羅家敏，高 雯，李 萍*

指紋圖譜結(jié)合一測(cè)多評(píng)法的梔子質(zhì)量控制方法研究

羅家敏1, 2，高 雯2，李 萍1, 2*

1. 廣東藥科大學(xué)中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006 2. 中國(guó)藥科大學(xué) 天然藥物活性組分與藥效國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 210009

建立梔子的指紋圖譜，并同時(shí)建立其中6個(gè)主要成分含量的一測(cè)多評(píng)分析方法，以期對(duì)梔子藥材進(jìn)行整體質(zhì)量控制?；诟咝б合嗌V結(jié)合紫外變波長(zhǎng)分段檢測(cè)，在各類化合物的最大吸收波長(zhǎng)下，建立包含環(huán)烯醚萜苷類（240 nm）及二萜類（440 nm）成分信息的梔子指紋圖譜。在此基礎(chǔ)上，分別以梔子苷和西紅花苷I為內(nèi)標(biāo)，計(jì)算4個(gè)環(huán)烯醚萜苷類成分（山梔苷、山梔子苷B、京尼平龍膽雙糖苷和梔子苷）和2個(gè)二萜類成分（西紅花苷I和西紅花苷II）的校正因子，通過4臺(tái)高效液相色譜儀及4根不同色譜柱進(jìn)行耐用性考察，并與外標(biāo)法測(cè)定結(jié)果比較，驗(yàn)證一測(cè)多評(píng)方法的準(zhǔn)確性。19批梔子的指紋圖譜共標(biāo)定20個(gè)共有峰，相似度為0.981～0.999；在240 nm下，以梔子苷為內(nèi)標(biāo)，山梔苷、山梔苷B、京尼平龍膽雙糖苷和梔子苷的校正因子分別為1.15、1.36、1.54和1.00；440 nm下，以西紅花苷I為內(nèi)標(biāo)，西紅花苷II的相對(duì)校正因子為1.11，且耐用性較好。應(yīng)用一測(cè)多評(píng)法測(cè)定6個(gè)成分的含量，與外標(biāo)法測(cè)定結(jié)果比較，含量準(zhǔn)確度均值為100.14%，RSD＜3%，無明顯差異。19批梔子中6個(gè)待測(cè)成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)范圍分別為0.09%～0.35%、0.28%～0.82%、0.31%～1.00%、4.60%～7.78%、0.62%～1.64%和0.07%～0.26%。所建立的指紋圖譜結(jié)合一測(cè)多評(píng)法簡(jiǎn)便可行，可為梔子藥材整體質(zhì)量控制提供一定參考和依據(jù)。

梔子；指紋圖譜；一測(cè)多評(píng)法；相對(duì)校正因子；山梔苷；山梔子苷B；京尼平龍膽雙糖苷；梔子苷；西紅花苷I；西紅花苷II

中藥梔子系茜草科植物梔子Ellis的成熟果實(shí)[1]，是東亞三國(guó)廣泛應(yīng)用的傳統(tǒng)藥物。梔子的化學(xué)成分主要包括環(huán)烯醚萜苷類、二萜類、有機(jī)酸類及黃酮類4大類[2-5]。其中環(huán)烯醚萜苷類具有保肝利膽、抗炎、神經(jīng)保護(hù)等功效[6-8]；二萜類化合物具有顯著的調(diào)血脂和抗氧化活性[9-11]。

