王青虎，敖蘇日古嘎，包文林，何 祥，徐艷華

柳蒿脂溶性部位對高脂血癥大鼠脂質(zhì)代謝及肝臟的影響

王青虎，敖蘇日古嘎，包文林，何 祥，徐艷華

內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000

研究柳蒿脂溶性部位對高脂血癥大鼠脂質(zhì)代謝及肝臟的影響。采用高脂乳劑建立大鼠高脂血癥模型，給予辛伐他汀或柳蒿脂溶性部位進(jìn)行干預(yù)，觀察大鼠體質(zhì)量及肝臟外觀形態(tài)變化；采用全自動生化分析儀檢測大鼠血清中三酰甘油（triglyceride，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、總膽紅素（total bilirubin，TBIL）、直接膽紅素（direct bilirubin，DBIL）水平和堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）活性；采用蘇木素-伊紅（HE）染色法觀察各組大鼠肝組織病理變化；采用免疫組化法檢測各組大鼠肝組織單磷酸腺苷活化蛋白激酶α（adenosine monophosphate-activated protein kinase α，AMPKα）、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1（sterol regulatory element binding protein-1，SREBP-1）和血管細(xì)胞黏附分子1（vascular cell adhesion molecule 1，VCAM 1）蛋白表達(dá)。與模型組比較，給藥第30天，柳蒿脂溶性部位組大鼠體質(zhì)量顯著降低（＜0.05）；大鼠肝臟顏色暗紅，體積稍小，表面光滑，油膩感輕，肝小葉結(jié)構(gòu)完整，未見脂滴、脂肪樣變性、空泡樣變性，可見少量炎細(xì)胞浸潤；大鼠血清中TC、TG和LDL-C水平均明顯降低（＜0.01），HDL-C水平顯著升高（＜0.05）；大鼠肝組織SREBP-1和VCAM1蛋白表達(dá)水平顯著降低（＜0.05），AMPKα蛋白表達(dá)水平明顯升高（＜0.05）。柳蒿脂溶性部位對高脂血癥大鼠具有顯著的調(diào)血脂和保肝作用，其作用機(jī)制可能為通過調(diào)節(jié)AMPKα、SREBP1和VCAM1蛋白的表達(dá)，從而調(diào)控血脂中TC、TG、LDL-C和HDL-C水平，維持體內(nèi)脂質(zhì)代謝平衡，避免肝脂化。

柳蒿脂溶性部位；高脂血癥；血脂；肝功能；脂質(zhì)代謝

隨著人們生活水平的提高，生活習(xí)慣發(fā)生了巨大改變，高脂血癥已成為危害人類健康的罪魁禍?zhǔn)?，我國正常人群高脂血癥的發(fā)病率為20%～40%，并以每天萬人的速度遞增[1]。高脂血癥是指以血漿中一種或多種脂質(zhì)成分，主要指三酰甘油（triglyceride，TG）和總膽固醇（total cholesterol，TC）異常增高為特征的代謝紊亂綜合征[2]。目前，脂質(zhì)代謝異常被認(rèn)為是引起脂肪肝、糖尿病、冠心病、動脈粥樣硬化等疑難雜癥的首要危險因素[3-4]。目前臨床上高脂血癥的治療仍然以化學(xué)藥為主，雖然化學(xué)藥療效顯著，市場潛力良好，但往往存在一定的不良反應(yīng)[5]。因此，天然藥物預(yù)防和治療高脂血癥、提前防治動脈粥樣硬化、有效降低心腦血管疾病的發(fā)病率，逐漸成為研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)[6-8]。

蒙醫(yī)認(rèn)為高脂血癥屬于“通拉嘎未消病”范疇，是人體因飲食起居以及其他因素的影響，體內(nèi)“三根”（人體賴以進(jìn)行生命活動的3種能量和基本物質(zhì)——赫依、希拉、巴達(dá)干，稱為三根）失去正常平衡，使體內(nèi)新陳代謝紊亂致產(chǎn)生過多的惡血（病血）而形成的[9]。蒙醫(yī)治療此病以調(diào)理胃火及清除巴達(dá)干黏液為主，視病情選藥，辨證施治。長期以來，蒙醫(yī)藥專家與學(xué)者在“通拉嘎未消”病方面積累了豐富的治療方法和傳統(tǒng)用藥經(jīng)驗(yàn)，臨床療效顯著，并且不良反應(yīng)小。

