超凈工作臺，殺菌30 min，殺菌時不開吹風，用75%酒精棉擦洗戴著無菌手套的雙手和盛有外植體的容器壁進行消毒，將容器放進超凈工作臺，用75%的乙醇浸泡30 s，然后用無菌水清洗4 次后，用0.15%的氯化汞溶液浸泡7 min。再用無菌水清洗6～7 次，最后用鑷子把接種的外植體放在放有無菌紙的培養(yǎng)皿中，用無菌紙把外植體上的水分吸干，消毒完成。將消毒的外植體每瓶接種2～4 個，接種完成之后編號、記錄等，長出芽后，用幼芽轉接。

4 培養(yǎng)基中不同濃度的激素組合對芽增殖的影響試驗

4.1 誘導芽增殖的組織培養(yǎng)基

試驗參考趙芮、趙春莉、安佰義等軟棗獼猴桃離體快速繁殖技術[6]和鄧踐[5]的試驗研究，并結合本實驗室研究的實際情況進行設置。誘導芽增殖的組織培養(yǎng)基見表1。

表1中所有的培養(yǎng)基pH 為5.8；所用的培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，MS 培養(yǎng)基加入的蔗糖的含量為30 g/L，R1 到R25 號培養(yǎng)基中加入瓊脂7.2 g/L。用蒸餾水配制，貼好標簽。配置好的培養(yǎng)基放在121℃下高壓蒸汽滅菌鍋內滅菌15 min，后移至超凈工作臺待殺菌冷卻，將消毒處理好的腋芽嫩莖切成大小為1.5～2.5 cm，分別轉接到上述培養(yǎng)基中，每種培養(yǎng)基5瓶，每瓶接種2～4個外植體。以MS基本培養(yǎng)基作為對照，接種完成后放入培養(yǎng)架培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為3 000 lx 光照強度，溫度25℃、光周期14 h/10 h（光照/黑暗），定期記錄數(shù)據(jù)，篩選出最佳培養(yǎng)基。

表1 誘導芽增殖的組織培養(yǎng)基Tab.1 The tissue culture medium for inducing bud proliferation

4.2 試驗數(shù)據(jù)處理及相關數(shù)據(jù)計算公式

5 結果

根據(jù)添加的6-BA 和IBA 的含量不同，對軟棗獼猴桃?guī)б秆磕矍o段組織培養(yǎng)誘導芽增殖的生長情況進行觀察并記錄數(shù)據(jù)，計算增殖系數(shù)，見表2。

根據(jù)表2 的數(shù)據(jù)可以看出R16、R18、R19、R20 號培養(yǎng)基的芽增殖系數(shù)高，且呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，其中R19 號培養(yǎng)基的芽長勢好，芽多，芽較高，葉片正常，芽增殖系數(shù)最高為3.95。結合表2 的數(shù)據(jù)分析篩選出最適合軟棗獼猴桃莖段芽增殖培養(yǎng)基為R19 號培養(yǎng)基，也是最適合的培養(yǎng)基配方。

表2 不同質量濃度的6-BA 和IBA 對叢生芽增殖的形成情況Tab.2 The effects of different mass concentrations of 6-BA and IBA on the formation of cluster bud proliferation

6 討論

應用傳統(tǒng)的繁殖培育技術培育軟棗獼猴桃，難以在短時間內培育出經濟效益高的植株，且受到溫度影響。此外，傳統(tǒng)的繁殖培育技術培育軟棗獼猴桃常會攜帶的一些病菌，會給獼猴桃產業(yè)帶來一些災害。采用外植體培養(yǎng)技術獲得的組培苗可以保持母本的優(yōu)良性狀，栽培出的水果口感更佳，經濟價值更高。

本實驗室采用組織培養(yǎng)技術，用不同濃度的誘導芽增殖培養(yǎng)基，均得到了預期的結果，采用組培技術得到的軟棗獼猴桃經濟價值更高。在組培室里培養(yǎng)不受生長季節(jié)限制，能大批量繁育種苗，保證了所育苗木的純度，具質量高、成本低、占地小等優(yōu)勢。本試驗的成果，可為軟棗獼猴桃種質資源系統(tǒng)評價體系的構成，改善軟棗獼猴桃栽培管理方面提供科學依據(jù)。