《中國(guó)藥典》2020年版對(duì)梔子藥材在含量?jī)H規(guī)定了梔子苷“不得少于1.8%”。目前針對(duì)梔子中的多種活性成分建立了（MSPD-）HPLC- PAD[12]、HPLC-DAD-MS[13]、UFLC-MS/ MS[14]等多種定量分析方法，然而這些方法由于受到儀器或?qū)φ掌酚昧康鹊南拗?，難以推廣至梔子藥材質(zhì)控的實(shí)際應(yīng)用中。一測(cè)多評(píng)法采用單一對(duì)照品同時(shí)測(cè)定多個(gè)成分的含量[15-16]，是實(shí)現(xiàn)中藥多成分質(zhì)控的一種經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便的分析方法。而中藥指紋圖譜是中藥整體質(zhì)量控制的核心技術(shù)之一，可以反映不同樣品質(zhì)量的均一性[17-18]。目前已有學(xué)者建立了梔子指紋圖譜、多成分含量測(cè)定或一測(cè)多評(píng)分析方法，并結(jié)合多變量數(shù)學(xué)模型等手段對(duì)不同產(chǎn)地梔子藥材進(jìn)行了質(zhì)量評(píng)價(jià)[19-24]。本實(shí)驗(yàn)基于紫外變波長(zhǎng)檢測(cè)手段，建立了色譜指紋圖譜結(jié)合一測(cè)多評(píng)的梔子質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，可兼顧不同類型組分的最佳響應(yīng)，在較全面表征梔子化學(xué)成分整體輪廓、評(píng)價(jià)梔子藥材整體質(zhì)量的基礎(chǔ)上，同時(shí)對(duì)其中的主要成分進(jìn)行定量控制?？紤]到兩類成分結(jié)構(gòu)類型差異較大，根據(jù)一測(cè)多評(píng)技術(shù)指南[25]，分別選擇梔子苷和西紅花苷I作為內(nèi)標(biāo)物建立環(huán)烯醚萜苷類和二萜類成分的校正因子，為梔子多指標(biāo)質(zhì)量控制推廣奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

HPLC色譜儀（1290型、1260型和1100型，美國(guó)Agilent公司；Shimadzu LC-20A型，日本Shimadzu公司）；Quintix系列分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；KH-500DB型超聲儀（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

乙腈，色譜純，德國(guó)Merck公司；甲醇，分析純，上海泰坦科技股份有限公司；磷酸，優(yōu)級(jí)純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；超純水來自Milli-Q系統(tǒng)。對(duì)照品梔子苷（批號(hào)110749-201718，質(zhì)量分?jǐn)?shù)97.1%）、西紅花苷I（批號(hào)111588-201704，質(zhì)量分?jǐn)?shù)88.4%）、西紅花苷II（批號(hào)111589-201705，質(zhì)量分?jǐn)?shù)92.2%）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；山梔苷（批號(hào)PS011214，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）、京尼平龍膽雙糖苷（批號(hào)PS011212，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）購(gòu)自成都普思生物科技股份有限公司；山梔子苷B（批號(hào)B21138-20MG，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司。19批梔子藥材（表1）購(gòu)自全國(guó)各地，經(jīng)中國(guó)藥科大學(xué)天然藥物活性組分與藥效國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室主任李萍教授鑒定為梔子Ellis的干燥成熟果實(shí)。

表1 19批梔子藥材產(chǎn)地信息

Table 1 Origin information of 19 batches of Gardeniae Fructus

編號(hào)產(chǎn)地/收購(gòu)地編號(hào)產(chǎn)地/收購(gòu)地 S1江西吉安S11湖南長(zhǎng)沙 S2江西萍鄉(xiāng)S12河南南陽 S3江西樟樹S13安徽亳州 S4江西新干S14廣西玉林 S5江西宜春S15浙江溫州 S6江西豐城S16陜西漢中 S7福建福鼎S17山西太原 S8福建福鼎S18四川廣元 S9廣西欽州S19四川瀘州 S10廣西欽州

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品和供試品溶液制備

2.1.1 對(duì)照品溶液制備 分別精密稱取山梔苷、山梔子苷B、京尼平龍膽雙糖苷、梔子苷、西紅花苷I和西紅花苷II對(duì)照品適量，加入50%甲醇制成含山梔苷122.32 μg/mL、山梔子苷B 300.66 μg/mL、京尼平龍膽雙糖苷323.40 μg/mL、梔子苷1830.40 μg/mL、西紅花苷I 348.48 μg/mL和西紅花苷II 49.44 μg/mL的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.1.2 供試品溶液制備 稱取梔子粉末（過四號(hào)篩）0.5 g，精密稱定，置于100 mL具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲提取40 min（500 W，40 kHz），放冷，用甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，13 000 r/min離心10 min，取上清，過0.22 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.2 色譜條件