柳蒿L(fēng)inn.系菊科多年生草本植物，蒙文名奧孫-協(xié)日樂吉，是內(nèi)蒙古呼倫貝爾地區(qū)達(dá)斡爾民族的特色菜肴“庫木勒”，營養(yǎng)豐富，被認(rèn)為是“清熱解酒”的綠色蔬菜。民間流傳柳蒿具有清除巴達(dá)干黏液、健脾去火、解毒消炎、破血行淤、下氣通絡(luò)、利尿等功效，對高脂血癥、高血壓、糖尿病、脂肪肝、肝硬化等均有特殊的療效和防治作用[10]。經(jīng)查閱近年相關(guān)國內(nèi)外文獻(xiàn)可知，人們對柳蒿的使用僅僅停留在民間流傳中，國內(nèi)外專家和學(xué)者對其高脂血癥的治療作用未見報道。本課題組前期考察了柳蒿不同溶劑提取物對高脂血癥模型大鼠的調(diào)血脂作用，發(fā)現(xiàn)其石油醚和二氯甲烷等親脂性溶劑提取物的調(diào)血脂作用明顯高于醋酸乙酯和正丁醇等親水性溶劑提取物。從其石油醚和二氯甲烷提取物中主要分離得到化合物有脂肪酸類、炔烴類、苯丙素類及萜類等[11-13]。這些化合物具有多種生物活性，如蘭香油奧具有調(diào)血脂[14]、抗炎、抗過敏和抗?jié)兊淖饔肹15]；丁香酚具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗過敏、解熱、抑制血小板凝聚等作用[16]；α-亞麻酸能夠降低血清TC、TG、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、極低密度脂蛋白水平，升高血清高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）水平[17-18]。本研究以柳蒿脂溶性部位為切入點(diǎn)，采用高脂乳劑建立大鼠高脂血癥模型，檢測大鼠血脂水平、肝臟功能及脂質(zhì)代謝相關(guān)蛋白表達(dá)，初步探討柳蒿脂溶性部位對高脂血癥大鼠脂質(zhì)代謝及肝臟的影響。

1 材料

1.1 動物

SPF級雄性SD大鼠50只，體質(zhì)量（200±20）g，7周齡，購自遼寧長生實(shí)驗(yàn)動物中心，動物合格證號SCXK（遼寧）2017-0001。動物飼養(yǎng)于內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院動物室，室溫24 ℃，濕度40%，自由進(jìn)食飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。動物實(shí)驗(yàn)經(jīng)內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院國家藥物臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)倫理委員會批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號NM-LL-2018-05-22-01）。

1.2 藥材

柳蒿的嫩芽采集于內(nèi)蒙古呼倫貝爾，經(jīng)內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院蒙藥教研室布和巴特爾教授鑒定為菊科多年生草本植物柳蒿L(fēng)inn.的嫩芽。柳蒿芽標(biāo)本（No.20170627）保存于內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院蒙藥化學(xué)教研室。

1.3 藥品與試劑

TC試劑盒（批號27630201）、TG試劑盒（批號27979801）、HDL-C試劑盒（批號24236201）、LDL-C試劑盒（批號23441801）、總膽紅素（total bilirubin，TBIL）試劑盒（批號33628901）、直接膽紅素（direct bilirubin，DBIL）試劑盒（批號32409501）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）試劑盒（批號3549601）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）試劑盒（批號34940601）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）試劑盒（批號34856601）購自上海羅氏診斷產(chǎn)品有限公司；辛伐他汀片（批號H20083840）由上海信誼萬象藥業(yè)股份有限公司提供；蘇木素-伊紅（HE）染色液（批號20190104）購自南京建成科技有限公司；中性樹膠（批號20190106）購自上海慈洋儀器有限公司；10%中性福爾馬林固定液購自合肥博美生物；組織包埋盒（批號19029）、黏附載玻片（批號188105）、顯微鏡蓋玻片（批號132012）購自江蘇世泰實(shí)驗(yàn)器材有限公司；單磷酸腺苷活化蛋白激酶α（adenosine monophosphate-activated protein kinase α，AMPKα）抗體（批號WL02254）、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1（sterol regulatory element binding protein-1，SREBP-1）抗體（批號WL02093）、血管細(xì)胞黏附分子1（vascular cell adhesion molecule 1，VCAM1）抗體（批號WL02474）購自沈陽萬類生物科技有限公司；HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG抗體（批號31460）購自美國Thermo Fisher Scientific公司；山羊血清（批號SL038）、DAB顯色液（批號DA1010）購自北京索萊寶科技有限公司。

1.4 儀器

Cobas c311型全自動生化分析儀（上海羅氏診斷產(chǎn)品有限公司）；HITACHI型低溫離心機(jī)（日本國茨城縣常陸那珂市）；SOPTOP型電子天平（舜宇恒平儀器有限公司）；BG10-3A型高速冷凍離心機(jī)（北京時代北利離心機(jī)有限公司）；BD/BC-518C型超低溫冰箱（浙江星星冷鏈集成有限公司）；EG1150H型包埋機(jī)、RM2235型切片機(jī)、DM2500型光學(xué)顯微鏡（德國Leica公司）；SFG-02B型烘箱（湖北恒豐醫(yī)療器械）；BX51型數(shù)碼照相顯微鏡（日本Olympus公司）。