色譜分析采用Waters XSelect HSS C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，柱溫設(shè)置為35 ℃；以0.1%磷酸水溶液（A）-乙腈（B）作為流動(dòng)相，保持1.0 mL/min進(jìn)行梯度洗脫，洗脫梯度：0～12 min，6%～9% B；12～30 min，9%～23% B；30～33 min，23%～30% B；33～37 min，30% B；37～40 min，30%～35% B；40～46 min，35%～50% B；46～48 min，50%～90% B；48～53 min，90% B；后運(yùn)行時(shí)間7 min，進(jìn)樣量5 μL。紫外檢測(cè)采用分段變波長(zhǎng)檢測(cè)，具體為0～32 min，240 nm；32～53 min，440 nm。

2.3 指紋圖譜的建立

2.3.1 精密度試驗(yàn) 稱取梔子粉末（S1），按“2.1.2”項(xiàng)方法制備供試品溶液，并按“2.2”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣6針，以8號(hào)峰為參照峰，計(jì)算其余共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD值，結(jié)果顯示20個(gè)共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和峰面積的RSD值均小于3.0%。

2.3.2 重復(fù)性試驗(yàn) 稱取梔子粉末（S1）適量，按上述方法平行制備供試品溶液6份，進(jìn)樣分析后以8號(hào)峰為參照，測(cè)得各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD值低于1.0%，相對(duì)峰面積RSD值低于3.0%，表明方法重復(fù)性好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液（S1），分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣分析，以8號(hào)峰為參照，測(cè)得各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD在0.01%～0.08%，相對(duì)峰面積RSD在0.13%～2.30%，表明該法24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.4 指紋圖譜建立及相似度評(píng)價(jià) 取19批梔子藥材按“2.1.2”項(xiàng)方法制備成供試品溶液，進(jìn)樣分析后將數(shù)據(jù)以AIA格式導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件”（2012版）。S1樣品設(shè)為參照?qǐng)D譜（中位數(shù)法、時(shí)間窗0.1），經(jīng)多點(diǎn)校正和自動(dòng)峰匹配后生成對(duì)照?qǐng)D譜（R），共標(biāo)定20個(gè)共有峰，見圖1。通過與對(duì)照品比對(duì)，指認(rèn)出6個(gè)共有峰（圖2），其中1號(hào)峰為山梔苷，3號(hào)峰為山梔子苷B，6號(hào)峰為京尼平龍膽雙糖苷，8號(hào)峰為梔子苷（參照峰S），13號(hào)峰為西紅花苷I，16號(hào)峰為西紅花苷II。對(duì)照指紋圖譜與各批次樣品圖譜進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，結(jié)果見表2，19個(gè)樣品相似度均大于0.980，說明不同產(chǎn)地梔子共有峰相似度很高，藥材質(zhì)量較均一。

圖1 19批梔子指紋圖譜和對(duì)照?qǐng)D譜(R)

1-山梔苷 3-山梔子苷B 6-京尼平龍膽雙糖苷 8-梔子苷 13-西紅花苷I 16-西紅花苷II

表2 19批梔子的相似度結(jié)果

Table 2 Similarities of 19 batches of samples

樣品相似度樣品相似度 S10.999S110.998 S20.981S120.998 S30.996S130.997 S40.998S140.986 S50.998S150.997 S60.997S160.983 S70.998S170.998 S80.991S180.995 S90.997S190.998 S100.998