2 方法

2.1 柳蒿脂溶性部位的制備

稱取柳蒿芽20 kg，用二氯甲烷回流提取，提取液回收二氯甲烷，得到二氯甲烷提取物。二氯甲烷提取物上硅膠色譜柱，先用石油醚洗脫，然后用石油醚-醋酸乙酯（20∶1）洗脫。石油醚-醋酸乙酯（20∶1）洗脫液減壓回收溶劑，即得柳蒿芽親脂性部位（得率為24%）。為了考察柳蒿芽脂溶性部位化學(xué)信息及主成分的相對含量，本課題組前期研究中首先利用各種色譜技術(shù)對其進(jìn)行分離，并經(jīng)分離得到化合物的核磁共振數(shù)據(jù)分析，確定其結(jié)構(gòu)式；然后采用氣相色譜法對其主成分進(jìn)行含量測定[11-13,19]。

2.2 高脂乳劑配制方法[20-21]

高脂乳劑配方成分為15%豬油、5%膽固醇、12.5%聚山梨酯80、10%丙二醇、1%脫氧膽酸鈉和0.5%丙基硫氧嘧啶。將豬油30 g，放在200 mL燒杯中，磁力攪拌器上加熱，40 ℃水浴中加熱溶化，加入10 g膽固醇攪拌溶解，再加丙基硫氧嘧啶1 g，充分?jǐn)嚢?，加入適量水和聚山梨酯80，不斷攪拌至乳化現(xiàn)象產(chǎn)生。同時，在另一燒杯中加入30 mL蒸餾水和丙二醇20 mL，加熱至60 ℃，然后加入膽鹽2 g，充分?jǐn)嚢柚钡酵耆芙猓缓缶徛铀苤?00 mL。合并2個燒杯溶液至200 mL，即可得到穩(wěn)定的脂肪乳劑。

2.3 高脂血癥大鼠模型建立及給藥

75只SD大鼠隨機(jī)分為對照組、模型組、辛伐他?。? mg/kg）組和柳蒿脂溶性部位低、高劑量（90、180 mg/kg）組，每組15只。模型組和各給藥組ig高脂乳劑（15 mL/kg）建立高脂血癥模型[22]，對照組ig等體積蒸餾水，1次/d，連續(xù)10 d。第11天禁食不禁水12 h進(jìn)行尾靜脈采血，3500 r/min離心10 min，取血清檢測血脂四項(xiàng)指標(biāo)，評估造模效果。以TC、TG和LDL-C水平均顯著升高，HDL-C水平顯著降低作為造模成功依據(jù)。

去除造模未成功大鼠，每組各留下10只。每天上午各給藥組ig以玉米油助溶的相應(yīng)藥物，對照組和模型組ig等體積玉米油；同時每天下午照造模方法模型組和各給藥組ig高脂乳劑（15 mL/kg），連續(xù)30 d。大鼠禁食不禁水12 h，ip 10%水合氯醛（3 mL/kg）麻醉，腹主動脈采血5 mL，3500 r/min離心10 min，取血清保存于?20 ℃冰箱中，用于血脂四項(xiàng)和肝功能五項(xiàng)指標(biāo)的檢測。取肝組織用10%中性甲醛固定，用于制作石蠟切片、HE染色及免疫組化實(shí)驗(yàn)。

2.4 觀察大鼠體質(zhì)量變化

實(shí)驗(yàn)期間每10天稱定大鼠體質(zhì)量1次，以調(diào)整ig劑量，并觀察柳蒿脂溶性部位對大鼠體質(zhì)量變化的影響，并進(jìn)行組間統(tǒng)計學(xué)分析。

2.5 觀察大鼠肝臟外觀形態(tài)

給藥結(jié)束后，各組大鼠麻醉后暴露肝臟，拍照并觀察大鼠肝臟外觀顏色、脂肪附著、質(zhì)地等情況。

2.6 血清中血脂四項(xiàng)及肝功能五項(xiàng)指標(biāo)檢測

采用全自動生化分析儀檢測大鼠血清中血脂四項(xiàng)（TC、TG、LDL-C、HDL-C）及肝功能五項(xiàng)（ALT、AST、ALP、DBIL、TBIL），其中TG、ALP和AST檢測用比色法，TC、HDL-C和LDL-C檢測用酶比色法，TBIL和DBIL檢測用重氮法，ALT檢測用IFCC法檢測。

2.7 大鼠肝組織HE染色觀察

取各組大鼠肝組織，石蠟包埋，制作切片（5 μm），經(jīng)HE染色，于顯微鏡下觀察并拍照。

2.8 免疫組化法檢測肝臟組織中AMPKα、SREBP-1和VCAM1蛋白表達(dá)

各組大鼠肝組織切片按文獻(xiàn)方法[21]脫蠟至水，抗原修復(fù)及切片染色，于顯微鏡下觀察并拍照，分析脂代謝相關(guān)蛋白陽性表達(dá)區(qū)域。采用Image-Pro Plus 6.0圖像分析系統(tǒng)測定所采集全部圖像的陽性表達(dá)區(qū)域吸光度（）和面積，計算平均值，進(jìn)行組間比較分析。

2.9 統(tǒng)計分析

3 結(jié)果

3.1 柳蒿脂溶性部位的制備

從20 kg柳蒿芽中制備得到柳蒿芽親脂性部位4.8 kg，其得率為24%。柳蒿芽親脂性部位化學(xué)信息分離鑒定結(jié)果[11-13]可知，其含有棕櫚酸、油酸、亞油酸、亞麻酸、12,13-環(huán)氧-亞麻酸、chamazulene、acetylene()-2、acetylene()-3、acetylene()-4、丁香酚、integracid、(＋)-(）-dihydro-ar-curcumene、(＋)-()-ar-curcumene、(＋)-()-dihydro-ar-turmerone、(＋)-()-ar-turmerone。這些化合物中除5個脂肪酸類外，還有3個炔類、2個簡單苯丙素和5個倍半萜類化合物，相對分子質(zhì)量小，均具有揮發(fā)性。在此基礎(chǔ)上，經(jīng)本課題組對柳蒿芽脂溶性部位的氣相色譜分析得知，其主含成分(＋)-()-dihydro-ar-curcumene、(＋)-()-ar-curcumene、(＋)-()-dihydro-ar-turmerone、(＋)-()-ar-turmerone、丁香酚、棕櫚酸、亞油酸、亞麻酸、12,13-環(huán)氧亞麻酸、油酸和chamazulene在不同批次樣品中平均質(zhì)量濃度分別為1.021、0.838、0.456、0.732、0.703、0.407、0.296、0.672、0.278、0.266、0.377 mg/mL[19]。

3.2 柳蒿脂溶性部位對高脂血癥大鼠體質(zhì)量的影響

如表1所示，實(shí)驗(yàn)期間，與對照組比較，模型組大鼠體質(zhì)量均顯著升高（＜0.05）；給藥第30天，與模型組比較，柳蒿脂溶性部位高劑量組大鼠體質(zhì)量顯著降低（＜0.05）。

3.3 柳蒿脂溶性部位對高脂血癥大鼠肝臟外觀的影響

如圖1所示，對照組大鼠肝臟顏色鮮紅，表面光滑，無結(jié)節(jié)，無脂肪附著，邊緣銳利，質(zhì)地柔韌，各肝葉間無黏連；模型組大鼠肝臟顏色略呈土黃色，表面粗糙而油膩，且質(zhì)地變脆。與模型組比較，辛伐他汀組大鼠肝臟顏色暗紅，體積稍小，表面光滑，油膩感輕，質(zhì)地柔韌；柳蒿脂溶性部位組大鼠肝臟顏色暗紅，體積稍小，表面光滑，油膩感輕，接近對照組肝臟。

表1 柳蒿脂溶性部位對高脂血癥大鼠體質(zhì)量的影響(, n = 10)

Table 1 Effect of liposoluble parts from A. integrifolion body weight of hyperlipidemia rats (, n = 10)

組別劑量/(mg·kg?1)體質(zhì)量/g 第0天第10天第20天第30天 對照—224.41±12.18248.03±12.23269.07±14.72288.33±16.17 模型—249.22±13.78#267.23±20.03#284.31±29.43#324.26±18.94# 辛伐他汀4252.16±11.54261.04±29.18277.41±31.09295.18±34.51 柳蒿脂溶性部位90251.89±13.02265.83±30.24280.38±35.17300.41±31.27 180254.93±14.22262.77±33.60273.02±36.29289.93±33.82*

與對照組比較：#＜0.05##＜0.01；與模型組比較：*＜0.05**＜0.01，下表同

#< 0.05##< 0.01control group;*< 0.05**< 0.01model group, same as below tables

圖1 柳蒿脂溶性部位對高脂血癥大鼠肝臟外觀的影響

3.4 柳蒿脂溶性部位對高脂血癥大鼠血清中TC、TG、LDL-C和HDL-C水平的影響

如表2所示，與對照組比較，模型組大鼠血清中TC、TG和LDL-C水平均明顯升高（＜0.05、0.01），HDL-C水平顯著降低（＜0.05）。與模型組比較，各給藥組大鼠血清中TC和LDL-C水平均明顯降低（＜0.01）；柳蒿脂溶性部位低、高劑量組大鼠血清中TG水平明顯降低（＜0.01），HDL-C水平顯著升高（＜0.05）。與辛伐他汀組比較，柳蒿脂溶性部位低、高劑量組大鼠血清中TG水平明顯降低（＜0.05）。

表2 柳蒿脂溶性部位對高脂血癥大鼠血清中TC、TG、LDL-C和HDL-C水平的影響(, n = 10)