2.4 多成分含量測(cè)定

2.4.1 線性關(guān)系 精密吸取混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，用50%甲醇依次稀釋得到8個(gè)濃度梯度的工作溶液。按“2.2”項(xiàng)每個(gè)濃度進(jìn)樣5 μL，重復(fù)進(jìn)樣3針，記錄6個(gè)待測(cè)物的峰面積，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中縱坐標(biāo)為峰面積（），橫坐標(biāo)為進(jìn)樣濃度（）。結(jié)果顯示（表3），6個(gè)成分在各自濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

2.4.2 檢測(cè)限與定量限 將對(duì)照品溶液進(jìn)一步稀釋后進(jìn)樣分析，以信噪比（/）分別為3和10時(shí)的濃度計(jì)為該化合物的檢測(cè)限（LOD）和定量限（LOQ），結(jié)果見表3。

2.4.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下某一濃度的混合對(duì)照品溶液，按“2.2”色譜條件于同一日內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣分析6次，記錄6個(gè)目標(biāo)化合物的峰面積，計(jì)算RSD值評(píng)價(jià)日內(nèi)精密度；連續(xù)3 d、每日進(jìn)樣分析3次，記錄各成分峰面積，計(jì)算RSD值作為日間精密度。結(jié)果顯示，日內(nèi)、日間精密度RSD值均低于1.50%。

表3 各成分線性、LOD和LOQ考察結(jié)果（n＝3）

Table 3 Results of linearity, LOD and LOQ for each component (n＝3)

成分線性回歸方程r線性范圍/(μg·mL?1)LOD/(μg·mL?1)LOQ/(μg·mL?1) 山梔苷Y＝6.225 2 X－1.778 80.999 90.61～110.090.0610.153 山梔子苷BY＝5.427 9 X－5.943 90.999 81.50～270.600.0750.250 京尼平龍膽雙糖苷Y＝4.652 3 X－0.510 60.999 81.62～291.060.0810.253 梔子苷Y＝7.316 4 X＋2.687 90.999 8 8.89～1 599.590.0440.139 西紅花苷IY＝31.943 0 X－19.231 00.999 8 0.77～277.250.0040.023 西紅花苷IIY＝29.060 0 X－3.774 70.999 70.23～41.030.0070.023

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次梔子粉末（S1）按“2.1.2”項(xiàng)平行制備6份供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)色譜條件分析，記錄各成分峰面積，計(jì)算6個(gè)待測(cè)成分的含量及RSD值。結(jié)果顯示，RSD值低于1.29%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按“2.1.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12、24 h進(jìn)樣，記錄6個(gè)待測(cè)物的峰面積并計(jì)算RSD值。結(jié)果表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.6 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的梔子藥材粉末（S1）9份，每份稱取0.25 g，精密稱定，6個(gè)化合物分別按50%、100%和150%的水平精密加入對(duì)照品，按“2.1.2”項(xiàng)制備后同法分析，記錄山梔苷、山梔子苷B、京尼平龍膽雙糖苷、梔子苷、西紅花苷I和西紅花苷II的峰面積，計(jì)算加樣回收率及RSD值，結(jié)果顯示，6個(gè)化合物的加樣回收率在94%～105%。

2.5 一測(cè)多評(píng)方法建立

2.5.1 相對(duì)校正因子的計(jì)算 8個(gè)濃度的工作溶液每份分析3次，記錄峰面積，按下列公式計(jì)算相對(duì)校正因子。其中4個(gè)環(huán)烯醚萜苷類以梔子苷為內(nèi)標(biāo)物，2個(gè)二萜類以西紅花苷I為內(nèi)標(biāo)物，分別計(jì)算相對(duì)校正因子（），結(jié)果見表4。

=(A/C)/(A/C)

A為內(nèi)標(biāo)峰面積，C為內(nèi)標(biāo)濃度；A為待測(cè)物峰面積，C為待測(cè)物濃度

2.5.2的耐用性考察 采用不同廠家、型號(hào)的液相色譜儀和不同品牌的色譜柱（規(guī)格均為250 mm×4.6 mm，5 μm）進(jìn)行校正因子耐用性考察。結(jié)果表明，校正因子RSD＜3%（表5），表明各成分的相對(duì)校正因子耐用性良好。