Table 2 Effect of liposoluble parts from A. integrifolion TC, TG, LDL-C and HDL-C levels in serum of hyperlipidemia rats (, n = 10)

組別劑量/(mg·kg?1)TC/(mmol·L?1)TG/(mmol·L?1)LDL-C/(mmol·L?1)HDL-C/(mmol·L?1) 對照—1.44±0.180.30±0.060.32±0.062.09±0.21 模型—2.47±0.19##0.34±0.07#0.91±0.06##1.64±0.13# 辛伐他汀41.80±0.13**0.30±0.080.46±0.01**1.68±0.19 柳蒿脂溶性部位901.90±0.20**0.21±0.07**△0.48±0.11**1.86±0.21* 1801.88±0.12**0.22±0.06**△0.46±0.07**1.83±0.17*

與辛伐他汀組比較：△＜0.05△△＜0.01，表3同

△< 0.05△△< 0.01simvastatin group, same as Table 3

3.5 柳蒿脂溶性部位對高脂血癥大鼠血清中ALT、AST、ALP活性及DBIL、TBIL水平的影響

如表3所示，與對照組比較，模型組大鼠血清中ALT、AST、ALP活性及DBIL、TBIL水平均明顯升高（＜0.05、0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠血清中ALT、ALP活性均明顯降低（＜0.05、0.01），柳蒿脂溶性部位高劑量組大鼠血清中AST活性明顯降低（＜0.01），辛伐他汀組和柳蒿脂溶性部位高劑量組大鼠血清中TBIL水平明顯降低（＜0.05）。與辛伐他汀組比較，柳蒿脂溶性部位低、高劑量組大鼠血清中ALP活性明顯降低（＜0.05），柳蒿脂溶性部位高劑量組大鼠血清中AST活性明顯降低（＜0.01）。

3.6 柳蒿脂溶性部位對高脂血癥大鼠肝組織病理變化的影響

如圖2所示，對照組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)完整，呈不規(guī)則形，核圓形藍(lán)色位于細(xì)胞中央，胞質(zhì)紅色，肝細(xì)胞成條索狀排列形成肝板，未見脂滴、脂肪樣變性、氣球樣變性等。模型組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)不完整，呈不規(guī)則形，細(xì)胞內(nèi)可見大量脂滴，明顯脂肪樣變性、肝組織內(nèi)可見空泡狀，氣球樣改變。個給藥組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)完整，未見脂滴、脂肪樣變性、空泡樣變性等，可見少量炎細(xì)胞浸潤。

表3 柳蒿脂溶性部位對高脂血癥大鼠血清中ALT、AST、ALP活性及DBIL、TBIL水平的影響(, n = 10)

Table 3 Effect of liposoluble parts from A. integrifolion ALT, AST, ALP activities and DBIL, TBIL levels in serum of hyperlipidemia rats (, n = 10)

組別劑量/(mg·kg?1)ALT/(U·L?1)AST/(U·L?1)ALP/(U·L?1)DBIL/(μmol·L?1)TBIL/(μmol·L?1) 對照—45.98±6.5477.68±4.86164.00±16.241.03±0.190.88±0.29 模型—59.18±6.34##114.20±9.10##247.50±19.10#1.48±0.23#1.70±0.12## 辛伐他汀440.95±8.46**108.68±5.78179.29±13.62*1.25±0.191.25±0.27* 柳蒿脂溶性部位9047.92±5.07*107.98±8.23153.80±11.12*△1.40±0.181.58±0.16 18044.08±5.55**78.12±7.27**△△150.83±11.55**△1.33±0.331.05±0.26*

圖2 柳蒿脂溶性部位對高脂血癥大鼠肝組織病理變化的影響(HE, ×200)

3.7 柳蒿脂溶性部位對高脂血癥大鼠肝組織AMPKα、SREBP-1和VCAM1蛋白表達(dá)的影響

如圖3和表4所示，與對照組比較，模型組大鼠肝組織AMPKα蛋白表達(dá)水平明顯降低（＜0.05），SREBP-1和VCAM1蛋白表達(dá)水平均顯著升高（＜0.05、0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠肝組織SREBP-1蛋白表達(dá)水平均顯著降低（＜0.05、0.01）；辛伐他汀組和柳蒿脂溶性部位高劑量組大鼠肝組織AMPKα蛋白表達(dá)水平均明顯升高（＜0.05），VCAM1蛋白表達(dá)水平顯著降低（＜0.05）。

圖3柳蒿脂溶性部位對高脂血癥大鼠肝組織AMPKα、SREBP-1和VCAM1蛋白表達(dá)的影響 (×400)

表4 柳蒿脂溶性部位對高脂血癥大鼠肝組織AMPKα、SREBP-1和VCAM1蛋白表達(dá)的影響(, n = 10)

Table 4 Effect of liposoluble parts from A. integrifolion AMPKα, SREBP-1 and VCAM1 protein expressions in liver tissue of hyperlipidemia rat (, n = 10)

組別劑量/(mg·kg?1)平均A值 AMPKαSREBP-1VCAM1 對照—0.156±0.0210.023±0.0060.052±0.010 模型—0.133±0.025#0.038±0.010##0.063±0.012# 辛伐他汀40.159±0.018*0.022±0.005**0.044±0.018* 柳蒿脂溶性部位900.136±0.0160.028±0.011*0.059±0.008 1800.154±0.016*0.029±0.009*0.050±0.010*

4 討論

血脂異常防治中關(guān)于飲食療法的內(nèi)容包括飲食控制、減輕體質(zhì)量、增加體力勞動。此方案旨在改變飲食習(xí)慣、調(diào)整膳食結(jié)構(gòu)，以趨于達(dá)到合理健康的長期控制飲食，并能得到顯著療效。因此本研究在治療過程中仍然持續(xù)ig高脂乳劑，避免調(diào)整膳食結(jié)構(gòu)后血脂異常自然恢復(fù)后對實(shí)驗(yàn)造成干擾，盡量減少科研誤差率的發(fā)生。

大量攝入高脂飲食是誘發(fā)高脂血癥的重要因素，為此，本研究參照高脂乳劑ig法[22]建立高脂血癥大鼠模型。造模10 d，從血清中血脂四項(xiàng)指標(biāo)檢測結(jié)果表明，該模型能夠在短期內(nèi)形成，導(dǎo)致大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平升高，而HDL-C水平降低。柳蒿脂溶性部位干預(yù)能顯著降低血清中TC、TG和LDL-C水平，升高HDL-C水平，其高劑量組對TG的降低較辛伐他汀組顯著。

隨著實(shí)驗(yàn)進(jìn)行，對照組大鼠體質(zhì)量呈現(xiàn)穩(wěn)步增長趨勢，模型組大鼠體質(zhì)量也穩(wěn)步增長，且體質(zhì)量高于對照組。柳蒿芽脂溶性部位組大鼠體質(zhì)量增長較平穩(wěn)，治療10 d內(nèi)體質(zhì)量高于對照組，而治療20、30 d時，與對照組比較大鼠體質(zhì)量無顯著差異。從肝臟外觀分析，模型組肝臟顏色略呈土黃色，表面粗糙而油膩，可見明顯脂代謝異常。而辛伐他汀組和柳蒿芽脂溶性部位組大鼠肝臟顏色暗紅，表面光滑，油膩感輕，這說明柳蒿脂溶性部位具有一定的促進(jìn)肝臟脂肪代謝作用。肝組織病理學(xué)結(jié)果表明，柳蒿脂溶性部位能夠調(diào)節(jié)血脂代謝異常，保護(hù)肝臟，避免肝細(xì)胞脂滴形成，延緩肝臟脂質(zhì)化。

臨床常用ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL五項(xiàng)指標(biāo)來評價肝臟的各種功能受損情況[23]。肝細(xì)胞受損時以上指標(biāo)升高，其升高的程度與肝細(xì)胞受損的程度呈正相關(guān)[24]。肝功能五項(xiàng)指標(biāo)檢測結(jié)果顯示，該模型導(dǎo)致肝功能五項(xiàng)均升高，經(jīng)柳蒿脂溶性部位干預(yù)后，ALT、AST、ALP活性和TBIL、DBIL水平顯著降低，其中高劑量組對AST、ALP和TBIL的降低作用顯著優(yōu)于辛伐他汀，表明柳蒿脂溶性部位對血脂異常引起的肝損傷具有一定保護(hù)作用。

AMPK在調(diào)節(jié)機(jī)體能量代謝的平衡方面起總開關(guān)作用，近期成為肥胖治療的新靶點(diǎn)。研究顯示，肥胖會導(dǎo)致肝組織中AMPKα含量和活性降低[25-26]。SREBP-1也是TG代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵基因，SREBP-1的過度表達(dá)會引起脂代謝素亂。肖璐[27]研究發(fā)現(xiàn)化濕祛濁方能通過抑制高脂血癥大鼠基因表達(dá)，使TG的合成減少。VCAM1是一種重要的黏附分子，正常狀態(tài)下呈低表達(dá)或不表達(dá)，在高脂血癥中表達(dá)增多。研究表明，血脂異常是動脈粥樣斑塊形成的危險因素，而且常伴隨著VCAM-1水平的上升[28]。VCAM-1的表達(dá)增多與TC、LDL-C水平呈正相關(guān)。