2.5.3 樣品含量測(cè)定 采用一測(cè)多評(píng)法和標(biāo)準(zhǔn)曲線外標(biāo)法對(duì)19批梔子藥材中的6個(gè)主要成分進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見表6。采用檢驗(yàn)對(duì)外標(biāo)法和一測(cè)多評(píng)法的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，＞0.05，表明2種方法測(cè)定的含量結(jié)果無明顯差異；進(jìn)一步以準(zhǔn)確度對(duì)4個(gè)環(huán)烯醚萜苷總含量和2個(gè)二萜類總量進(jìn)行準(zhǔn)確性評(píng)價(jià)。

表4 各成分對(duì)照品的相對(duì)校正因子

Table 4 Relative correction factor of each component reference

序號(hào)f山梔苷/梔子苷f山梔子苷B/梔子苷f京尼平龍膽雙糖苷/梔子苷f梔子苷/梔子苷f西紅花苷I/西紅花苷If西紅花苷I/西紅花苷II 11.121.411.561.001.001.16 21.121.311.521.001.001.10 31.151.461.551.001.001.11 41.161.371.541.001.001.11 51.151.311.541.001.001.11 61.201.371.531.001.001.10 71.141.321.531.001.001.10 81.141.301.531.001.001.10 平均值1.151.361.541.001.001.11 RSD/%2.174.090.880.000.001.79

表5 相對(duì)校正因子的耐用性考察

Table 5 Durability of relative correction factors

儀器色譜柱f山梔苷/梔子苷f山梔子苷B/梔子苷f京尼平龍膽雙糖苷/梔子苷f西紅花苷I/西紅花苷II Agilent 1290Waters XSelect HSS C181.151.361.541.11 Agilent Plus C181.191.391.531.11 Agilent SB C181.091.371.561.12 Thermo AQUASIL C181.181.371.571.13 Agilent 1260Waters XSelect HSS C181.161.351.561.12 Agilent Plus C181.101.301.511.12 Agilent SB C181.171.311.551.12 Agilent 1100Waters XSelect HSS C181.111.311.531.08 Agilent Extend C181.151.361.561.08 Agilent SB C181.171.341.501.08 Shimadzu LC-20AWaters XSelect HSS C181.171.381.561.11 Agilent Plus C181.161.381.571.11 Agilent SB C181.181.391.581.09 Thermo AQUASIL C181.151.381.571.12 平均值 1.151.361.551.11 RSD/% 2.682.251.551.56

準(zhǔn)確度=e/s

e為外標(biāo)法測(cè)定結(jié)果，s為一測(cè)多評(píng)法測(cè)定結(jié)果

計(jì)算得到2類成分準(zhǔn)確度在99.82%～100.50%，且RSD＜3%，說明所建立的一測(cè)多評(píng)法用于梔子藥材的多成分含量測(cè)定與外標(biāo)法測(cè)定結(jié)果較為一致。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)根據(jù)6個(gè)成分的總量進(jìn)行計(jì)算，比較了超聲和回流2種提取方式對(duì)提取結(jié)果的影響，結(jié)果表明兩種方法無顯著差異，且西紅花苷I長(zhǎng)時(shí)間高溫加熱回流會(huì)發(fā)生降解[26]，故選擇超聲提取。結(jié)合參考文獻(xiàn)[22-23]，優(yōu)化了提取溶劑、提取時(shí)間、料液比及提取次數(shù)，確定供試品溶液的制備條件為0.5 g樣品粉末加入50%甲醇50 mL超聲提取40 min，提取1次。