本研究中柳蒿芽脂溶性部位高劑量組大鼠肝組織SREBP-1、VCAM1蛋白表達(dá)水平較模型組顯著低，而AMPKα蛋白表達(dá)水平顯著升高。同時，柳蒿芽脂溶性部位組大鼠血清中TG、TC、LDL-C水平也較模型組顯著降低，表明柳蒿芽脂溶性部位可能通過下調(diào)SREBP-1、VCAM1蛋白表達(dá)水平并上調(diào)AMPKα蛋白表達(dá)水平，從而抑制TG、TC、LDL-C水平。這一結(jié)果與辛伐他汀能對內(nèi)源性膽固醇合成進(jìn)行有效抑制，并對血脂進(jìn)行有效調(diào)節(jié)的作用特點(diǎn)基本一致[29-30]。

綜述，柳蒿脂溶性部位對實(shí)驗(yàn)性高脂血癥具有顯著的調(diào)血脂作用和保肝作用，其作用機(jī)制可能為通過調(diào)節(jié)AMPKα、SREBP-1和VCAM1蛋白的表達(dá)，從而調(diào)控血脂中TC、TG和LDL-C水平，維持體內(nèi)脂質(zhì)代謝平衡，避免肝脂化。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 哈斯高娃. 蒙醫(yī)放血療法與高脂血癥 [J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥, 2013, 9(11): 16-17.

[2] Gao H L, Long Y Z, Jiang X Q,. Beneficial effects of Yerba Mate tea () on hyperlipidemia in high-fat-fed hamsters [J]., 2013, 48(6): 572-578.

[3] 宋捷, 鐘榮玲, 夏智, 等. 中藥肝毒性研究方法技術(shù)的新進(jìn)展及其應(yīng)用 [J]. 中國中藥雜志, 2017, 42(1): 41-48.

[4] Jain K S, Kathiravan M K, Somani R S,. The biology and chemistry of hyperlipidemia [J]., 2007, 15(14): 4674-4699.

[5] Li W H, Wang D X, Song G H,. The effect of combination therapy of allicin and fenofibrate on high fat diet-induced vascular endothelium dysfunction and liver damage in rats [J]., 2010, 9: 131.

[6] Félétou M, Cohen R A, Vanhoutte P M,. TP receptors and oxidative stress hand in hand from endothelial dysfunction to atherosclerosis [J]., 2010, 60: 85-106.

[7] Ghule B V, Ghante M H, Saoji A N,. Antihyperlipidemic effect of the methanolic extract fromStand. fruit in hyperlipidemic rats [J]., 2009, 124(2): 333-337.

[8] Kwak Y S, Kyung J S, Kim J S,. Anti-hyperlipidemic effects of red ginseng acidic polysaccharide from Korean red ginseng [J]., 2010, 33(3): 468-472.

[9] 好必斯嘎拉圖. 試論高脂血癥的預(yù)防與治療 [J]. 中國蒙醫(yī)藥, 2010, 3(10): 25-26.

[10] 托婭, 金曉紅. 達(dá)斡爾人喜食: 柳蒿芽 [J]. 中國民間療法, 2007, 15(8): 10.

[11] 王青虎, 額爾敦布拉嘎, 徐艷華, 等. 柳蒿芽化學(xué)成分研究 [J]. 中國藥學(xué)雜志, 2018, 53(20): 1726-1728.

[12] 照日格圖, 吳雙榮, 那仁朝格圖, 等. 柳蒿芽石油醚提取物中脂肪酸類化合物的分離鑒定 [J]. 內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報: 自然科學(xué)版, 2016, 31(4): 331-332.

[13] Wang Q H, Hao J S, Xu Y H,. Structure elucidation of A new iridoid from[J]., 2018, 12(6): 544-548.

[14] Rekka E, Chrysselis M, Siskou I,. Synthesis of new azulene derivatives and study of their effect on lipid peroxidation and lipoxygenase activity [J]., 2002, 50(7): 904-907.

[15] Yanagisawa T, Kosakai K, Tomiyama T,. Studies on anti-ulcer agents. II. Synthesis and anti-ulcer activities of 6-isopropylazulene-1-sodium sulfonate derivatives [J]., 1990, 38(12): 3355-3358.

[16] 邱電, 張魁華, 方炳虎. 丁香酚的藥理作用 [J]. 動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2007, 28(8): 101-103.

[17] 劉志皋. 食品營養(yǎng)學(xué) [M]. 第2版. 北京: 中國輕工業(yè)出版社, 2004: 102-109.

[18] 鐘耀廣. 功能性食品 [M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2004: 173-178.

[19] 王青虎, 張國軍, 何祥, 等. 氣相色譜法同時測定柳蒿芽脂溶性部位中11個有效成分 [J]. 中國藥學(xué)雜志, 2021, 56(5): 346-350.

[20] 朱竟赫, 趙金明, 秦文艷, 等. 高脂血癥實(shí)驗(yàn)動物模型研究概述 [J]. 實(shí)驗(yàn)動物科學(xué), 2012, 29(2): 48-52.

[21] 孫赫, 李文雄. 高脂血癥大鼠模型幾種造模方法的比較 [J]. 動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2014, 35(3): 78-82.

[22] 石鶴坤, 張宏, 杜青云, 等. 三種高脂乳劑誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性大鼠高脂血癥模型的比較 [J]. 中國比較醫(yī)學(xué)雜志, 2012, 22(9): 55-57.

[23] Tai C J, Choong C Y, Shi Y C,.protects against hepatic fibrosis via suppression of hyperglycemia in high-fat/ethanol diet-induced rats [J]., 2016, 21(3): 269.

[24] 李紅品, 朱虹宇, 高興, 等. 基于特異質(zhì)大鼠膽紅素相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)體功能抑制探討首烏藤肝損傷機(jī)制 [J]. 中國中藥雜志, 2017, 42(18): 3591-3595.

[25] 丁曉潔, 王佑民, 王麗萍. 高脂飲食對大鼠肝臟組織AMPK表達(dá)及其活性的影響 [J]. 安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2009, 44(6): 680-683.

[26] 王春彬, 高大中. 高脂血癥兔主動脈NF-κB、VCAM-1和VEGF的表達(dá)及氟伐他汀的影響 [J]. 中國心血管病研究, 2008(5): 379-382.

[27] 肖璐. 化濕祛濁方通過SREBP1、PPARα調(diào)節(jié)甘油三酯代謝的機(jī)制研究 [D]. 北京: 北京中醫(yī)藥大學(xué), 2016.

[28] 雷宇, 秦玲, 汲宏磊, 等. 動脈粥樣硬化兔血清中血管細(xì)胞黏附分子-1的表達(dá)及其與血脂相關(guān)性的研究 [J]. 中國老年學(xué)雜志, 2006, 26(4): 532-534.

[29] 彭小麗. 辛伐他汀在穩(wěn)定血液透析患者的藥物代謝動力學(xué)特征分析 [J]. 中國處方藥, 2014, 12(12): 36-37.

[30] 史欣. 基于辛伐他汀對厄貝沙坦藥代動力學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)探索 [J]. 中國醫(yī)藥指南, 2014, 12(31): 69-70.

Effect of liposoluble parts fromon lipid metabolism and liver in hyperlipidemia rats

WANG Qing-hu, AO Su-ri-gu-ga, BAO Wen-lin, HE Xiang, XU Yan-hua

College of Traditional Mongolian Medicine, Inner Mongolia University for Nationalities, Tongliao 028000, China

To study the effect of liposoluble parts fromon lipid metabolism and liver in hyperlipidemia rats.High-fat emulsion was used to establish a rat model of hyperlipidemia, and simvastatin or liposoluble parts fromwere given for intervention, changes in body weight and appearance of liver were observed. Levels of triglyceride (TG), total cholesterol (TC), high density lipoprotein cholesterol (HDL-C), low density lipoprotein cholesterol (LDL-C), total bilirubin (TBIL), direct bilirubin (DBIL) and activities of alkaline phosphatase (ALP), aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT) in serum of rats were detected by automatic biochemical analyzer; Hematoxylin-eosin (HE) staining was used to observe the pathological changes in liver tissue of rats in each group; Immunohistochemical method was used to detect protein expressions of adenosine monophosphate-activated protein kinase α (AMPKα), sterol regulatory element binding protein-1 (SREBP-1) and vascular cell adhesion molecule 1 (VCAM 1) in liver tissue of rats in each group.Compared with model group, on 30th day of administration, body weight of rats in liposoluble parts fromgroup was significantly decreased (< 0.05); Liver of rats was dark red in color, slightly smaller in size, smooth in surface, light in greasy feeling, and in liver lobules, structure was intact, no lipid droplets, fatty degeneration, vacuolar degeneration were seen, and a small amount of inflammatory cell infiltration was seen; TC, TG and LDL-C levels in serum were significantly decreased (< 0.01), and HDL-C level was significantly increased (< 0.05); SREBP-1 and VCAM1 protein expressions in liver tissue of rats were significantly decreased (< 0.05), and AMPKα protein expression was significantly increased (< 0.05).Liposoluble parts fromhas significant blood lipid-regulating and liver-protecting effects in hyperlipidemia rats, and its mechanism may be through regulating the expressions of AMPKα, SREBP1 and VCAM1 proteins, thereby regulating TC, TG, LDL-C and HDL-C levels in blood lipids, maintain lipid metabolism balance in body and avoid liver lipidation.

liposoluble parts fromLinn.; hyperlipidemia; blood lipid; liver function; lipid metabolism

R285.5

A

0253 - 2670(2022)11 - 3402 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.11.016

2022-02-15

內(nèi)蒙古自治區(qū)科技計劃項(xiàng)目（2019GG118）

王青虎，博士生導(dǎo)師，教授，研究方向?yàn)槊伤幱行镔|(zhì)基礎(chǔ)及其藥理研究。Tel: 15894890037 E-mail: wqh693@163.com

[責(zé)任編輯 李亞楠]