環(huán)烯醚萜苷類和二萜類成分是梔子的主要成分，也是其活性成分。通過對(duì)相關(guān)成分進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，發(fā)現(xiàn)這2大類成分紫外吸收光譜差異較大，最大吸收波長(zhǎng)分別在240 nm和440 nm附近。因此，梔子藥材在指紋圖譜和多成分含量測(cè)定時(shí)，需采用多個(gè)檢測(cè)波長(zhǎng)。本研究在建立色譜分析方法中，通過色譜條件的優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)梔子中主要的環(huán)烯醚萜苷類和二萜類成分峰時(shí)間沒有交集，因此采用分時(shí)段采集不同吸收波長(zhǎng)色譜圖的方法建立指紋圖譜，即色譜條件前32 min檢測(cè)波長(zhǎng)為240 nm，用于檢測(cè)環(huán)烯醚萜苷類成分；32 min后檢測(cè)波長(zhǎng)為440 nm，用于測(cè)定二萜類成分，在同一張圖譜上可得到兩類成分，所建立的梔子指紋圖譜共標(biāo)定20個(gè)共有峰，經(jīng)對(duì)照品確證了其中6個(gè)成分。根據(jù)一測(cè)多評(píng)法的指導(dǎo)原則，內(nèi)標(biāo)物應(yīng)選擇藥材中的有效成分或指標(biāo)成分，且應(yīng)與待測(cè)成分為同類成分或母核相同，光譜特性基本一致。因此分別以梔子苷和西紅花苷I作為內(nèi)標(biāo)，在各自最大吸收波長(zhǎng)下，對(duì)環(huán)烯醚萜苷類和二萜類成分進(jìn)行含量測(cè)定，既降低了實(shí)驗(yàn)中對(duì)照品、儀器的投入成本，同時(shí)保證了檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性。

表6 一測(cè)多評(píng)法和外標(biāo)法含量結(jié)果

Table 6 Content results of SSDMC and ESM

序號(hào)梔子苷/%山梔苷/%山梔苷B /%京尼平龍膽雙糖苷/%西紅花苷I/%西紅花苷II/% 外標(biāo)法外標(biāo)法一測(cè)多評(píng)法外標(biāo)法一測(cè)多評(píng)法外標(biāo)法一測(cè)多評(píng)法外標(biāo)法外標(biāo)法一測(cè)多評(píng)法 S15.020.250.240.710.700.600.590.850.140.14 S25.550.310.300.760.760.950.930.620.140.14 S37.750.150.140.500.500.530.511.520.260.26 S45.110.320.310.590.590.560.540.810.150.15 S55.340.330.320.700.690.690.671.020.180.18 S65.150.350.330.750.740.770.760.780.150.15 S75.470.360.350.790.791.021.000.950.160.16 S86.810.140.130.420.410.700.691.450.250.25 S97.780.160.150.500.490.670.651.280.190.19 S107.110.180.170.440.430.710.691.220.160.16 S115.020.340.330.760.760.740.720.820.180.18 S126.840.160.160.440.430.710.701.210.160.16 S137.540.160.160.400.390.590.571.420.190.19 S146.770.200.200.290.280.780.770.840.070.07 S157.340.140.130.470.460.730.711.380.230.23 S166.780.100.090.380.370.520.511.640.230.23 S175.170.350.340.820.820.700.690.840.180.18 S184.600.240.230.770.760.320.310.680.130.13 S195.320.260.250.660.650.450.440.940.160.16

本研究采用高效液相色譜結(jié)合紫外變波長(zhǎng)技術(shù)，建立了梔子的指紋圖譜結(jié)合一測(cè)多評(píng)的質(zhì)量控制方法，在一次分析中，可同時(shí)分析梔子中的環(huán)烯醚萜苷類和二萜類成分。19批梔子藥材中共標(biāo)定了20個(gè)共有峰，所有樣品的相似度均高于0.980，表明梔子藥材的整體質(zhì)量一致性較好，所建立的指紋圖譜方法可用于梔子藥材的整體質(zhì)量評(píng)價(jià)。通過對(duì)照品確認(rèn)了6個(gè)共有峰，并同時(shí)建立了一測(cè)多評(píng)的含量測(cè)定方法。以梔子苷為內(nèi)標(biāo)，山梔苷、山梔苷B、京尼平龍膽雙糖苷和梔子苷在240 nm下的校正因子分別為1.15、1.36、1.54和1.00；440 nm下，以西紅花苷I為內(nèi)標(biāo)，西紅花苷II的相對(duì)校正因子為1.11。以校正因子（一測(cè)多評(píng)法）和標(biāo)準(zhǔn)曲線（外標(biāo)法）計(jì)算得到的含量結(jié)果之間無明顯差異（準(zhǔn)確度在99.82%～100.50%），表明所建立的一測(cè)多評(píng)方法準(zhǔn)確，可用于梔子藥材的多成分含量測(cè)定。19個(gè)批次梔子藥材中山梔苷、山梔子苷B、京尼平龍膽雙糖苷、梔子苷、西紅花苷I和西紅花苷II的含量分別為0.09%～0.35%、0.28%～0.82%、0.31%～1.00%、4.60%～7.78%、0.62%～1.64%和0.07%～0.26%。所建立的指紋圖譜結(jié)合一測(cè)多評(píng)方法在減少對(duì)照品使用的情況下，可實(shí)現(xiàn)梔子藥材的多成分、多指標(biāo)質(zhì)量控制，在中藥整體質(zhì)量評(píng)價(jià)模式中具有良好的應(yīng)用前景。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Study on quality control method ofby fingerprint combined with single standard for determination of multiple components

LUO Jia-min1, 2, GAO Wen2, LI Ping1, 2

1. School of Traditional Chinese Pharmacy, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China 2. State Key Laboratory of Active Components and Pharmacodynamics of Natural Medicines, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China

To establish the fingerprint of Zhizi () and a single standard for determination of multiple components (SSDMC) method to determine the content of six main components simultaneously, in order to control the overall quality of.High performance liquid chromatography (HPLC) combined with ultraviolet (UV) variable wavelength detection was established. Under the maximum absorption wavelength of various compounds, the fingerprints ofwith the composition information of iridoid glycosides (240 nm) and diterpenoids (440 nm) were established. On this basis, with geniposide and crocin I as internal standards, calculating relative correction factors of four iridoid glycosides (shanzhiside, gardenoside B, genipin-1-β--gentiobioside and geniposide) and two diterpenoid components (crocin I and crocin II) to establish SSDMC method. Durability inspection through four high performance liquid chromatographs and four different chromatographic columns, and compared with the results of external standard method (ESM) to verify the accuracy of this method.A total of 20 common peaks were calibrated in fingerprints of 19 batches of, the similarities of each batch were 0.981—0.999. At 240 nm, with geniposide as the internal standard, the correction factors of shanzhiside, gardenoside B, genipin-1-β--gentiobioside and geniposide were 1.15, 1.36, 1.54 and 1.00, respectively; at 440 nm, with crocin I as the internal standard, the relative correction factor of crocin II was 1.11, with good durability. The determined results of six components using SSDMC method were compared with the results of the ESM, and the results showed that the mean value of the accuracy of the content was 100.14% with RSD＜3%, without significantly different. The content range of six components in 19 batches ofwere 0.09%—0.35%, 0.28%—0.82%, 0.31%—1.00%, 4.60%—7.78%, 0.62%—1.64% and 0.07%—0.26%, respectively.The established fingerprint combined with SSDMC method are simple and feasible, which can provide some reference and basis for the overall quality control of.

Ellis; fingerprint; SSDMC; relative correction factor; shanzhiside; gardenoside B; genipin-1-β--gentiobioside; geniposide; crocin I; crocin II

R286.2

A

0253 - 2670(2022)11 - 3480 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.11.026

2021-12-03

國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2018YFC1707900）

羅家敏（1995—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴庂|(zhì)量分析與評(píng)價(jià)。Tel: 17817181097 E-mail: luojiamin111@126.com

李 萍，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事中藥藥效物質(zhì)及作用機(jī)制研究。E-mail: liping2004@126.com

[責(zé)任編輯 時(shí)圣明]